أجار إسكولين الصفراوي: الأساس المنطقي والتحضير والاستخدامات - مادة الاحياء - 2025

و الصفراء الإسكولين أجار هو انتقائية والمتوسطة التفاضلية الثقافة الصلبة. يتم استخدامه كاختبار تشخيصي لتحديد قدرة كائن حي دقيق معين على النمو في وسط يحتوي على الصفراء وأيضًا تكسير الجلوكوزيد إسكولين إلى إسكوليتين وجلوكوز.

يستخدم هذا الاختبار التشخيصي لتمييز الأنواع من جنس Streptococcus التي تنتمي إلى المجموعة D (الصفراء إسكولين إيجابية) ، من مجموعات أخرى من Streptococcus التي تتفاعل سلبًا مع هذا الاختبار.

صفيحة أجار الصفراء إسكولين ، المصنفة بسلالة المكورات المعوية (اختبار إيجابي). المصدر: لم يتم تقديم مؤلف يمكن قراءته آليًا. يفترض Philippinjl (بناء على مطالبات حقوق النشر).

وتجدر الإشارة إلى أن بعض المكورات العقدية من مجموعة viridans يمكنها تحلل الإسكولين المائي ، لكنها غير قادرة على النمو في وجود الصفراء بتركيز 40٪ ، لذلك يكون رد فعل هذه المجموعة سالبًا في هذا الوسط.

من ناحية أخرى ، يعتبر وسيط esculin الصفراء مفيدًا أيضًا في تشخيص أنواع Listeria monocytogenes أو Aerococcus sp ، نظرًا لأن هذه الكائنات الحية الدقيقة إيجابية Esculin.

يتكون Esculin Bile Agar من الببتون ، ومستخلص اللحوم ، و ox bile ، و esculin ، وسيترات الحديد ، والأجار ، والماء المقطر. تحتوي بعض البيوت التجارية على أزيد الصوديوم ضمن تكوين الوسط.

يمكن تحضير الوسط في المختبر إذا كان لديك كل المركبات بشكل منفصل أو يمكن تحضيره من الوسط التجاري المجفف.

أساس

يحتوي وسط الصفراء إسكولين على بيبتون وخلاصة اللحوم ، وكلا المركبين يوفران العناصر الغذائية الضرورية لنمو الكائنات الحية الدقيقة.

يحتوي أيضًا على الإسكولين ؛ هذا المركب عبارة عن جليكوسيد يتكون من اتحاد أحادي السكاريد البسيط (الجلوكوز) مع مركب يسمى 6،7-ثنائي هيدروكسي كومارين أو إسكوليتين (أغلوكون) ، مرتبط برابطة أسيتال أو جلوكوزيد.

يعتمد الاختبار على إظهار ما إذا كانت البكتيريا قادرة على التحلل المائي للإسكولين. في حالة حدوث ذلك ، يتحلل الإسكولين إلى إسكوليتين وجلوكوز. يتفاعل Esculetina مع الحديد الموجود في الوسط ، مكونًا مركب بني داكن ، أسود تقريبًا.

هذا يعني أن سترات الحديديك تعمل كمطور رد فعل. هذه الخاصية تجعل Bile Esculin Agar وسيطًا تفاضليًا.

من جانبها ، تعتبر الصفراء مثبطًا يمنع نمو بعض الكائنات الحية الدقيقة ، لذلك ، يجب أن تكون البكتيريا ، قبل تقسيم الإسكولين ، قادرة على النمو في وجود الصفراء. لذلك ، تعتبر هذه الوسيلة انتقائية.

البكتيريا التي يمكن أن تتطور في هذه البيئة هي بشكل أساسي تلك التي تعيش في البيئة المعوية.

بهذا المعنى ، تضيف بعض الشركات التجارية أزيد الصوديوم إلى الوسط لتثبيط نمو العصيات المعوية سلبية الجرام ، مما يزيد من انتقائية الوسط لنمو العقدية.

أخيرًا ، يعطي الأجار الاتساق الصلب للوسط والماء هو مذيب المركبات.

تجهيز

التحضير المنزلي لأجار الإسكولين الصفراوي

لوزن:

5 جرام بيبتون

3 غرام من مستخلص اللحم

40 غرام من لحم البقر

1 غرام من الإسكولين

0.5 غرام من سترات الحديد

15 جرام أجار

1000 مل ماء مقطر

في حالة إضافة أزيد الصوديوم ، يزن 0.25 جم / لتر ويضاف إلى الخليط.

تذوب المكونات في لتر الماء المقطر ، وتسخينها حتى تذوب المركبات تمامًا. وزع 5 مل في أنابيب اختبار ذات غطاء لولبي مقاس 16 × 125 مم. الأوتوكلاف عند 121 درجة مئوية ، ضغط 15 رطلاً لمدة 15 دقيقة.

أخرجها من الأوتوكلاف وقم بإمالة الأنابيب على دعامة ، بحيث يصلب الأجار في منقار واسع.

يحفظ في الثلاجة لحين الاستخدام. أحضره إلى درجة حرارة الغرفة قبل البذر.

