و أجار هكتون أو آغار هكتون المعوي وسط صلب هو انتقائية والثقافة التفاضلية. تم إنشاؤه في معهد Hektoen بواسطة King and Metzger لعزل البكتيريا المسببة للأمراض المعوية من أجناس Shigella و Salmonella.
يتكون الوسط من ببتون البروتين ، مستخلص الخميرة ، أملاح الصفراء ، اللاكتوز ، السكروز ، الساليسين ، ثيوسلفات الصوديوم ، كلوريد الصوديوم ، سترات الحديد ، سترات الأمونيوم ، البروموثيمول الأزرق ، الفوشسين الحمضي والأجار. هذه الصيغة تجعل من الممكن التفريق بين جنس الشيغيلا والسالمونيلا عن باقي البكتيريا القادرة على النمو في هذا الوسط.
أ. العذراء Hektoen agar B. المصنف Hektoen agar. المصدر: Flickr.com/ القائم بالتحميل الأصلي كان Philippinjl في ويكيبيديا الفرنسية.
على الرغم من وجود وسائط أخرى لها نفس وظيفة Hektoen agar ، إلا أنها تتمتع بميزة أكبر مقارنة بالوسائط الأخرى ، خاصةً عندما تريد استعادة أنواع Shigella.
تسبب الأنواع من كلا الجنسين مشاكل معدية معوية خطيرة عند الإنسان بسبب استهلاك الأطعمة الملوثة ؛ لذلك يكون الانتقال عن طريق البراز - الفم. هذا هو السبب في استخدام Hektoen agar بشكل أساسي في التحليل الميكروبيولوجي لعينات البراز والغذاء.
أساس
يحتوي Hektoen Agar على بيبتون وخلاصة الخميرة كمصدر للعناصر الغذائية ، مما يوفر العناصر الأساسية لتطوير الميكروبات.
ومع ذلك ، فإنه يحتوي أيضًا على أملاح صفراوية تعمل على تثبيط نمو بعض البكتيريا ، خاصةً موجبة الجرام وبعضها سالب الجرام. ولهذا السبب تعتبر وسيلة انتقائية.
من ناحية أخرى ، فإن Hektoen agar هو وسيط تفاضلي. تُمنح هذه الخاصية من خلال وجود الكربوهيدرات القابلة للتخمير مثل اللاكتوز والسكروز والساليسين ، جنبًا إلى جنب مع نظام مؤشر الأس الهيدروجيني ، الذي يمثله البروموثيمول الأزرق وحمض الفوكسين.
جميع البكتيريا القادرة على النمو في هذا الوسط والتي لا تنتمي إلى جنس السالمونيلا والشيغيلة ستطور مستعمرات السلمون أو البرتقال باستثناء جنس المتقلبة. هذا بسبب تخمر واحد أو أكثر من الكربوهيدرات الموجودة ، مما يزيد حمضية الوسط ، مما يجعل مؤشر الأس الهيدروجيني يتحول.
من جانبها ، فإن جنس Shigella و Salmonella غير قادرين على تخمير أي من الكربوهيدرات الموجودة ، باستخدام الببتون فقط كمصدر للطاقة ، مما يؤدي إلى قلونة الوسط وبالتالي تكون مستعمراتهما زرقاء وخضراء.
يمكن أيضًا تمييز البكتيريا القادرة على تكوين كبريتيد الهيدروجين (غاز عديم اللون) في هذا الوسط. تعمل ثيوسلفات الصوديوم كمصدر للكبريت بينما تكون سترات الحديد هي المطور. يتيح كلا المركبين تكوين راسب أسود من كبريتيد الحديد يظهر التفاعل.
يعطي الترسب الأسود في وسط المستعمرة مع وجود هالة شفافة حوله مظهر عين السمكة. تشير هذه الخاصية إلى وجود جنس السالمونيلا.
أخيرًا ، يحافظ كلوريد الصوديوم على التوازن الاسموزي ويوفر الأجار الاتساق الصلب للوسط.
تجهيز
تزن 76 جم من الوسط المجفف وتذوب في لتر من الماء المقطر. قم برج الخليط بقوة ثم اتركه يرتاح لمدة 10 إلى 15 دقيقة. يمكن تسخينها وغليها ، مع إعطاء حركات دورانية حتى تذوب تمامًا. لا يتم تعقيم هذه الوسيلة بالبخار المضغوط.
عندما تصل درجة حرارة الوسط إلى 45 درجة مئوية تقريبًا ، يُسكب حجم 20 مل مباشرةً في أطباق بتري المعقمة.
