SABOURAUD AGAR: الأساس والتحضير والاستخدامات - مادة الاحياء - 2026

و أجار سابورو ، المعروف أيضا باسم سكر العنب سابورو أجار، هو وسيلة الصلبة، خصوصا المخصب لعزل والتنمية من الفطريات، مثل الخمائر، وقوالب والجلدية.

لذلك ، لا يمكن أن ينقص هذا الوسط في مختبر علم الأحياء الدقيقة للتحقيق في وجود الفطريات المسببة للأمراض أو الانتهازية ، سواء من العينات السريرية أو غير السريرية. وبالمثل ، فهو مثالي أيضًا لنمو البكتيريا الخيطية مثل Streptomyces و Nocardias. استخدامه واسع جدًا ، حيث يمكن استخدامه في علم الفطريات البشرية والحيوانية والنباتية والصناعية.

أ. سابورو أجار غير مصنف. ب. Sabouraud آجار بذر الخميرة. المصدر: الصور التي التقطها المؤلف ماجستير. مارييلسا جيل

تم إنشاء هذه الوسيلة في عام 1896 من قبل طبيب الأمراض الجلدية البارز ريموند سابورو ، الذي أصبح اختصاصيًا مشهورًا عالميًا في اضطرابات فروة الرأس ، التي تسببها بشكل رئيسي الفطريات الجلدية.

كان إنشائه مهمًا جدًا لدرجة أنه تم استخدامه منذ ذلك الحين ولا يزال حتى اليوم ، على الرغم من بعض التعديلات.

على الرغم من أنه خاص بالفطريات ، إلا أنه يمكن للبكتيريا أن تنمو في هذا الوسط ، لذلك ، بالنسبة للعينات ذات النباتات المختلطة ، فإن إدراج المضادات الحيوية في تحضيرها ضروري لمنع نمو النباتات البكتيرية التي قد تكون موجودة.

يجب أن يتم اختيار المضاد الحيوي بعناية مع مراعاة نوع الفطريات المراد استردادها ، حيث يتم تثبيط بعضها في وجود مواد معينة.

أساس

أجار Sabouraud dextrose هو وسيط يكون في صيغته الأصلية انتقائيًا بشكل ضعيف ، نظرًا لأن درجة الحموضة الحمضية تبلغ 5.6 ± 0.2 ، ومع ذلك ، لا يزال بإمكان البكتيريا أن تتطور ، بشكل رئيسي في الحضانات المطولة.

يحتوي الوسط على بيبتون الكازين وهضم البنكرياس للأنسجة الحيوانية ، والتي توفر مصدر الكربون والنيتروجين لنمو الكائنات الحية الدقيقة.

كما أنه يحتوي على نسبة عالية من الجلوكوز ، والذي يعمل كمصدر للطاقة ، ويعزز نمو الفطريات على البكتيريا. كل هذا ممزوج بأجار أجار ، وهو مكون يمنحه الاتساق الصحيح.

من ناحية أخرى ، يمكن أن يكون أجار Sabouraud dextrose انتقائيًا إذا تمت إضافة المضادات الحيوية.

مع المضادات الحيوية يكون مفيدًا بشكل خاص في عينات الجروح أو القرحات المفتوحة أو أي عينة يشتبه في وجود تلوث بكتيري كبير فيها.

التركيبات الأكثر استخدامًا من Sabouraud dextrose agar مع المضادات الحيوية

- أجار الصابرود مع الكلورامفينيكول: مثالي لاستعادة الخمائر والفطريات الخيطية.

- سابورو أجار مع الجنتاميسين والكلورامفينيكول: تنمو معظم الفطريات والخمائر الخيطية في هذا الوسط ، وتثبط عددًا كبيرًا من البكتيريا ، بما في ذلك البكتيريا المعوية والزائفة والمكورات العنقودية.

