أجار دكستروز البطاطس: الأساس المنطقي والتحضير والاستخدام - مادة الاحياء - 2025

و البطاطس سكر العنب أجار هي وسيلة، وغير صلبة - الثقافة الغذائية انتقائية. يمكن أن تنمو فيه الأنواع البكتيرية والفطرية ، ولكن يُشار إلى استخدامها بشكل خاص لعزل الفطريات والخمائر الخيطية. يُعرف أيضًا باسم وسيط PDA للتعبير الإنجليزي Potato Dextrose Agar.

إنه مفيد بشكل خاص لعزل الفطريات الممرضة للنبات ، أي تلك التي تؤثر على النباتات. لزرع العينات من الخضروات المصابة ، يمكن استخدام وسائل أخرى مثل Sabouraud agar أو malta-agar ، ومع ذلك ، للاستخدام الروتيني ، يُفضل أجار دكستروز البطاطس بسبب الحصول على قدر أكبر من التبويض.

Aspergillus niger و Sinemas على أجار دكستروز البطاطس على التوالي. المصدر: Alextrevelian 006 at English Wikipedia / Joselrojas

كما تستخدم في عد المستعمرات الفطرية في عينات من مستحضرات التجميل والمنتجات الصيدلانية وبعض منتجات الألبان. وبالمثل ، فهو مناسب لبذر عينات من قشور الجلد بحثًا عن الفطريات الجلدية ، التي تنمو جيدًا في هذا الوسط ، وتطور أصباغها المميزة.

وسط دكستروز البطاطس هو وسيلة بسيطة وسهلة التحضير في المختبر. يحتوي ، كما يوحي اسمه ، على ضخ البطاطس وسكر العنب وأجار أجار. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن إضافة المواد المثبطة لمنع نمو البكتيريا وزيادة انتقائية الأنواع الفطرية.

أساس

أجار دكستروز البطاطس هو وسط استزراع يوفر العناصر الغذائية اللازمة لتنمية الفطريات والخمائر الخيطية.

يوفر مزيج ضخ البطاطس مع الجلوكوز مصدرًا مثاليًا للطاقة لنمو مرضي للفطريات. بينما الأجار هو الذي يوفر الاتساق للوسيط.

الوسيط وحده لا يمنع نمو البكتيريا ، لذلك فهو وسط غير انتقائي. لجعله انتقائيًا ، يحتاج إلى إضافة مواد مثبطة مثل حمض الطرطريك أو المضادات الحيوية.

تجهيز

- تحضير محلي الصنع (غير تجاري) لأجار دكستروز البطاطس

أطباق بتري

يتم تحضيره على النحو التالي:

في المقام الأول ، تُغسل البطاطس جيدًا لإزالة التربة التي تمتلكها. يتم تقطيعها إلى شرائح رفيعة مع كل شيء وقشرة. يتم وزن 200 جرام من البطاطس وغليها في لتر من الماء المقطر لمدة نصف ساعة.

في نهاية الوقت ، قم بتصفية أو تصفية كل المستحضر من خلال القماش القطني.

يكتمل السائل الذي تم الحصول عليه بالماء المقطر حتى لتر واحد. أضف 20 جم من أجار أجار و 20 جم من سكر العنب إلى التسريب ، واخلط جيدًا وأوتوكلاف عند 121 درجة مئوية ، عند 15 رطلاً من الضغط لمدة 15 دقيقة.

اتركيه ليبرد حتى 50 درجة مئوية وقدميه في أطباق بتري المعقمة. يتم تخزين الأطباق المعدة في الثلاجة.

أسافين

يمكن أيضًا تحضير أسافين أجار دكستروز البطاطس.

في هذه الحالة ، قبل التعقيم في الأوتوكلاف ، يتم وضع 12 إلى 15 مل من الوسط في أنابيب ، ثم يتم تعقيمها لاحقًا وعند تركها تستلقي على دعامات خاصة حتى تصلب. احفظه في الثلاجة.

يظل الوسط عند درجة حموضة 5.6 ± 0.2 ، ومع ذلك ، تضيف بعض المختبرات حمض الطرطريك بنسبة 10 ٪ لخفض الرقم الهيدروجيني إلى 3.1 ± 0.1 من أجل منع نمو البكتيريا.

وبهذا المعنى تفضل المعامل الأخرى إضافة المضادات الحيوية لجعلها انتقائية لزراعة الفطريات ومنع نمو البكتيريا.

