حبة أجار القياسية: الأساس المنطقي والتحضير والاستخدامات - مادة الاحياء - 2025

و أجار عدد قياسي هو الصلبة، مستنبت غير انتقائي، والمصممة لتقدير حجم والهوائية الميكروبي تحميل موجود في عينات من مياه الشرب ومياه الصرف الصحي والمشروبات الألبان، من بين غيرها من الأطعمة. تُعرف هذه الوسيلة أيضًا باسم أجار PCA ، لاختصارها في English Plate Count Agar. تم إنشاؤه عام 1953 بواسطة Buchbinder و Baris و Goldstein.

يتكون وسط أجار العد القياسي من مستخلص الخميرة ، التريبتين ، الجلوكوز ، أجار ، والماء المقطر. تحتوي هذه الصيغة على العناصر الغذائية الأساسية التي تسمح بتطوير الحمل الميكروبي الهوائي الحالي ، وليس متطلبًا.

التخفيفات العشرية لحساب CFUs في أعداد أجار القياسية. المصدر: كوينتين جايسمان

نظرًا لأن الوسط لا يحتوي على مثبطات ، يمكن للبكتيريا أن تنمو دون أي قيود ، مما يجعلها مثالية لعد المستعمرات العامة. ومع ذلك ، فإن تقنية تحديد كمية الألواح لن تكتشف جميع البكتيريا الموجودة ، ولكن فقط تلك القادرة على النمو في ظل الظروف البيئية التي يتعرض لها أجار العد القياسي المصنف.

وبهذا المعنى ، فإن تقنية القياس الكمي للوحة تسعى عمومًا إلى تحديد كمية البكتيريا من النوع الهوائي الوسطي ، أي تلك التي تتطور عند درجات حرارة تتراوح بين 25 و 40 درجة مئوية ، مع درجة حرارة نمو مثالية تبلغ 37 درجة مئوية..

هذه المجموعة البكتيرية مهمة جدًا ، لأن معظم البكتيريا الممرضة للإنسان توجد هناك.

وتجدر الإشارة إلى أنه في بعض الأحيان قد يكون من المثير للاهتمام تحديد كمية البكتيريا المحبة للنفسية الموجودة في الطعام. هذه البكتيريا هي تلك التي تنمو في درجات حرارة منخفضة (أقل من 20 درجة مئوية) وهي مسؤولة عن التسبب في تحلل الطعام بشكل أسرع ، حتى عند تبريده.

وبالمثل ، يمكن أن تكون البكتيريا المحبة للحرارة ، التي تتطور في نطاق يتراوح بين 50 درجة مئوية إلى 80 درجة مئوية أو أكثر ، مهمة في أنواع معينة من الأطعمة مثل الأطعمة المعلبة.

يتم التعبير عن التقدير الكمي الميكروبي في وحدات تشكيل المستعمرة (CFU) لكل جرام أو مليلتر من العينة.

أساس

تم تصميم وسيط العد القياسي للسماح بالنمو الناجح للبكتيريا الهوائية غير سريعة التحمل حيث يوفر مستخلص الخميرة والتريبتين والجلوكوز العناصر الغذائية اللازمة لنمو ميكروبي جيد.

من ناحية أخرى ، يكون للوسط لون فاتح ومظهر شفاف ، وهذا هو السبب في أنه مثالي لتصور المستعمرات التي طورتها طريقة البذر العميق (صب لوحة).

من الممكن أيضًا عد المستعمرة باستخدام طريقة البذر السطحي للملعقة Drigalski.

عندما يكون الحمل الميكروبي مرتفعًا ، يجب إجراء التخفيفات العشرية لعينة الدراسة حتى تتمكن من حساب وحدات CFU.

وتجدر الإشارة إلى أن هذه الوسيلة موصى بها من قبل جمعية الصحة العامة الأمريكية (APHA) لحساب الوسطيات الهوائية.

تجهيز

يزن 23.5 جم من الوسط المجفف ويذوب في لتر من الماء المقطر. لكي يذوب الخليط تمامًا ، يجب تسخينه عن طريق التقليب المتكرر حتى يغلي. تعتمد الخطوات اللاحقة اللاحقة على تقنية البذر المراد استخدامها.