يُسمح للأجار بالتصلب. في ذلك الوقت تكون جاهزة للاستخدام. يوصى باستخدامها على الفور. إذا لم يكن ذلك ممكنًا ، يتم حفظها في الثلاجة حتى الاستخدام.
يجب إزالة الألواح من الثلاجة مسبقًا قبل البذر لإحضارها إلى درجة حرارة الغرفة.
يجب أن يكون الأس الهيدروجيني للوسط 7.5 ± 0.2. لون الوسط المجفف أرجواني والوسط المحضر بني-أخضر.
استعمال
يوصى باستخدام Hektoen agar للبحث عن البكتيريا من جنس Shigella و Salmonella في عينات البراز والطعام.
تزداد إمكانية عزل هذه البكتيريا بشكل كبير إذا تم إثراء العينة مسبقًا في مرق خاص ، مثل مرق السيلينيت ، ومرق سيلينيت السيستين ، ومرق التيتراثيونات ، إلخ.
يجب أن يكون اللقاح قويًا ويتم البذر عن طريق الخطوط. يتم تحضين الصفائح عند 37 درجة مئوية لمدة 24 إلى 48 ساعة في التمارين الهوائية.
يوصى بالاحتضان لمدة 48 ساعة لأن خصائص الطوائف تكون أوضح لتفسيرها وتمييزها في هذا الوقت.
سؤال وجواب
لإجراء مراقبة الجودة على هذا الوسيط ، يتم استخدام سلالات بكتيرية معتمدة ، مثل: Salmonella typhimurium ATCC 14028 ، Salmonella enteritidis ATCC 13076 ، Shigella flexneri ATCC 12022 and Shigella sonnei ATCC 25931.
النتائج المتوقعة هي كما يلي: Salmonella typhimurium و Salmonella enteritidis يجب أن تطور مستعمرات زرقاء وخضراء مع أو بدون مركز أسود. في حين أن أنواع الشيغيلا سوف تنمو كمستعمرات زرقاء وخضراء.
يمكن أيضًا تضمين سلالات Escherichia coli ATCC 29212 و Proteus mirabilis و Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 و Enterococcus faecalis ATCC 29212 و Staphylococcus aureus ATCC 25923.
في هذه الحالات ، فإن الخصائص التي تمت ملاحظتها هي التالية: E. coli و K. pneumoniae سوف تطور مستعمرات السلمون البرتقالي في هذا الوسط ، مع ترسب من نفس اللون حولهما. في حين أن Proteus سيطور مستعمرات زرقاء وخضراء مع أو بدون مركز أسود.
بينما يجب منع بكتريا S. aureus و E. faecalis ، فإن E. faecalis تتمكن من حين لآخر من النمو كمستعمرات صغيرة جدا صفراء.
من ناحية أخرى ، نظرًا لأن هذه الوسيلة لا يتم تعقيمها ، فمن المهم تقييم عقم الوسيط. لذلك ، من كل دفعة محضرة ، يجب تحضين لوح أو لوحين غير محصنين عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة في التمارين الهوائية.
من الواضح أنه لا يتوقع حدوث نمو من أي نوع على اللوحة.
محددات
- يمكن أن تتطور أنواع المتقلبة في هذا الوسط ويمكن الخلط بين خصائص مستعمراتها وأنواع السالمونيلا أو الشيغيلا. لهذا السبب ، يجب تأكيد أي مستعمرة مشبوهة باختبارات الكيمياء الحيوية.
-من الضروري مرافقة استخدام هذه الوسيلة مع أجار أخرى أقل انتقائية ، لأنه إذا كان الكائن الدقيق المطلوب بتركيزات منخفضة ، فقد لا يتطور في هذا الوسط.
- لا تسخن أثناء التحضير ، لأن الحرارة الزائدة تغير تكوين الوسط.
- بشكل غير عادي ، قد تظهر مستعمرات السالمونيلا التي تخمر اللاكتوز والتي قد تمر دون أن يلاحظها أحد.
المراجع
- المساهمين في ويكيبيديا. أجار هيكتوين المعوي. ويكيبيديا، الموسوعة الحرة. 13 آذار (مارس) 2019 ، الساعة 23:38 بالتوقيت العالمي المنسق. متاح على:.wikipedia.org / تم الوصول إليه في 16 مارس 2019.
- مختبرات BD. BD Hektoen Enteric Agar (HE Agar). 2013 متاح في: bd.com
- مختبرات بريتانيا. Hektoen Enteric Agar. 2015 متاح على: britanialab.com
- مختبرات ديفكو فرانسيسكو سوريا ملغيزو. هيكتوين أجار. متاح في: f-soria.es
- دليل ديفكو و BBL ، Hektoen Enteric Agar. الطبعة الثانية. متاح في: bd.com/europe