كليد أجار: الأساس المنطقي والاستخدامات والتحضير - مادة الاحياء - 2025

و أجار CLED (سيستين من اللاكتوز-بالكهرباء-ناقص) هو صلب التفاضلية مستنبت، وتستخدم لتشخيص التهابات المسالك البولية. تم تصميم تركيبة وسط الاستزراع من أجل النمو الجيد لمسببات الأمراض البولية وهي مثالية لتقدير وحدات تكوين المستعمرات (CFU).

وسط استنبات CLED غير انتقائي ، حيث يمكن أن تنمو فيه الكائنات الحية الدقيقة سلبية الجرام وإيجابية الجرام. لكن هذه ليست مشكلة ، لأن معظم التهابات المسالك البولية تنتج عن نوع واحد فقط من الكائنات الحية الدقيقة.

أجار CLED

في حالة الإصابة بالعدوى متعددة الميكروبات ، يمكن الحصول على 2 أو 3 بكتيريا مختلفة ، ولكنها نادرة جدًا وفي معظم الأحيان تكون عينات ملوثة.

من بين البكتيريا سالبة الجرام التي يمكن أن تنمو في هذا الوسط هي العصيات التي تنتمي إلى عائلة Enterobacteriaceae وغيرها من العصيات المعوية ، وأكثر مسببات الأمراض البولية المعزولة في عينات البول هي: Escherichia coli ، Klebsiella pneumoniae ، Proteus mirabilis ، Morganella morganii ، Pseudomonas aeruginosa وغيرها.

وبالمثل ، من بين البكتيريا موجبة الجرام التي يمكن أن تنمو في هذا الوسط ، Staphylococcus aureus ، Staphylococcus saprophyticus ، Enterococcus faecalis ، Streptococcus agalactiae ، Corynebacterium sp ، Lactobacillus sp وحتى الخمائر ، مثل مجمع Candida albicans ، يمكن أن تنمو.

ومع ذلك ، نظرًا للتركيب الكيميائي للوسط ، فإنه لا يسمح بنمو بعض مسببات الأمراض البولية التناسلية ، مثل النيسرية البنية ، وغاردنريلا المهبل ، وغيرها.

CLED Agar الأساس المنطقي

يحتوي وسط استزراع CLED على مستخلص اللحم ، تحلل البنكرياس للكازين وتحلل الجيلاتين كمصدر للطاقة. أنها توفر العناصر الغذائية لتطوير البكتيريا المتساهلة.

كما أنه يحتوي على السيستين ، وهو حمض أميني يسمح بنمو القولونيات التي يمكن تمييزها بحجمها الصغير.

وبالمثل ، فإنه يحتوي على اللاكتوز باعتباره كربوهيدرات قابلة للتخمر ، ولهذا السبب فإن هذه الوسيلة تفاضلية ؛ القدرة على تمييز البكتيريا المخمرة عن التخمير غير اللاكتوز.

تتسبب البكتيريا المخمرة في تغيير درجة الحموضة في الوسط عن طريق إنتاج الأحماض ، مما يؤدي إلى تكوين مستعمرات صفراء ، في حين أن البكتيريا غير المخمرة لا تولد تغييرات في الوسط ، وبالتالي فإنها تأخذ لون أجار الأصلي ، الأخضر.

تم الكشف عن تفاعل التخمير بفضل وجود مؤشر الأس الهيدروجيني ، والذي يكون في هذا الوسط أزرق بروموثيمول.

من ناحية أخرى ، فإن تركيز الإلكتروليت المنخفض في الوسط يثبط النمو الغازي النموذجي لجنس المتقلبة ، والذي يسمى تأثير التجمع. هذا يولد ميزة على الوسائط الأخرى ، لأنه يسمح بحساب CFUs ، بما في ذلك إذا كان جنس Proteus موجودًا.

ومع ذلك ، فإن انخفاض تركيز الإلكتروليتات يثبط نمو بعض الأنواع من جنس الشيغيلة ، وهذا يعد عيبًا مقارنة بالوسائط الأخرى.

الأساس المنطقي لـ CLED agar (Bevis)

هناك متغير أو تعديل لهذه الوسيلة بواسطة Bevis ، الذي قام بدمج حمض fuchsin (مؤشر Andrade) في التكوين الأصلي. وهو يعمل جنبًا إلى جنب مع الأزرق البروموثيمول للتمييز بين التخمير والبكتيريا غير المخمرة.

الفرق بين الوسط التقليدي والمتوسط ​​هو اللون الذي تأخذه المستعمرات. في حالة البكتيريا التي تخمر اللاكتوز ، تتحول المستعمرات إلى اللون البرتقالي المحمر مع هالة وردية أو حمراء ، بينما تكون المستعمرات غير المخمرة رمادية مزرقة.

التطبيقات

يستخدم أجار CLED حصريًا لبذر عينات البول. يتكرر استخدام هذه الوسيلة بشكل خاص في المختبرات الأوروبية ، بينما في أمريكا أقل استخدامًا.

