أجار السيدة: الأساس والتحضير والاستخدامات - مادة الاحياء - 2025

و MRS أجار هو مستنبت الصلبة انتقائية تستخدم لعزل وتعداد بكتيريا حمض اللاكتيك، وخاصة من الملبنة جنس. تم إنشاء هذا الأجار في عام 1960 من قبل Man و Rogosa و Sharpe ، ويحمل نفس الاسم ، ولكن نظرًا لتعقيده ، غالبًا ما يستخدم الاختصار MRS.

وهو يتألف من بيبتون البروتين ، ومستخلص اللحوم ، ومستخلص الخميرة ، والجلوكوز ، وأحادي السوربيتان ، وفوسفات ثنائي البوتاسيوم ، وخلات الصوديوم ، وسترات الأمونيوم ، وكبريتات المغنيسيوم ، وكبريتات المنغنيز ، والأجار.

Man Rogosa و Sharpe Agar (MRS) المصنفان مع Lactobacillus sp. المصدر: صورة تم التبرع بها لهذا المقال من قبل المؤلفين: Báez E، González G، Hernández G، López E، Mega M. الصورة مأخوذة أثناء التحقيق بعنوان: تقييم بكتيريا حمض اللاكتيك و Bifidobacteria مع إمكانات بروبيوتيك في حليب الثدي وبراز الرضع.

تسمح هذه التركيبة بالتنمية الصحيحة لبكتيريا حمض اللاكتيك من العينات السريرية ، مثل البراز ، والإفرازات المهبلية ، والعينات الفموية وحليب الثدي ، وكذلك منتجات الألبان وأطعمة اللحوم.

لا يتم استخدامه بشكل روتيني في المختبرات السريرية ، لأن بكتيريا حمض اللاكتيك نادرًا ما تشارك في عمليات المرض. ومع ذلك ، في مجال علم الأحياء الدقيقة الغذائي ، يكون استخدام MRS أجار أكثر تكرارا.

من ناحية أخرى ، يتم استخدام هذه الوسيلة من قبل بعض المراكز البحثية التي تهدف إلى دراسة بكتيريا حمض اللاكتيك.

أساس

يحتوي Man و Rogosa و Sharpe agar على تركيبة معقدة إلى حد ما. من خلال تفكيك وظيفة كل مكون من مكوناته ، يمكن شرح أساسه.

يعد ببتون البروتين ومستخلص اللحوم ومستخلص الخميرة والجلوكوز من العناصر الغذائية التي توفر مصدر الكربون والنيتروجين والفيتامينات والمعادن الضرورية لنمو البكتيريا. علاوة على ذلك ، الجلوكوز هو مصدر الطاقة العالمي المستخدم في معظم وسائط الثقافة.

من ناحية أخرى ، من أجل تعزيز نمو بكتيريا حمض اللاكتيك ، من الضروري وجود عوامل مساعدة (كاتيونات) أساسية في عملية التمثيل الغذائي للعصيات اللبنية والبكتيريا ذات الصلة ؛ هذه المركبات هي أملاح الصوديوم والمغنيسيوم والمنغنيز.

وبالمثل ، يعتبر السوربيتان أحادي أو بولي سوربات 80 مصدرًا مهمًا للأحماض الدهنية حيث يتم امتصاصها كمواد مغذية.

علاوة على ذلك ، يعمل السوربيتان أحادي وسيترات الأمونيوم عن طريق تثبيط نمو النباتات المصاحبة ، وخاصة البكتيريا سالبة الجرام ، مما يوفر الصفة الانتقائية لهذا الأجار.

أخيرًا ، أجار أجار هو الذي يوفر الاتساق القوي للوسط.

هناك أنواع أخرى من Man Rogosa Sharpe agar ؛ واحد منهم مكمل مع السيستين (MRSc) ، مفيد جدا لعزل bifidobacteria ، من بين الكائنات الحية الدقيقة الأخرى. من ناحية أخرى ، يوجد وسيط MRS مكمل بالنيومايسين والباروموميسين وحمض الناليديكسيك وكلوريد الليثيوم ، وهو خاص للعد الانتقائي للبكتيريا المشقوقة في منتجات الألبان.

