و أجار سيمونز سيترات هو وسيلة صلبة تستخدم الكائنات الحية الدقيقة اختبار تحديد الكيمياء الحيوية، وخاصة غرام - العصيات السلبية. تم إنشاء الوسيط الأصلي بواسطة Koser في عام 1923.
يتكون وسط سيترات كوسر من مرق يحتوي على فوسفات الصوديوم وفوسفات الأمونيوم وفوسفات أحادي البوتاسيوم وكبريتات المغنيسيوم وسيترات الصوديوم.
A. المجففة Simmons Citrate Agar المتوسط التجاري B. إعداد Simmons Citrate Agar. المصدر: A. صورة التقطها MSc. Marielsa Gil B. Roto2esdios ، من ويكيميديا كومنز
كما يتضح ، فإن المصدر الوحيد للكربون في الوسط هو السترات ، والنيتروجين هو فوسفات الأمونيوم ، مع حذف البروتينات والكربوهيدرات كمصدر لهذه العناصر ، فهي موجودة بشكل شائع في الوسائط الأخرى.
لذلك ، لا يمكن للبكتيريا التي يتم تلقيحها في هذا الوسط التكاثر إلا إذا كانت قادرة على امتصاص الكربون من السترات. كان الاختبار إيجابيًا إذا كان هناك عكارة في الوسط ، ومع ذلك فقد كان له عيب يتمثل في إمكانية حدوث تعكر غير محدد.
تم حل هذه المشكلة بواسطة Simmons عن طريق إضافة bromothymol blue و agar إلى صيغة Koser الأصلية. على الرغم من أن المبدأ هو نفسه ، إلا أنه يتم تفسيره بشكل مختلف.
أساس
تتمتع بعض البكتيريا بالقدرة على البقاء في حالة عدم التخمير أو إنتاج حمض اللاكتيك ، مما يتطلب الحصول على الطاقة من خلال استخدام ركائز أخرى. في هذا الاختبار ، يكون مصدر الكربون الوحيد هو السترات.
البكتيريا القادرة على البقاء على قيد الحياة في ظل هذه الظروف تستقلب السترات بسرعة كبديل للطريق التقليدي ، باستخدام دورة حمض الكربوكسيليك أو دورة تخمير السترات.
تقويض السترات بواسطة البكتيريا ينطوي على آلية إنزيمية دون تدخل الإنزيم المساعد أ. يُعرف هذا الإنزيم باسم الستريكاز (سترات أوكسالأسيتات لياز) أو سترات ديسمولاز. يتطلب التفاعل وجود كاتيون ثنائي التكافؤ ، والذي يتم توفيره في هذه الحالة بواسطة المغنيسيوم.
يولد التفاعل oxaloacetate و pyruvate ، مما يؤدي بعد ذلك إلى ظهور أحماض عضوية في منتصف الأس الهيدروجيني القلوي المتكون من استخدام مصدر النيتروجين. تُستخدم هذه الأحماض العضوية كمصدر للكربون يولد الكربونات والبيكربونات ، مما يؤدي إلى زيادة قلوية البيئة.
وضع البذر
يجب تلقيح وسط سترات سيمونز بشكل طفيف في ذيل السمكة باستخدام حلقة أو إبرة مستقيمة ، واحتضانها لمدة 24 ساعة عند 35-37 درجة مئوية. بعد مرور الوقت ، يتم ملاحظة النتائج.
يتم البذر فقط على سطح الآجار. لا تثقب.
ترجمة
إذا ظل الوسيط باللون الأصلي (الأخضر) ولم يكن هناك نمو مرئي ، يكون الاختبار سلبيًا ، أما إذا تحول الوسيط إلى اللون الأزرق ، فهذا يشير إلى وجود منتجات قلوية ، يتم الكشف عنها بواسطة مؤشر الأس الهيدروجيني. في هذه الحالة يكون الاختبار إيجابيًا.
السيترات (+) و (-). المصدر: ماجستير. مارييلسا جيل
يحدث هذا لأنه إذا كانت البكتيريا تستخدم الكربون من السترات ، فإنها أيضًا قادرة على امتصاص النيتروجين من فوسفات الأمونيوم الذي تطلق به الأمونيا ، مما يؤدي إلى قلونة الوسط.
من ناحية أخرى ، إذا لوحظ نمو البكتيريا في الوسط ، ولكن لم يكن هناك تغيير في اللون ، فيجب أيضًا اعتبار الاختبار إيجابيًا ، لأنه إذا كان هناك نمو ، فهذا يعني أن البكتيريا كانت قادرة على استخدام السترات كمصدر للكربون ، على الرغم من عدم وجود تغيير في درجة الحموضة في الوقت الحالي (قد يستغرق الأمر وقتًا في بعض الأحيان).
إذا كان هناك أي شك في تفسير اللون النهائي ، فيمكن مقارنته بأنبوب السترات غير الملقح.
تجهيز
تزن 24.2 جم من الوسط المجفف لكل لتر من الماء. امزجيها واتركيها ترتاح لمدة 5 دقائق تقريبًا. قم بإنهاء إذابة الوسط بالتسخين لمدة دقيقة أو دقيقتين ، ثم رجّه بشكل متكرر.
