أجار ليا (ليسين الحديد): الأساس والتحضير والاستخدامات - مادة الاحياء - 2025

و LIA أجار (ليسين الحديد) هو اختبار الكيمياء الحيوية المستخدمة لتحديد البكتيريا من عائلة المعوية. تم إنشاء هذه الوسيلة بواسطة Edwards and Fife ، بناءً على صيغة Falkow.

كان هذا الاختبار في الأصل عبارة عن مرق يحتوي على ببتون ، وخلاصة الخميرة ، والجلوكوز ، والليسين ، والبروموكريسول الأرجواني ، والماء المقطر. أضاف إدواردز وفيف أجار أجار وسيترات الأمونيوم الحديديك وثيوسلفات الصوديوم.

اختبار إيجابي وسلبي لنزع الكربوكسيل ليسين. المصدر: خاصية الصورة والرسم البياني للمؤلف ماجستير. مارييلسا جيل

يتكون الاختبار أساسًا من إثبات وجود إنزيم lysine decarboxylase ، القادر على التفاعل مع مجموعة الكربوكسيل من الحمض الأميني L-lysine. يمكن أن يحدث نزع الأمين للحمض الأميني أيضًا بسبب وجود إنزيم ليسين ديميناز.

بالإضافة إلى ذلك ، يظهر تكوين الوسط قدرة بعض الأجناس البكتيرية على إنتاج كبريتيد الهيدروجين. أخيرًا ، من الممكن أيضًا ملاحظة توليد الغاز أو عدمه في الوسط.

أساس

خلاصة البيبتون والخميرة

مثل معظم وسائط الاستنبات ، يحتوي Lysine Iron Agar على مكونات توفر مصدر العناصر الغذائية اللازمة لنمو البكتيريا. يتم تمثيل هذه المكونات بواسطة الببتونات وخلاصة الخميرة.

الجلوكوز

وبالمثل ، يحتوي هذا الأجار على الجلوكوز باعتباره كربوهيدرات قابلة للتخمير. من المعروف أن جميع البكتيريا في عائلة Enterobacteriaceae تخمر الجلوكوز.

هذه الخطوة حاسمة ، لأنها ستكون مسؤولة عن تحميض الوسط ، وهو شرط أساسي لإنزيم ليسين ديكاربوكسيلاز -إذا كان موجودًا- للعمل على ركائزه.

في بعض الأجناس البكتيرية ، يمكن ملاحظة إنتاج الغاز بسبب تخمر الجلوكوز.

يتضح الغاز عندما يكون هناك إزاحة للأجار في الأنبوب ، تاركًا مساحة فارغة في أسفل الأنبوب ، أو عن طريق تكسير الوسط إلى جزأين أو أكثر.

L- ليسين

بمجرد نزع الكربوكسيل من اللايسين ، يتم تكوين ثنائي أمين (كادافيرين) وثاني أكسيد الكربون.

يحدث نزع الكربوكسيل في وجود أنزيم فوسفات بيريدوكسال. رد الفعل هذا لا رجوع فيه.

مؤشر الأس الهيدروجيني (أرجواني بروموكريسول)

يتم الكشف عن جميع تغيرات الأس الهيدروجيني التي تحدث في الوسط من خلال التفاعلات المختلفة بواسطة مؤشر الأس الهيدروجيني البروموكريسول الأرجواني.

بهذا المعنى ، عندما يكون هناك تحمض ، يتحول الوسط إلى اللون الأصفر ، وعندما يكون هناك قلوية ، يعود الوسط إلى اللون الأرجواني أو الأرجواني الأصلي.

عندما يحدث نزع أمين اللايسين بسبب وجود إنزيم ليسين ديميناز ، يتشكل لون ضارب إلى الحمرة على السطح ، نموذجي في أجناس بروتيوس ، بروفيدنسيا ، وبعض أنواع مورغانيلا.

ويرجع ذلك إلى حقيقة أنه خلال عملية نزع الأمين يتكون حمض ألفا كيتو-كاربونيك ، والذي يتفاعل مع سترات الأمونيوم في وجود الأكسجين ، مما يتسبب في اللون المذكور أعلاه.

سترات الأمونيوم الحديديك وثيوسلفات الصوديوم

من ناحية أخرى ، سيتم إثبات البكتيريا التي تنتج كبريتيد الهيدروجين من خلال وجود ثيوسلفات الصوديوم (مصدر الكبريت) وسيترات الأمونيوم الحديديك ، والتي تعد مطور H ₂ S.

البكتيريا التي تحتوي على انزيم وحمض اختزال لديها القدرة على العمل عن طريق الحد من الصوديوم وحمض الحاضر، وتشكيل سلفيت وكبريتيد الهيدروجين (H ₂ S).

هذا الأخير هو غاز عديم اللون ، ولكن عند التفاعل مع ملح الحديد فإنه يشكل كبريتيد معدني حديدوي ، وهو مركب غير قابل للذوبان (راسب أسود مرئي).

ومع ذلك ، فإن القدرة على تكوين H ₂ S مع هذا الوسط ليست موثوقة للغاية ، لأن بعض البكتيريا السالبة ليسين ديكاربوكسيلاز القادرة على إنتاج H ₂ S لن تشكل الراسب الأسود ، لأن حموضة الوسط تتداخل. لذلك يوصى بالتحقق من الوسائط الأخرى التي تحتوي على الحديد.