تجهيز

يزن 68.25 جرام من الوسط المجفف ويذوب في لتر واحد من الماء المقطر. اتركه لمدة 5 دقائق. لتذوب تمامًا ، انتقل إلى مصدر حرارة مع التحريك المستمر واتركه يغلي لمدة دقيقة إلى دقيقتين تعقيم في الأوتوكلاف عند 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.

عند مغادرة الأوتوكلاف ، اتركه للوقوف لبضع دقائق ووزعه بينما لا يزال ساخنًا في أطباق بتري المعقمة.

دع الألواح تتصلب وعكسها ، اطلبها في رفوف الأطباق وضعها في الثلاجة حتى الاستخدام. اترك الألواح لتصل إلى درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام.

يجب أن يكون الرقم الهيدروجيني للوسط 6.4 ± 0.2. توصي بعض البيوت التجارية بأن تتراوح درجة الحموضة بين 5.5 إلى 5.9.

الوسط المجفف لونه بيج ومجهز باللون الكهرماني الداكن.

يجب تخزين كل من الوسط المجفف والألواح المحضرة عند 2-8 درجة مئوية.

التطبيقات

يمكن أن تكون ألواح أجار MRS مبذرة على السطح (استنفاد أو ملعقة Drigalski). ويمكن أيضا أن تزرع بالعمق. يجب تحضين الألواح عند 37 درجة مئوية في ألفة دقيقة (4٪ O ₂ و 5-10٪ CO ₂) لمدة 24 إلى 72 ساعة.

يتم اختيار طريقة البذر حسب الغرض المنشود (العزلة أو العد).

خصائص المستعمرات

تنمو المستعمرات المفترضة من Lactobacillus بيضاء اللون ولها مظهر مخاطي أو كريمي على هذا الأجار. يجب تحديدها لاحقًا.

عزل بكتيريا حمض اللاكتيك

لهذا ، يتم استخدام البذر السطحي. العينات المراد زرعها تتطلب إجراءً سابقًا.

في حالة عينات لبن الأم ، يوصى بطرد 1 مل من العينة بسرعة 14000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق ، وذلك لإزالة الطبقة الدهنية. يتم التخلص من 900 ميكرولتر ، وفي الـ 100 ميكرولتر المتبقية يتم تعليق الرواسب وصبها على سطح أجار MRS ، ثم يجب توزيعها بالتساوي باستخدام ملعقة Drigalski.

في حالة عينات البراز ، يتم وزن جرام واحد (1) من البراز وتجانسه في 9 مل من 0.1٪ من ماء الببتون المعقم ، وهو ما يقابل التخفيف 1/10. ثم يتم إجراء التخفيفات المتسلسلة ، حتى ^{يتم الحصول على} تخفيف نهائي قدره 10 ^-4.

أخيرا، و 100 ميكرولتر من 10 ^-2 ، 10 ^-3 و 10 ^-4 تؤخذ التخفيفات والمصنفة كل تخفيف على MRS أجار، وتوزيع بالتساوي مع ملعقة Drigalski.

عدد بكتيريا حمض اللاكتيك

في هذه الحالة يتم البذر بالعمق.

بالنسبة لعينات حليب الثدي ، يتم أخذ 1 مل ووضعها في أنبوب بلاستيكي مخروطي معقم. تمت إضافة أجار MRS عند درجة حرارة تقريبية تبلغ 40 درجة مئوية إلى حجم نهائي يبلغ 25 مل ، للحصول على خليط متجانس. بعد ذلك ، يُسكب في أطباق بتري المعقمة بطريقة موحدة ويُترك ليقف حتى البلمرة.

بالنسبة لعينات البراز ، يتم إجراء التخفيفات ، كما هو موضح سابقًا. خذ 1 مل من كل تخفيف وضعه في أنابيب بلاستيكية مخروطية معقمة. يضاف مولتن MRS أجار إلى حجم 25 مل.

يُسكب خليط كل تخفيف بالتساوي في أطباق بتري المعقمة. أخيرًا ، يُترك للراحة حتى البلمرة.

تعتمد المستعمرة على أجار مان روجوسا وشارب (MRS). المصدر: صورة تم التبرع بها لهذا المقال. المؤلفون: Báez E، González G، Hernández G، López E، Mega M. الصورة مأخوذة أثناء البحث بعنوان: تقييم بكتيريا حمض اللاكتيك و Bifidobacteria مع إمكانات البروبيوتيك في حليب الثدي وبراز الرضع.