صب 4 مل في أنابيب الاختبار والأوتوكلاف عند 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. عند مغادرة الأوتوكلاف ، قم بالميل بمساعدة دعامة بطريقة تجعل الأجار يصلب على شكل منقار الفلوت مع كتلة صغيرة أو أسفل وأكثر شطبة.
الرقم الهيدروجيني النهائي لوسط السترات هو 6.9 (اللون الأخضر). هذا الوسط حساس للغاية للتغيرات في درجة الحموضة.
عند درجة الحموضة 6 أو أقل ، يتحول الوسط إلى اللون الأصفر. لم يتم ملاحظة هذا اللون في اختبار البكتيريا.
وعند درجة الحموضة 7.6 أو أعلى ، يتحول الوسط إلى اللون الأزرق البروسي العميق.
استعمال
يستخدم Simmons Citrate Agar لتحديد بعض الكائنات الحية الدقيقة ، وخاصة العصيات التي تنتمي إلى عائلة Enterobacteriaceae وعصيات أخرى غير مخمرة غير الجلوكوز.
المصدر: Koneman E، Allen S، Janda W، Schreckenberger P، Winn W. (2004). التشخيص الميكروبيولوجي. 5th إد. التحرير Panamericana SA Argentina.
افكار اخيرة
يعد Simmons Citrate Medium اختبارًا دقيقًا للغاية ، حيث يمكن الحصول على إيجابيات خاطئة في حالة حدوث أخطاء معينة.
الرعاية التي يجب أخذها هي التالية:
تلقيح
لا ينبغي عمل لقاح بكتيري كثيف جدًا أو محمّل ، حيث يمكن أن يتسبب في ظهور لون أصفر نحاسي في مكان البذر ، دون التأثير على بقية الوسط ، ولكن يمكن أن يؤدي إلى الاعتقاد بوجود نمو. لا يعني ذلك إيجابية الاختبار.
أيضًا ، يمكن أن ينتج عن اللقاح السميك نتيجة إيجابية خاطئة ، لأن المركبات العضوية المتكونة داخل جدران الخلايا للبكتيريا المحتضرة يمكن أن تطلق ما يكفي من الكربون والنيتروجين لتحويل مؤشر الأس الهيدروجيني.
لذلك ، فإن الطريقة المثالية هي زرع الإبرة بدلاً من المقبض البلاتيني لتجنب أخذ المواد الزائدة.
زرعت
من ناحية أخرى ، عندما يتم زرع مجموعة الاختبارات البيوكيميائية لتحديد الكائن الدقيق المعني ، من المهم أن يكون اختبار السترات هو أول اختبار يتم تلقيحه ، لتجنب ترحيل البروتينات أو الكربوهيدرات من وسط آخر.
في ظل هذه الظروف ، من الممكن الحصول على نتيجة إيجابية خاطئة ، لأن أيًا من هذه المواد التي يتم إدخالها عن طريق الخطأ سيتم استقلابه وسيؤدي إلى تغيير في درجة الحموضة.
هناك طريقة أخرى لتجنب ترحيل المواد وهي حرق الحلقة جيدًا وأخذ لقاح جديد بين اختبار وآخر.
يجب أيضًا توخي الحذر عند لمس المستعمرة لإجراء اللقاح ، حيث يجب تجنب سحب جزء من الأجار من الثقافة التي تأتي منها البكتيريا ، بسبب ما تم توضيحه أعلاه.
بهذا المعنى ، يوصي ماتسن وشيريس وبرانسون بتخفيف اللقاح في المحلول الفسيولوجي قبل تلقيح اختبار السترات لتجنب انتقال مصادر الكربون الأخرى.
كثافة اللون
يجب أن يؤخذ في الاعتبار أن شدة اللون الناتج عندما يكون الاختبار إيجابيًا قد تختلف وفقًا للمنزل التجاري.
بالإضافة إلى ذلك ، هناك كائنات دقيقة تظهر نتيجة اختبارها إيجابية خلال 24 ساعة ، ولكن هناك سلالات أخرى تتطلب 48 ساعة أو أكثر لإحداث تغيير في درجة الحموضة.
المراجع
- ماك فادن ج. (2003). الاختبارات البيوكيميائية لتحديد البكتيريا ذات الأهمية السريرية. الطبعة الثالثة. افتتاحية بان أميريكانا. بوينس ايرس. الأرجنتين.
- Forbes B، Sahm D، Weissfeld A. (2009). بيلي وسكوت التشخيص الميكروبيولوجي. 12 إد. التحرير Panamericana SA Argentina.
- Koneman E ، Allen S ، Janda W ، Schreckenberger P ، Winn W. (2004). التشخيص الميكروبيولوجي. 5th إد. التحرير Panamericana SA Argentina.
- مختبرات BD. BBL Simmons Citrate Agar Slants. 2015 متاح على: bd.com
- مختبرات بريتانيا. Simmons Citrate Agar. 2015 متاح على: britanialab.com
- مختبرات التشخيص Valtek. Simmons Citrate Agar. 2016 متوفر على: andinamedica.com.