- التحضير التجاري لأجار دكستروز البطاطس

يزن 39 جم من الوسط المجفف المتاح تجاريًا ويذوب في لتر واحد من الماء المقطر. اتركه يرتاح لمدة 5 دقائق.

يسخن الخليط مع التحريك المتكرر حتى يذوب تماما. بعد ذلك ، يتم تعقيمها في الأوتوكلاف عند 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.

يمكن تحضير الأطباق أو الأوتاد. تابع كما هو موضح أعلاه.

يبقى الأس الهيدروجيني عند 5.6 ± 0.2. إذا كان الرقم الهيدروجيني 3.1 مطلوبًا ، فيجب إضافة 14 مل من حمض الطرطريك المعقم بنسبة 20٪ قبل التقديم إلى الأطباق.

الوسط الخام هو البيج والوسط المحضر من العنبر الفاتح مع مظهر غائم قليلاً أو براق.

التطبيقات

عملية زرع عينات النبات على أجار سكر العنب البطاطس

- للأوراق المتسخة

يتم تقطيع الأوراق إلى قطع.

في كوب 50 سم مكعب مع 50٪ كحول ، ضع قطع الأوراق (قطع ملطخة وصحية) لتطهير السطح لمدة 20 إلى 30 ثانية. تخلص من الكحول وأضف 20٪ هيبوكلوريت الصوديوم لمدة 40 إلى 50 ثانية إذا كانت أوراقًا رفيعة وقم بزيادة الوقت إلى 80 ثانية إذا كان لحاءًا وسجلات.

تخلص من هيبوكلوريت الصوديوم وأخذ القطع المطهرة بملقط معقم وضعها على سطح الوسط (بحد أقصى 10 قطع). حدد التاريخ واحتضان عند 20-30 درجة مئوية.

- للفواكه والدرنات

إذا كانت الثمرة سمينًا ، فافتح الثمرة المصابة بالفطر وخذ قطعًا بمشرط معقم من كل من الأجزاء المريضة والصحية وضعها على سطح الأجار.

إذا كانت الثمرة من الحمضيات ، مثل الليمون أو البرتقال ، فيجب فتحها وزرع بذورها.

عندما يتأثر سطح الثمرة ويلاحظ وجود الجراثيم ، فإن الطريقة المثالية هي استخدام طريقة الشبك على اللوحة ؛ يتكون هذا من لمس الأبواغ بملعقة معقمة ومبردة على شكل "L" ، ثم عمل بذر متعرج 2 إلى 3 مرات على الآجار.

-للحبوب

يتم تطهيرها كما هو موضح في الأوراق ثم يتم وضعها على الأجار لاحقًا.

- بالنسبة للفروع والسيقان

يتم كشط اللحاء ثم يتم أخذ الأجزاء السليمة والمريضة في وقت لاحق وزرعها مباشرة على الأجار.

يتم تحضين الصفائح المصنفة بطريقة هوائية عند درجة حرارة 20-30 درجة مئوية لمدة 72 ساعة.

عملية زرع عينات من الجلد أو الشعر أو الأظافر على أجار سكر العنب

يجب أن يتم أخذ العينات باستخدام شفرة مشرط رقم 11 ، إما لقص الشعر المصاب أو قشور الجلد أو الأظافر بحثًا عن الفطريات الجلدية. قبل أخذ العينة ، يجب تطهير المنطقة بنسبة 70٪ كحول.

- عينة من الجلد

في الآفات المتقشرة ، يجب كشط حافة الآفة ، حيث من المرجح أن توجد الفطريات هناك.

في الآفات النضحية ، تؤخذ العينة بمسحة جافة أو مبللة. زرع على الفور على أجار سكر العنب البطاطس أو أجار Sabouraud. تجنب وسائل النقل.

طريقة أخرى لأخذ العينات هي من خلال تقنية مربعة السجاد من Mariat و Adan Campos. في هذه الحالة ، يتم فرك المنطقة المصابة 5 مرات بقطعة من الصوف المعقمة للزراعة اللاحقة.

يمكن وضع العينة مباشرة في وسط الثقافة.

-عينة الشعر

اعتمادًا على الحالة المرضية ، يمكن قطع الجزء المصاب أو اقتلاعه. ضع العينة في وسط الثقافة.

عينة مسمار

يمكن كشط أو قص جزء معين من الظفر المصاب. سوف يعتمد على نوع الإصابة.