تفسير الاختبار

نزع الكربوكسيل ليسين

يجب قراءة الأنابيب بعد 24 ساعة من الحضانة ، وإلا فهناك خطر إساءة تفسير التفاعل والإبلاغ عن سلبيات خاطئة.

يجب أن نتذكر أن أول رد فعل سيحدث سيكون تخمر الجلوكوز ، وبالتالي فإن جميع الأنابيب بعد 10 إلى 12 ساعة ستتحول إلى اللون الأصفر.

إذا لوحظ في نهاية فترة الحضانة (24 ساعة) خلفية صفراء بسطح أرجواني أو أرجواني ، يكون رد الفعل سالبًا. يتوافق اللون الأرجواني للسطح مع قلونة الوسط باستخدام الببتون.

رد الفعل الإيجابي هو رد فعل يكون فيه قاع الأنبوب وسطحه أرجوانيًا تمامًا ، أي أنه يعود إلى اللون الأصلي.

لذلك ، من يحدد إيجابية الاختبار هو أساس أو خلفية الوسيط. إذا كنت تشك في اللون ، فيمكن مقارنته بأنبوب LIA غير الملقح.

ديمين ليسين

سيكون للأنبوب الذي يُظهر إزالة أمين اللايسين سطح كستنائي محمر وخلفية صفراء (حمضية) ، أو الأنبوب بأكمله كستنائي محمر.

يتم تفسير هذا التفاعل على أنه سلبي لنزع الكربوكسيل ليسين ، ولكنه إيجابي لنزع أمين ليسين.

يتم تحديد رد الفعل هذا وتفسيره على الإطار.

إنتاج كبريتيد الهيدروجين (H

لوحظ رد فعل إيجابي من خلال ظهور راسب أسود في كل أو جزء من الوسط. عادة بين حافة الشطبة والقاعدة.

إذا حدث الترسب في جميع أنحاء الأنبوب ، فلن يكشف عن ردود الفعل الأخرى التي تحدث في الوسط.

سجل النتائج

عند تفسير الاختبار يتم تسجيل النتائج على النحو التالي:

الأول هو قراءة شطبة، ثم أسفل أو كتلة، ثم إنتاج H ₂ S، وأخيرا إنتاج الغاز.

مثال: K / A + (-). هذا يعنى:

• K: الحافة القلوية (اللون الأرجواني)
• ج: الخلفية الحمضية (الصفراء) ، أي تفاعل نزع الكربوكسيل السلبي ونزع الأمين السلبي.
• +: إنتاج كبريتيد الهيدروجين
• (-): بدون غاز.

تجهيز

تزن 35 جم من وسط الحديد المجفف أجار ليسين ويذوب في لتر واحد من الماء المقطر.

سخني الأجار حتى يذوب تمامًا ، اتركيه يغلي لمدة دقيقة مع التحريك بشكل متكرر. قم بتوزيع 4 مل من الوسط في أنبوب اختبار 13/100 بأغطية قطنية.

تعقيم في الأوتوكلاف عند 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. أخرجه من الأوتوكلاف واتركه يقف بزاوية بحيث يكون هناك قاعدة عميقة وشطبة قصيرة.

يحفظ فى الثلاجة 2-8 درجة مئوية. اتركه يسخن قبل نثر السلالة البكتيرية.

لون الوسط المجفف بيج والوسط المحضر أرجواني محمر.

الرقم الهيدروجيني النهائي للوسط المحضر هو 6.7 ± 0.2

يتحول الوسط إلى اللون الأصفر عند الرقم الهيدروجيني 5.2 أو أقل ، ويتحول إلى اللون الأرجواني عند درجة الحموضة 6.5 وما فوق.

التطبيقات

يستخدم هذا الاختبار ، جنبًا إلى جنب مع الاختبارات الكيميائية الحيوية الأخرى ، لتحديد العصيات من عائلة Enterobacteriaceae.

يتم زرع الوسيط بحلقة أو إبرة مستقيمة ، ويتم عمل ثقب أو ثقبين في قاع الأنبوب ، ثم يتم تسجيل سطح الوسيط في شكل متعرج.

احتضان لمدة 24 ساعة عند 35-37 درجة مئوية في الهوائية. إذا لزم الأمر ، يُترك للاحتضان لمدة 24 ساعة أخرى.

من المفيد بشكل أساسي التمييز بين أنواع Citrobacter سلبية اللاكتوز من Salmonellas sp.

المصدر: Koneman E، Allen S، Janda W، Schreckenberger P، Winn W. (2004). التشخيص الميكروبيولوجي. 5th إد. التحرير Panamericana SA Argentina.

المراجع

1. ماك فادن ج. (2003). الاختبارات البيوكيميائية لتحديد البكتيريا ذات الأهمية السريرية. الطبعة الثالثة. افتتاحية بان أميريكانا. بوينس ايرس. الأرجنتين.
2. Forbes B، Sahm D، Weissfeld A. (2009). بيلي وسكوت التشخيص الميكروبيولوجي. 12 إد. التحرير Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E ، Allen S ، Janda W ، Schreckenberger P ، Winn W. (2004). التشخيص الميكروبيولوجي. 5th إد. التحرير Panamericana SA Argentina.
4. مختبرات بريتانيا. ليسين الحديد أجار. 2015 متاح على: britanialab.com
5. مختبرات BD. BBL Lysine Iron Agar Slants. 2007. متاح في: bd.com
6. مختبرات Valtek. متوسط ​​LIA 2009 متاح على: andinamedica.com