و أجار إندو أو إندو المتوسطة هو وسيلة الصلبة، التفاضلية ومع درجة معينة من الثقافة الانتقائية. ابتكر Endo الصيغة الأصلية عام 1904 للتمييز بين تخمير اللاكتوز والبكتيريا غير المخمرة. في البداية تم تصميمه لعزل السالمونيلا التيفية ، ولكن بعد ذلك تحول الهدف من الوسيط إلى البحث عن القولونيات.
ظل مبدأ Endo Agar قائما ، لكن صيغته خضعت لتغييرات لا حصر لها على مر السنين. حاليًا ، يتكون الوسط من الهضم الهضمي للأنسجة الحيوانية ، اللاكتوز ، فوسفات الهيدروجين ثنائي البوتاسيوم ، كبريتيت الصوديوم ، الفوكسين الأساسي ، والأجار.
ج: Virgin Endo Agar B: بذور Endo Agar ، في منتصف الأجار يمكنك ملاحظة اللمعان المعدني لسلالة E. coli. المصدر: A: Strolch1983 / B: LenkaM
ارتبط الاستخدام الرئيسي للوسيط بعزل وتمييز العصيات سالبة الجرام التي تنتمي إلى عائلة Enterobacteriaceae وعائلات أخرى قريبة.
لفترة طويلة تم استخدامه في الكشف عن القولونيات في عينات المياه والألبان والأغذية ، ولكن اليوم تم استبدال استخدام هذه الوسيلة من قبل الآخرين الذين لديهم وظائف مماثلة. ومع ذلك ، تستخدم بعض مختبرات علم الأحياء الدقيقة هذا الآجار لعزل البكتيريا المعوية من عينات من أصل سريري.
أساس
يحتوي إندو أجار على مركبات البيبتون التي تعمل كمصدر للأحماض الأمينية والنيتروجين والكربون والطاقة الضرورية لنمو الكائنات الحية الدقيقة غير المتطلبة.
من ناحية أخرى ، يتم توفير الطابع الانتقائي قليلاً للأجار من خلال إضافة كبريتيت الصوديوم والفوكسين الأساسي ؛ كلا المكونين يمنعان جزئيًا أو كليًا نمو معظم البكتيريا إيجابية الجرام.
يتم إعطاء الطابع التفاضلي من خلال وجود الكربوهيدرات القابلة للتخمر ، والتي في هذه الحالة هي اللاكتوز والفوكسين الأساسي ، والذي يعمل أيضًا كمؤشر درجة الحموضة.
البكتيريا سالبة الجرام التي تنمو على هذا الأجار وقادرة على تخمير اللاكتوز ستشكل مستعمرات وردية قوية ؛ كونها مرضية للإشريكية القولونية تكوين مستعمرات حمراء داكنة مع بريق معدني مخضر قزحي. ويرجع ذلك إلى ارتفاع إنتاج الأحماض من تخمير الكربوهيدرات.
وتجدر الإشارة إلى أن الوسط المحيط بالمستعمرات يتحول أيضًا إلى لون وردي قوي. في حين أن قضبان الجرام سالبة الجرام غير المخمرة للاكتوز تشكل مستعمرات وردية شاحبة تشبه المتوسطة أو عديمة اللون.
يوازن فوسفات الهيدروجين ثنائي البوتاسيوم بين الأس الهيدروجيني للوسط والأجار هو المكون الذي يوفر الاتساق الصلب.
تجهيز
إندو أجار
تزن 41.5 جم من الوسط المجفف وتذوب في 1 لتر من الماء المقطر. سخني المزيج مع التحريك المتكرر حتى يذوب الوسط تمامًا. تعقيم في الأوتوكلاف عند 121 درجة مئوية ، عند ضغط 15 رطلاً ، لمدة 15 دقيقة.
عند إزالته من الأوتوكلاف ، اتركه ليبرد إلى درجة حرارة تقارب 45-50 درجة مئوية ، ورج الخليط حتى يصبح متجانسًا قبل التقديم. صب 20 مل في أطباق بتري المعقمة.
اسمح للألواح بالتصلب والانعكاس والتخزين في بلاكيرو أو لفها بورق داكن قبل تخزينها في الثلاجة. من المهم جدًا حماية الوسيط المحضر من الضوء المباشر. من أفضل الممارسات تحضير الكمية التي ستحتاجها بالضبط.
إذا تم تخزينها في الثلاجة ، يجب السماح للألواح بالتسخين قبل الاستخدام.
يجب أن يكون الرقم الهيدروجيني للوسيط بين 7.2 إلى 7.6 ولون الوسط المحضر وردي باهت.
متغير أجار M-Endo
هناك نسخة أخرى من Endo agar (m-Endo) تتبع صيغة مكارثي وديلاني وجراسو ، والتي تحتوي على المزيد من المركبات وتتنوع في شكل التحضير.