لتقنية لوحة الصب

قم بالتوزيع عن طريق صرف 12 إلى 15 مل في أنابيب الاختبار. بعد ذلك ، قم بالتعقيم في الأوتوكلاف عند 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. السماح لتجميد عموديا في شكل كتلة. يحفظ في الثلاجة لحين الاستخدام.

قم بإذابة القابس عندما ستستخدمه. بمجرد الذوبان ، احتفظ بها في حمام مائي عند 44-47 درجة مئوية أثناء تحضير العينات.

للبذر السطحي

تعقيم الوسيط في الأوتوكلاف عند 121 درجة مئوية ثم وزع 20 مل في أطباق بتري المعقمة. دعها تتصلب ، تقلب وتخزن في الثلاجة لحين الاستخدام.

تهدئة الألواح قبل الاستخدام. يجب أن يكون الأس الهيدروجيني للوسط 7.0 ± 0.2.

استعمال

يستخدم الكونت أجار القياسي في تقنية العد الهوائية المتوسطة أثناء التحليل الميكروبيولوجي للماء والغذاء. يعد عدد الميسوفيلات الهوائية ضروريًا ، لأنه يحدد الجودة الصحية للعينة قيد الدراسة.

يتيح تطبيق هذه التقنية (باستخدام هذه الوسيلة) التصور العياني للمستعمرات المعزولة لتقديرها.

تقنية صب الألواح (البذر العميق)

-معالجة

تتكون التقنية مما يلي:

1) تجانس العينة من أجل إعادة توزيع البكتيريا الموجودة.

2) يتم إجراء تعليق الأولي في زجاجة معقمة أو كيس، واحترام نسبة 10 غرام أو 10 مل من العينة في 90 مل من مخفف (10 ^-1).

3) من التعليق الأولي ، يتم إجراء التخفيفات العشرية ذات الصلة حسب نوع العينة. مثال: (10 ^-2 ، 10 ^-3 ، 10 ^-4). يتم إجراء التخفيفات باستخدام ماء الببتون أو محلول الفوسفات.

للقيام بذلك، واتخاذ 1 مل من تعليق الأولي ووضعه في 9 مل من مخفف، مواصلة التخفيفات إذا لزم الأمر، مع الأخذ الآن 1 مل من 10 ^-2 التخفيف وهلم جرا.

4) خذ 1 مل من كل تخفيف وضعها في أطباق بتري فارغة معقمة.

5) أضف إلى كل لوحة 12 إلى 15 مل من أجار العد القياسي المذاب مسبقًا واستقر عند 44-47 درجة مئوية.

6) قم بتدوير اللوحات برفق لتوزيع العينة على طول الأجار بالتساوي والسماح لها بالتصلب.

7) قلب الصفائح واحتضانها عند 37 درجة مئوية في التمارين الهوائية لمدة 24 إلى 48 ساعة.

8) في نهاية الوقت ، يتم فحص الصفائح وإحصاء المستعمرات في التخفيف الذي يسمح بذلك. يتم اختيار تلك اللوحات التي تحتوي على ما بين 30 إلى 300 CFU للعد.

يمكن إجراء العد يدويًا أو يمكنك استخدام معدات عداد المستعمرة.

قد تختلف القيم المسموح بها لكل مليلتر من العينة من بلد إلى آخر حسب اللوائح التي تحكمها.

-حساب UFC

يتم الحساب العام باستخدام الصيغة التالية:

صيغة الحساب العام للقياس الكمي لوحدات CFU. المصدر: الإدارة الوطنية للأدوية والأغذية والتكنولوجيا الطبية (ANMAT). التحليل الميكروبيولوجي للغذاء ، المنهجية التحليلية الرسمية ، مؤشر الكائنات الحية الدقيقة. 2014 المجلد 3. متاح على: anmat.gov.ar

عبر عن النتائج برقم واحد أو رقمين ، وضربه في الأساس المناسب 10. مثال: إذا كانت النتيجة 16.545 ، يتم تقريبها بناءً على الرقم الثالث إلى 17000 وسيتم التعبير عنها على النحو التالي: 1.7 × 10 ⁴. الآن ، إذا كانت النتيجة 16436 ، فقربها إلى 16000 وعبر عن 1.6 × 10 ⁴.

