تشابيك أجار: الأساس المنطقي والتحضير والاستخدامات والقيود - مادة الاحياء - 2025

يعتبر Czapek (CZA) وسيطًا صلبًا انتقائيًا مصممًا خصيصًا لزراعة البكتيريا والفطريات الرمية. تم إنشاؤه بواسطة عالم النبات فريدريش يوهان فرانز تشابيك ، من أصل بولندي ، والكيميائي الأمريكي آرثر وايلاند دوكس ؛ لهذا السبب ، يُعرف هذا الأجار أيضًا باسم وسط Czapek-Dox.

كان الوسط الأصلي سائلًا ، ولكن تمت إضافة الأجار لاحقًا لجعله وسطًا صلبًا. يتكون وسط Czapek من نترات الصوديوم وفوسفات البوتاسيوم وكبريتات المغنيسيوم وكلوريد البوتاسيوم وكبريتات الحديدوز والسكروز والأجار والماء المقطر.

Czapek agar A. Aspergillus parasiticus B. Aspergillus fumigatus المصدر: A. Medmyco / B. الصورة: Dr. David Midgley. Wikipedia.com

الرقم الهيدروجيني لأجار Czapek هو 7.3 ، ولكن هناك متغير يضاف إليه حمض اللاكتيك بنسبة 10 ٪ ، ويظل الرقم الهيدروجيني منه عند 3.5. يستخدم هذا الوسط الحمضي لزراعة الكائنات الحية الدقيقة المحبة للحمض.

من ناحية أخرى ، قامت بعض البيوت التجارية بتعديل تركيبة أزابيك أجار عن طريق تغيير كبريتات المغنيسيوم وفوسفات البوتاسيوم بواسطة الجلسروفوسفات ؛ يمنع هذا التعديل ترسب فوسفات المغنيسيوم الذي لوحظ في الصيغة التقليدية من التكون. وبالمثل ، هناك نوع آخر يضاف إليه خلاصة الخميرة.

أخيرًا ، أوصت جمعية الصحة العامة الأمريكية APHA بـ Czapek agar لدراسة الفطريات الشعاعية sp و Aspergillus sp و Paecilomyces sp و Penicillium sp. تتميز هذه الأنواع بأنها كائنات دقيقة بيئية ومسببات الأمراض الانتهازية.

أساس

هذه الوسيلة تحتوي على السكروز. تعمل هذه الكربوهيدرات كمصدر للكربون ، في حين أن نترات الصوديوم هي مصدر النيتروجين ، ولكن على عكس الوسائط الأخرى ، يكون النيتروجين غير عضوي.

لهذا السبب ، يعتبر وسيط Czapek انتقائيًا ، حيث يمكن أن تنمو الكائنات الحية الدقيقة فقط القادرة على استخدام المركبات غير العضوية كمصدر وحيد للنيتروجين.

كمادة منظمة لأسمولية الوسط هو فوسفات بوتاسيوم. من جانبهم ، توفر كبريتات المغنيسيوم وكلوريد البوتاسيوم وكبريتات الحديدوز المعادن الأساسية لنمو الكائنات الحية الدقيقة الرخوة (التي تعيش بحرية). تشكل هذه الصيغة راسبًا من فوسفات المغنيسيوم.

أخيرًا ، أجار أجار هو المركب الذي يوفر الاتساق الصلب للوسط والماء هو المذيب لجميع المكونات.

مع صيغة Czapek agar المعدلة ، لا يوجد تكوين راسب كما أنه يحسن أداء نمو بعض الفطريات.

تجعل الحموضة الشديدة لحمض Czapek Agar وسيطًا أكثر انتقائية ، مما يسمح فقط بنمو الكائنات الدقيقة المحبة للحموضة ، القادرة على استخدام النيتروجين غير العضوي. وفي الوقت نفسه ، يحسن أجار Czapek-yeast أداء بعض أنواع عيش الغراب.

تجهيز

متوسطة تشابيك دوكس

تزن 49 جم من وسط المزرعة المجففة وتذوب في الماء المقطر. ضع الحرارة حتى الغليان. رجي الخليط بشكل متكرر حتى يذوب تماما.

-Czapek Agar Wedges

وزع الخليط المذاب في أنابيب وأوتوكلاف عند 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. عند الإزالة من الأوتوكلاف ، قم بالتجانس قبل وضع الأنابيب واتركها لتصلب.

-لوحات أجار زابيك

الأوتوكلاف الخليط المذاب عند 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة واتركه ليبرد حتى 50 درجة مئوية ، متجانس وصب 20 مل في أطباق بتري المعقمة. دعها تتصلب ، تقلب وتخزن في الثلاجة لحين الاستخدام.

يجب أن يظل الأس الهيدروجيني عند 7.3 ± 0.2. لون الوسط المجفف أبيض والوسط المحضر كهرماني فاتح ، غائم قليلاً بسبب وجود راسب متدفق.

وسط Czapek في درجة الحموضة الحمضية

تحضير كما سبق وصفه ، مع إضافة 10 مل من حمض اللاكتيك المعقم 10٪ لكل لتر من الوسط المحضر. يجب أن يكون وسط Czapek المعدل عند درجة الحموضة 3.5 ± 0.2.

تعديل متوسط ​​Czapek

تزن 45.4 جم من الوسط المجفف وتذوب في 1 لتر من الماء. ما تبقى من التحضير هو نفسه كما هو موضح أعلاه. لون الوسط المجفف أبيض والوسط المحضر أبيض. الرقم الهيدروجيني النهائي للوسط هو 6.8 ± 0.2.