يحتوي هذا النوع على: اللاكتوز ، التربتوز ، الهضم الأنزيمي للكازين ، الهضم الأنزيمي للأنسجة الحيوانية ، كلوريد الصوديوم ، فوسفات البوتاسيوم ثنائي القاعدة ، كبريتات الصوديوم ، مستخلص الخميرة ، فوسفات البوتاسيوم أحادي القاعدة ، الفوشسين الأساسي ، ديوكسيكولات الصوديوم ، كبريتات لوريل الصوديوم والأجار.
في هذه الحالة ، يتم وزن 51 جم من الوسط المجفف وتعليقه في لتر واحد من الماء المقطر يحتوي على 20 مل من الإيثانول.
يُسخن قليلاً مع التحريك حتى يذوب الوسط تمامًا. لا ينبغي أن يكون محمومًا ولا يجب تعقيمه. بمجرد أن يصبح الخليط متجانسًا ، قدمه في أطباق بتري المعقمة واتركه يتجمد.
استعمال
في بعض البلدان ، لا يزال يستخدم لحساب القولونيات الكلية والبرازية في عينات الطعام والماء ، وخاصة وجود الإشريكية القولونية كمؤشر رئيسي على التلوث البرازي.
أوصت جمعية الصحة العامة الأمريكية (APHA) باستخدام M-Endo Agar لمراقبة برامج التطهير ومعالجة مياه الصرف الصحي ومراقبتها ، وكذلك في تقييم جودة مياه الشرب.
الطريقة الأكثر استخدامًا هي الترشيح الغشائي ، بعد إثراء العينة بمرق كبريتات لوريل لمدة 2 إلى 4 ساعات.
يمكن استخدامه أيضًا كبديل لآجار EMB في التحليل الميكروبيولوجي للغذاء والماء باستخدام تقنية الرقم الأكثر احتمالًا (MPN) ، وتحديداً في مرحلة التأكيد الكاملة لتأكيد وجود الإشريكية القولونية من مرق EC غائم.
سؤال وجواب
يتم زرع سلالات التحكم المعروفة أو المعتمدة لتقييم جودة دفعة Endo agar المعدة.
من بين السلالات التي يمكن استخدامها لهذا الغرض: Escherichia coli ATCC 25922 ، Escherichia coli ATCC 11775 ، Enterobacter cloacae ATCC 13047 ، Klebsiella pneumoniae ATCC 13883 ، Salmonella typhimurium ATCC 14028 ، Shigella flexneri ATCC 1200022 ، Proteus miracaliscus15.
يتم استنبات السلالات عن طريق الإرهاق ويتم تحضينها عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة في التمارين الهوائية.
النتائج المتوقعة هي:
- للإشريكية القولونية: مستعمرات حمراء قوية ، ذات بريق معدني.
- يجب أن تكون المستعمرات عبارة عن مخاطي وردي.
- في حالة S. typhimurium و S. flexneri و P. mirabilis ، تكون المستعمرات عادة زهرية شاحبة أو عديمة اللون.
- أخيرًا ، من المتوقع أن يتم تثبيط بكتيريا E. faecalis جزئيًا ، لذلك يجب أن يكون نموها ضعيفًا مع وجود مستعمرات وردية صغيرة جدًا وقوية.
محددات
- الوسط الداخلي لديه قوة انتقائية منخفضة ، لذلك من الممكن أن تنمو بعض الكائنات الدقيقة الموجبة للجرام مثل المكورات العنقودية والمعوية وحتى الخمائر.
- يمكن أن تتطور عصيات أخرى لا تنتمي إلى عائلة Enterobacteriaceae في هذا الوسط ، مثل Pseudomonas sp و Aeromonas sp. خصائص هذه السلالات هي مستعمرات غير منتظمة عديمة اللون.
- هذه الوسيلة المحضرة حساسة للغاية للضوء ، وبالتالي فإن التعرض الطويل لها يؤدي إلى تدهور نظام المؤشرات ، مما يؤدي إلى إتلاف الوسط بشكل لا رجعة فيه.
- تعتبر مكونات الوسط مسرطنة لذلك يجب تجنب الاتصال المباشر.
- الوسيلة المجففة شديدة الرطوبة ويجب حفظها في عبوتها الأصلية في درجة حرارة الغرفة ومغلقة بإحكام وفي بيئة جافة.
المراجع
- مختبرات BD. إندو أجار. 2013 متاح في: bd.com
- مختبرات نيوجين. إم إندو أجار. متاح على: foodafety.neogen.com
- إندو أجار. ويكيبيديا، الموسوعة الحرة. 7 سبتمبر 2017، 08:27 UTC. 28 فبراير 2019، 22:55. متاح على: en.wikipedia.
- مختبر MercK. إندو أجار. 2019 متاح على: merckmillipore.com
- مختبرات الورقة الفنية. إم إندو أجار ليه. 2015 متاح في: liofilchem.net