يجب أن يستوفي جمع العينات معايير معينة للحصول على نتائج موثوقة ، بما في ذلك:

• عدم تناول المضادات الحيوية قبل أخذ العينات.
• يفضل أخذ البول أول شيء في الصباح ، حيث أنه أكثر تركيزاً ، حيث لا يمكن أخذ العينة بالطرق الغازية.
• اغسل الأعضاء التناسلية جيدًا قبل أخذ العينة.
• تخلص من تيار التبول الأول ثم ضع الحاوية.
• اجمع 25 إلى 30 مل من البول في وعاء معقم جيد الملصقات.
• خذ على الفور إلى المختبر محاطًا بالثلج.
• يجب معالجتها في غضون ساعتين من إصدارها أو تبريدها عند 4 درجات مئوية لمدة أقصاها 24 ساعة.

بذر عينات البول

يجب تخفيف عينة البول بنسبة 1:50.

للتخفيف ، يوضع 0.5 مل من بول المريض ويخفف بـ 24.5 مل من المحلول الفسيولوجي المعقم.

قم بقياس 0.1 مل من البول المخفف وانتشار السطح باستخدام ملعقة drigalski على وسط CLED. هذه هي أفضل طريقة بذر لعد الطوائف. لهذا السبب يتم استخدامه في عينات البول ، حيث يجب التعبير عن النتائج بوحدة CFU / ml.

لتقدير عدد المستعمرات التي تم الحصول عليها ، اتبع ما يلي: عد المستعمرات على اللوحة واضرب في 10 ثم في 50. هذا يعطيك كمية CFU / مل من البول.

ترجمة

يزيد عن 100000 وحدة تشكيل مستعمرة / مل- يشير إلى عدوى المسالك البولية

العد أقل من 1000 CFU / ml- لا عدوى

يحسب ما بين 1000-10،000 CFU / ml- مشكوك فيه ، تلوث محتمل ، كرر أخذ العينات.

هوية شخصية

يجب أن تحتوي المستعمرات المزروعة على أجار CLED على جرام واعتمادًا على الخصائص المورفوتينتورية للكائن الدقيق ، يتم إجراء ثقافة فرعية معينة.

على سبيل المثال ، إذا كانت عصية سالبة الجرام ، فسيتم زرعها على أجار MacConkey ، حيث يتم تأكيد تخمير اللاكتوز أو عدمه. بالإضافة إلى ذلك ، يتم إرفاق أجار المغذيات لإجراء اختبار أوكسيديز.

في حالة كشف الجرام عن الكوتشي الموجب للجرام ، يمكن زراعته على أجار المانيتول المالح وأجار المغذيات. في الأخير ، يتم إجراء اختبار الكاتلاز. أخيرًا ، إذا لوحظت الخمائر ، فسيتم زرعها في سابورو أجار.

تتجنب العديد من المعامل استخدام وسط CLED ويفضل فقط استخدام أجار الدم و MacConkey وأجار المغذيات لبذر عينات البول.

تجهيز

في دورق به لتر واحد من الماء المقطر ، قم بإذابة 36.2 جم من مسحوق أجار CLED. بعد 5 دقائق من الوقوف ، قم بتسخين الأجار المعلق ، واخلطه باستمرار حتى يغلي لمدة دقيقة واحدة.

ثم عقم عند 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة في الأوتوكلاف. في نهاية الوقت ، يتم إزالته من الأوتوكلاف ويترك ليبرد إلى درجة حرارة 45 درجة مئوية. بعد ذلك ، يتم تقديم 15-20 مل في كل طبق بتري معقم.

يجب إجراء عملية تقديم اللوحة داخل غطاء التدفق الصفحي أو أمام موقد بنسن لتجنب التلوث.

تُترك الأطباق المقدمة لتتجمد وترتب في رف مقلوب وتخزن في الثلاجة (2-8 درجة مئوية) حتى الاستخدام.

يجب أن يكون الرقم الهيدروجيني النهائي للوسط المحضر 7.3 ± 0.2.

المراجع

1. توصيات للتشخيص الميكروبيولوجي لعدوى المسالك البولية. تشيل. إنفكتول. 2001 ؛ 18 (1): 57-63. متاح على: scielo.org.
2. Panchi J. تحديد العامل الميكروبي الذي يسبب التهابات المسالك البولية في المرضى الداخليين الذين يخضعون لقسطرة المثانة. 2016. العمل الجامعي للتأهل لدرجة البكالوريوس في المختبر الإكلينيكي. جامعة أمباتو التقنية. الاكوادور.
3. مختبرات بريتانيا. متوسط ​​CLED. متاح على: britanialab.com.
4. مختبرات رينيلاب. تعليمات الاستخدام ، CLED Agar. 2013 متاح على: es.renylab.ind.br.
5. المعامل المثقفة. الدليل الأساسي لعلم الأحياء الدقيقة. متاح على: ictsl.net.
6. Muñoz P، Cercenado E، Rodríguez-Créixems M، Díaz MD، Vicente T، Bouza E. خيار أجار CLED في روتين زراعة البول. تقييم مستقبلي ومقارن. تشخيص Microbiol تصيب ديس. 1992 ؛ 15 (4): 287-90.
7. García P، Paredes F، Fernández del Barrio M. (1994). علم الأحياء الدقيقة السريرية العملي. جامعة قادس الطبعة الثانية. خدمة منشورات UCA.