متوسطة خميرة تشابيك

يُطلق عليه أيضًا مستخلص خميرة Czapek Agar (CYA). يحتوي على عناصر من مستخلص أجار Czapek الكلاسيكي بالإضافة إلى خلاصة الخميرة.

استعمال

يتم استخدام وسيط Czapek للبحث عن الكائنات الحية الدقيقة الرخامية في عينات من التربة والخضروات والحبوب والهواء والحشرات وغيرها.

يستخدم أجار Czapek في درجة الحموضة الحمضية لنمو الكائنات الحية الدقيقة المحبة للحمض ، في حين أن أجار Czapek المعدل مفيد بشكل خاص لتكوين الأبواغ المتدثرة في أنواع مجمع المبيضات البيض.

أخيرًا ، يعتبر أجار Czapek-yeast مفيدًا جدًا لعزل Aspergillus و Penicillium.

زرعت

-Czapek أجار

للبحث عن Actinomycetes في التربة ، تابع على النحو التالي: يتم معالجة العينة بالماء المعالج بالفينول لمدة 30 دقيقة ثم يتم زرع 1 مل من المعلق في أجار تشابيك. احتضان عند 28 درجة مئوية لمدة 5 إلى 7 أيام.

بالنسبة لعينات الخضروات والحبوب والحشرات ، يتم وضعها مباشرة على الأجار. يمكنك أيضًا عمل تخفيف وبذور 0.1 مل على سطح أجار.

-تعديل تشابيك أجار

بالنسبة للبذر ، يتم استخدام حلقة أو إبرة مستقيمة ، ويتم تشريبها بالمسحة ويتم تلقيح الأجار مما يؤدي إلى ثقب حتى يلامس قاعدة اللوحة. احتضان لمدة 24 ساعة عند 28 درجة مئوية وفحص تحت المجهر فوق وتحت اللوحة لمعرفة ما إذا كانت قد تشكلت الأبواغ المتدثرة.

درجة حرارة الحضانة والوقت

تختلف درجة حرارة ووقت الحضانة اعتمادًا على نوع الكائن الدقيق المراد عزله. يتم تحضين الأطباق بشكل عام لمدة أسبوع إلى أسبوعين في نطاق درجة حرارة من 20 إلى 25 درجة مئوية.

ومع ذلك ، هناك شروط محددة لبعض السلالات. على سبيل المثال ، تنمو معظم الأنواع من جنس الرشاشيات على النحو الأمثل عند 30 درجة مئوية ؛ ومع ذلك ينمو A. fumigatus عند 50 درجة مئوية.

فيما يتعلق بوقت الحضانة ، فإن أسبوعًا أو أسبوعين أمر طبيعي ، ومع ذلك ، يمكن أن تتطور المبيضات البيضاء في غضون 24 إلى 48 ساعة عند 25 درجة مئوية.

خصائص بعض المستعمرات على هذا الوسط

- البنسليوم أتروفينيتوم

يتطور خلال 12 يومًا من الحضانة عند 27 درجة مئوية. مستعمراتهم صغيرة (25 مم).

تتمتع المستعمرات بمظهر مخملي ، بحدود بيضاء محددة ولون أزرق مخضر في الوسط يتحول إلى اللون الرمادي مع تقدم العمر. الجانب العكسي للمستعمرة برتقالي ، مما يجعل الوسط بنفس اللون بسبب إنتاج الصبغة.

- أسبرجيلوس نيجر

يتطور مع الفطريات البيضاء إلى الصفراء والجراثيم السوداء.

- المبيضات البيض

تتطور مستعمرات البيج الفاتح الكريمي. في أجار Czapek المعدل ، فإنه يشكل chlamydospores.

- الرشاشيات الطفيلية

تتطور الفطريات الخضراء الداكنة في 7 أيام عند 25 درجة مئوية.

سؤال وجواب

لتقييم جودة وسط الاستزراع ، يمكن زراعة سلالات تحكم معتمدة ، مثل: Aspergillus niger MKTA 16404 ، Candida albicans MKTA 10231.

يتطور Aspergillus niger من الفطريات البيضاء إلى الصفراء والجراثيم السوداء في حوالي 5 أيام ، بينما تنمو المبيضات البيضاء بشكل مرضٍ خلال 24 ساعة من الحضانة عند 25 درجة مئوية ؛ المستعمرات لونها كريم.

محددات

أظهرت بعض الدراسات أنه من أجل استرجاع الأكتينوميسيتات ، فإن أجار تشابيك هو أفضل محصول هو أجار دكستروز البطاطس ، بينما يحتل أجار تشابيك المرتبة الثانية ، ولكن لاستعادة الرشاشيات والبنسيليوم ، فإن أجار تشابيك هو الذي يوفر أعلى معدل استرداد.

المراجع

1. دافيلا م وآخرون. الفطريات الشعاعية المضادة للفطريات الممرضة للنبات ذات الأهمية الزراعية. القس مكس. علم. أجريك 2013 ، 4 (8): 1187-1196. متاح على: scielo.org.
2. لونا م ، لوزادا واي ، قمح Á. عزل سلالات Aspergillus niger ، التي تنتج ochratoxin A ، في القهوة الخضراء المخزنة (Coffea arabica). القس مكس. ميكروفون. 2010 ؛ 32: 63-68. متاح في.scielo.org.
3. المساهمين في ويكيبيديا. متوسطة التشابك. ويكيبيديا، الموسوعة الحرة. 13 يناير 2019 ، الساعة 20:30 بالتوقيت العالمي المنسق. متاح على: en.wikipedia.org
4. مختبرات كوندا بروناديسا. تعديل Czapek-Dox Agar. متاح في: condalab.com
5. ثقافة وسائل الإعلام Microkit. تشابيك دوكس أجار. Diosponible في: Medioscultivo.com