يمكن أيضًا تحضير لوحات أجار إسكولين الصفراوية ؛ في هذه الحالة ، يتم تعقيم الخليط بأكمله في دورق ثم يتم توزيعه في أطباق بتري المعقمة. دعها تتصلب وتخزن في الثلاجة.

يجب أن يكون الرقم الهيدروجيني للوسط 6.6 ± 0.2.

تحضير أجار الإسكولين الصفراوي من وسط تجاري

وزن المبلغ المحدد في الملحق. يمكن أن يختلف هذا من بيت أعمال إلى آخر. بعد ذلك ، تابع نفس الإجراء الموضح أعلاه.

يجب أن يكون الرقم الهيدروجيني للوسط 6.6 ± 0.2. لون الوسط المجفف بيج فاتح والوسط المحضر كهرماني غامق.

متوسطة إسكولين الصفراء التجارية. المصدر: صورة التقطها المؤلف ماجستير. مارييلسا جيل.

التطبيقات

يتم استخدام وسيط esculin الصفراء بشكل أساسي للتمييز بين المجموعة D Streptococcus (الصفراء إيجابية esculin) ، عن بقية مجموعات Streptococcus (الصفراء esculin سلبي).

يمكن أن يؤدي الجمع بين اختبار نمو المرق شديد الملوحة مع اختبار إسكولين الصفراء إلى تحديد مجموعة خاصة من المكورات العقدية من المجموعة د تسمى Enterococcus.

تنتمي هذه المجموعة الخاصة من Streptococcus إلى المجموعة D من الجنس المذكور أعلاه وهي قادرة على التحلل المائي للإسكولين في وجود الصفراء كما يفعل باقي أعضاء المجموعة D ، ولكنها أيضًا قادرة على التطور في وسط شديد الملوحة (BHI مع كلوريد من 6.5٪ صوديوم) ، خاصية تحدث الفارق.

لذلك ، تسمى المكورات العقدية التي تتحلل مادة الإسكولين الصفراوية ولكنها لا تنمو في مرق مفرط الملوحة بالمكورات العقدية غير المعوية المجموعة د.

زرعت

يُفضل تلقيح الوسط من مرق Todd-Hewitt النقي لمدة 24 ساعة.

أضف قطرتين إلى سطح الوسط باستخدام ماصة باستير وانتشر في الوسط بحلقة بلاتينية.

احتضان عند 35 درجة مئوية لمدة 48 ساعة ، بينما يتم استيفاء وقت الحضانة ، يمكن مراقبتها لمعرفة ما إذا كان هناك رد فعل إيجابي. إذا ظل رد الفعل في نهاية الوقت سالبًا ، فيمكن احتضانه لمدة تصل إلى 72 ساعة.

ترجمة

رد فعل إيجابي: ظهور لون بني غامق ، أسود تقريبًا في منقار الفلوت (في حالة اختبار الأنبوب) أو اسوداد الأجار حول المستعمرات (في حالة اختبار الصفيحة).

رد فعل سلبي: لا يحدث اسوداد للوسط أو ظهور مظهر أسود في أقل من نصف الأنبوب بعد 72 ساعة من الحضانة. من ناحية أخرى ، يجب اعتبار النمو البكتيري في الوسط دون ظهور اللون الأسود اختبارًا سلبيًا.

سؤال وجواب

لتقييم جودة الوسط ، يجب أن تكون سلالة Enterococcus faecalis ATCC 29212 متاحة كعنصر تحكم إيجابي وسلالة Streptococcus لا تنتمي إلى المجموعة D كعنصر تحكم سلبي.

محددات

- الوسائط التي لا تحتوي على أزيد الصوديوم تسمح بنمو العصيات المعوية سالبة الجرام. يمكن لبعض منهم تشويه الوسط.

- تضيف بعض البيوت التجارية تركيزًا منخفضًا من الصفراء (10٪) ولهذا السبب يمكن لبعض المكورات العقدية التي لا تنتمي إلى المجموعة D أن تتطور في الوسط وتتحلل بالماء مما قد يؤدي إلى حدوث أخطاء في التفسير.

المراجع

1. Koneman E ، Allen S ، Janda W ، Schreckenberger P ، Winn W. (2004). التشخيص الميكروبيولوجي. 5th إد. التحرير Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B، Sahm D، Weissfeld A. (2009). بيلي وسكوت التشخيص الميكروبيولوجي. 12 إد. التحرير Panamericana SA Argentina.
3. ماك فادن ج. (2003). الاختبارات البيوكيميائية لتحديد البكتيريا ذات الأهمية السريرية. الطبعة الثالثة. افتتاحية بان أميريكانا. بوينس ايرس. الأرجنتين.
4. معمل بريتانيا. Esculin الصفراء مع أزيد أجار. 2015 متاح على: britanialab.com
5. "Bile Esculin Agar." ويكيبيديا، الموسوعة الحرة. 22 أغسطس 2017 ، 17:30 بالتوقيت العالمي المنسق. 22 أبريل 2019، 17:35. es.wikipedia.org.
6. مختبرات Bd. 2015 متاح على: bd.com
7. مختبرات نيوجين. أجار الصفراء إسكولين. متاح على: foodafety.neogen.com