تقنية البذر السطحي

-معالجة

-Inocular مع 0.1 مل من العينة مباشرة إذا كان السائل، تعليق الأولي 10 ^-1 أو من التخفيفات متتالية 10 ^-2 ، 10 ^-3 وما إلى ذلك، في مركز العد القياسية أجار لوحة.

- وزع العينة بالتساوي باستخدام ملعقة دريغالسكي أو قضيب زجاجي على شكل حرف L. اتركه يرتاح لمدة 10 دقائق.

-قلب الأطباق واحتضانها بطريقة هوائية عند 37 درجة مئوية لمدة 24 إلى 48 ساعة.

- الشروع في عد المستعمرات ، اختر تلك اللوحات التي تقع في نطاق يتراوح بين 20 - 250 CFU.

-حساب UFC

للحساب ، يتم تطبيق عامل التخفيف ، وهو معكوس. يتم تقريب الرقم إلى رقمين معنويين (يتم التقريب وفقًا للرقم الثالث) ويتم التعبير عنه بقوة الأساس 10. على سبيل المثال ، إذا تم حساب 224 CFU في العينة دون تخفيف (^10-1) ، فسيتم الإبلاغ عن 22 × 10 ¹ CFU ، ولكن إذا كان الرقم 225 ، فسيتم الإبلاغ عن 23 × 10 ¹ CFU.

الآن ، إذا تم حساب 199 CFU في التخفيف 10 ^-3 ، فسيتم الإبلاغ عن 20 x 10 ⁴ CFU ، ولكن إذا تم حساب 153 CFU في نفس التخفيف ، فسيتم الإبلاغ عن 15 x 10 ⁴ CFU.

سؤال وجواب

يمكن تقييم وسط استزراع العد القياسي باستخدام سلالات معتمدة معروفة ، مثل: Escherichia coli ATCC 8739، Staphylococcus aureus ATCC 6538، Bacillus subtilis ATCC 6633، Lactobacillus fermentum ATCC 9338، Staphylococcus epidermidis ATCC 12228، Shigella flexneri ATCC 12022.

إذا كان وسط الاستزراع في الظروف المثلى ، فمن المتوقع نمو مرضٍ في جميع الحالات ، باستثناء L. fermentum ، والتي يمكن أن يكون لها محصول منتظم.

لتقييم عقم وسط الاستزراع ، يجب تحضين لوح أو لوحين من كل دفعة محضرة (بدون تلقيح) عند 37 درجة مئوية في الهواء لمدة 24 ساعة. بعد هذا الوقت ، لا ينبغي ملاحظة أي نمو أو تغيير في اللون في الوسط.

محددات

- لا تذوب الاجار أكثر من مرة.

- يمكن أن تستمر المادة المحضرة لمدة تصل إلى 3 أشهر طالما أنها محفوظة في الثلاجة ومحمية من الضوء.

- هذه الوسيلة ليست مناسبة للكائنات الحية الدقيقة المتطلبة أو اللاهوائية.

المراجع

1. الإدارة الوطنية للأدوية والأغذية والتكنولوجيا الطبية (ANMAT). التحليل الميكروبيولوجي للغذاء ، المنهجية التحليلية الرسمية ، مؤشر الكائنات الحية الدقيقة. 2014 المجلد 3. متاح على: anmat.gov.ar
2. لابوراتوريوس ديفكو فرانسيسكو سوريا ملغيزو ، عد الألواح في أجار. 2009 متاح على:
3. مختبرات كوندا بروناديسا. الطريقة القياسية أجار (PCA) وفقًا لـ APHA و ISO 4833. متاح على: condalab.com
4. مختبرات بريتانيا. العد لوحة أجار. 2015 متاح على: britanialab.com
5. كاماتشو أ ، جيلز إم ، أورتيغون أ ، بالاو إم ، سيرانو ب ، فيلاسكيز أو. 2009. تقنيات التحليل الميكروبيولوجي للأغذية. الطبعة الثانية. كلية الكيمياء UNAM. المكسيك. متاح على: depa.fquim.unam