قطع العينة إلى قطع 1 مم قبل البذر من أجل زيادة احتمالية ملامسة الفطر مع وسط الثقافة.

إجراء تحديد الهوية

يتم عزل المستعمرات التي تم الحصول عليها في الصفيحة في أنابيب تحتوي على أجار دكستروز البطاطس لإجراء الدراسة المجهرية للمستعمرات (المظهر واللون والاتساق ودرجة التطور.

يمكن إجراء الدراسة المجهرية (مراقبة الهياكل وتشكيلاتها) عن طريق الزراعة الدقيقة أو الملاحظة المباشرة تحت المجهر بين الشريحة والشريحة.

عدد المستعمرة

يمكن أيضًا استخدام هذه الوسيلة لتحديد حمولة الفطريات والخميرة الموجودة في عينات النباتات أو الأغذية أو مستحضرات التجميل أو الأدوية. لهذا الغرض ، يتم استخدام أجار دكستروز البطاطس مع المضادات الحيوية ، مثل: (كلورامفينيكول ، كلوروتتراسيكلين أو كليهما).

صب 1 مل من العينة - ويفضل تخفيفها - في طبق بتري معقم وفارغ ، ثم قم بإذابة وسادة من آجار سكر العنب بالبطاطس واتركها لتبرد حتى 45 درجة مئوية. تصب في طبق بتري وتدويرها حتى تتجانس دعها ترتاح حتى تتصلب.

احتضان هوائيا عند 20-25 درجة مئوية (العفن) أو 30-32 درجة مئوية (الخمائر) لمدة 5 إلى 7 أيام أو أكثر ، اعتمادا على نوع الفطر المطلوب ونوع العينة. يمكن استخدام لوحين للاحتضان في كلا نطاق درجات الحرارة.

عد المستعمرات الفطرية في عينة الغذاء. أجار دكستروز البطاطس مع المضادات الحيوية. المصدر: Pxhere.com photo / 777267

صيانة السلالات الفطرية

يمكن استخدام آجار دكستروز البطاطس للحفاظ على سلالات فطرية قابلة للحياة لعدة سنوات.

لهذا الغرض ، يزرع الفطر على أسافين أجار دكستروز البطاطس وبمجرد نمو الفطر ، يتم تغطيته بالزيت المعدني. يجب تعقيم الزيت في الأوتوكلاف لمدة 45 دقيقة ، ولزوجته من 300 إلى 330 سايبولت تقريبًا. يجب أن يكون الزيت على ارتفاع 1 إلى 2 سم فوق طرف الشطبة.

سؤال وجواب

من كل دفعة معدة ، خذ 1 أو 2 لوحة واحتضانها عند 25 درجة مئوية لمدة 48 ساعة أو عند 20 درجة مئوية لمدة 96 ساعة. إن التحكم الجيد في العقم هو الذي لا يلاحظ فيه تطور المستعمرة.

يمكن أيضًا استخدام سلالات التحكم المعروفة أو المعتمدة مثل:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763 و Candida albicans ATCC 10231 و Aspergillus brasiliensis ATCC 16404 و Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. ومن المتوقع نمو جيد في جميع الحالات.

المراجع

1. مختبرات بريتانيا. بطاطس الجلوكوز أجار. 2015 متاح على: britanialab.com
2. مختبرات نيوجين. أجار البطاطس سكر العنب. متاح على: foodafety.neogen.com
3. مختبر انسومولاب. أجار دكستروز البطاطس. متاح في: insumolab.cl
4. Forbes B، Sahm D، Weissfeld A. (2009). بيلي وسكوت التشخيص الميكروبيولوجي. 12 إد. التحرير Panamericana SA Argentina.
5. Casas-Rincón G. علم الفطريات العام. 1994. الطبعة الثانية جامعة فنزويلا المركزية ، إصدارات المكتبات. فنزويلا كراكاس.
6. Aceituno M. تقييم الجودة الميكروبيولوجية في ظلال العيون ، مسحوق مضغوط من نوع مختبر الإنتاج الوطني ، وفقًا للطريقة المرجعية Pharmacopea Usp 2005. أطروحة للتأهل للحصول على لقب الكيميائي الصيدلاني. جامعة سان كارلوس في غواتيمالا.
7. Cuétara M. تجهيز عينات السطح. المجلة الأيبيرية الأمريكية لعلم الفطريات. 2007 ؛ ص. 1-12