مستوى البحث

كل يوم تكتسب دراسة بكتيريا حمض اللاكتيك اهتمامًا أكبر ؛ يسعى الباحثون بشكل خاص إلى التعرف على السلالات الجديدة وإمكانية تخميرها كبداية للتوحيد القياسي في تصنيع منتجات الألبان ، من بين استخدامات أخرى.

بهذا المعنى ، ألفارادو وآخرون. (2007) استخدم أجار MRS لإجراء دراسة قاموا فيها بعزل وتحديد وتمييز بكتيريا حمض اللاكتيك الموجودة في الجبن الفنزويلي المدخن في جبال الأنديز.

ووجدوا في الجبن وجود بكتيريا من جنس Lactococcus و Lactobacillus ، وخلصوا إلى أن خلائط السلالات المعزولة مناسبة كسلالات بادئة في صناعة الجبن من الحليب المبستر.

من ناحية أخرى ، Sánchez et al. (2017) استخدم أجار MRS للتحقيق في وجود بكتيريا حمض اللاكتيك في الجهاز الهضمي للخنازير ، من أجل استخدامها كبروبيوتيك أصلية تزيد من إنتاجية الخنازير الصحية.

باستخدام هذه الوسيلة تمكنوا من عزل أربعة أنواع: Lactobacillus johnsonii و Lactobacillus brevis و Enterococcus hirae و Pediococcus pentosaceus.

وبالمثل ، Báez et al. (2019) استخدم أجار MRS لتقييم بكتيريا حمض اللاكتيك (LAB) و bifidobacteria مع إمكانية بروبيوتيك في حليب الثدي وبراز الأطفال.

تمكنوا من عزل 11 BAL و 3 Bifidobacteria sp في حليب الثدي ، و 8 BAL و 2 Bifidobacteria sp. في البراز. اجتمعت جميعها مع معايير معينة تثبت أنها بكتيريا ذات نشاط بروبيوتيك.

استنتج المؤلفون أن كلا من حليب الأم وبراز الأطفال الذين يرضعون رضاعة طبيعية حصرية بمثابة مصادر طبيعية للبكتيريا بروبيوتيك.

سؤال وجواب

لتقييم جودة MRS أجار ، سلالات التحكم مثل:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338، Lactobacillus casei ATCC 393، Bifidobacterium bifidum ATCC 11863، Lactobacillus plantarum MKTA 8014، Lactobacillus lactis MKTA 19435، Pediococcus damnosus MKTA 29358، Escherichia coli and Bifidum ATCC 11863.

النتائج المتوقعة هي نمو مرضٍ لأول 6 بكتيريا ، بينما يجب منع بكتيريا E. coli و Bacillus cereus تمامًا.

المراجع

1. Alvarado C، Chacón Z، Otoniel J، Guerrero B، López G. عزل وتحديد وتوصيف بكتيريا حمض اللاكتيك من جبن الأنديز الفنزويلي المدخن. استخدامه كثقافة بداية. سيينت. (ماراكايبو) 2007 ؛ 17 (3): 301-308. متاح على: scielo.org.
2. Sánchez H، Fabián F، Ochoa G، Alfaro عزل بكتيريا حمض اللاكتيك من الجهاز الهضمي للخنزير الصغير. القس التحقيق دكتور بيطري. بيرو 2017 ؛ 28 (3): 730-736. متاح على: scielo.org.
3. Báez E، González G، Hernández G، López E، Mega M. التحليل الحيوي. جامعة كارابوبو ، فنزويلا.
4. مختبر بريتانيا. MRS أجار. 2015 متاح على: britanialab.com
5. المساهمين في ويكيبيديا. MRS أجار. ويكيبيديا، الموسوعة الحرة. 10 كانون الثاني (يناير) 2018 ، الساعة 19:44 بالتوقيت العالمي المنسق. متاح على: wikipedia.org تم الوصول إليه في 17 فبراير 2019.
6. روي دي ميديا ​​لعزل وتعداد البكتيريا المشقوقة في منتجات الألبان. Int J Food Microbiol، 200128 ؛ 69 (3): 167-82.