- سابورو أجار مع سيكلوهكسيميد: وهو مفيد بشكل خاص لعينات من الجلد أو الجهاز التنفسي ، طالما أن الاشتباه في وجود فطريات ثنائية الشكل.

يجب استخدام سيكلوهيكسيميد بحذر ؛ على الرغم من استخدامه لمنع نمو الفطريات والخمائر غير المسببة للأمراض أو البيئية التي قد تكون موجودة كملوثات في العينة ، إلا أنه يمنع أيضًا نمو بعض الفطريات مثل Cryptococcus neoformans و Aspergillus fumigatus و Allescheria boydii و Penicillium sp وغيرها من الفطريات الانتهازية.

- أجار سابورو مع الكلورامفينيكول بالإضافة إلى الهكسيميد الحلقي: يستخدم بشكل أساسي لعزل الفطريات الجلدية والفطريات ثنائية الشكل. من عيوبه أنه يثبط بعض أنواع الفطريات الانتهازية مثل المبيضات غير البيضاء ، الرشاشيات ، Zygomycetes أو C. neoformans.

- سابورو أجار بالكلورامفينيكول والستربتومايسين والبنسلين جي وسيكلوهيكسيميد: وهو مثالي للعينات شديدة التلوث بالبكتيريا والفطريات الرخامية ، لكن له عيبًا أنه يثبط نمو الأكتينوميسيس والنوكارديا ، بالإضافة إلى الفطريات الانتهازية المذكورة أعلاه.

تجهيز

إذا كان لديك المكونات بشكل منفصل ، فيمكن تحضيرها على النحو التالي:

سابورو دكستروز أجار

لوزن:

- 40 غرام سكر العنب

- 10 جرام من الببتون

- 15 غرام أجار أجار

- يجب قياس 1000 مل من الماء المقطر

يتم خلط جميع المكونات ، يتم ضبط الأس الهيدروجيني إلى 5.6. تذوب المواد المذابة بالغليان ، 20 مل من الوسط توزع في أنابيب 25 × 150 مم ، بدون حافة ويفضل بغطاء قطني.

أنابيب بغطاء قطني. المصدر: صورة التقطها المؤلف ماجستير. مارييلسا جيل

يمكن أيضًا استخدام أحجام أنابيب أخرى ، حسب التوافر.

يتم تعقيمها بالبخار لمدة 10 دقائق في جو من الضغط (121 درجة مئوية). لا ينبغي تجاوز وقت التعقيم. عند مغادرة الأوتوكلاف ، تميل الأنابيب بمساعدة دعامة حتى تصلب في منقار الفلوت.

طريقة أخرى هي إذابة المكونات بالتسخين حتى الغليان. الأوتوكلاف لمدة 10 دقائق في نفس القنينة ثم توزيع 20 مل في أطباق بتري.

إذا كان لديك وسيط أجار Sabouraud dextrose يحتوي بالفعل على جميع المكونات ، فانتقل إلى وزن الكمية المحددة من قبل الشركة التجارية مقابل لتر واحد من الماء. باقي الخطوات هي نفسها المذكورة أعلاه.

Sabouraud dextrose agar (تعديل Emmons)

لوزن:

- 20 غرام سكر العنب

- 10 جرام من الببتون

- 17 غرام أجار أجار

- يجب قياس 1000 مل من الماء المقطر

يتم خلط جميع المكونات ، يتم ضبط الأس الهيدروجيني إلى 6.9. تابع بنفس طريقة الحالة السابقة.

هناك منازل تجارية تقدم الوسط مع جميع المكونات. في هذه الحالة ، قم بالوزن والتحضير كما هو موضح في الملحق.

أجار Sabouraud سكر العنب (تعديل Emmons) مع الكلورامفينيكول

محلول الكلورامفينيكول

- تزن 500 مجم من قاعدة الكلورامفينيكول

- قم بقياس 100 مل من 95٪ إيثانول

- مزج

يتم تحضير وسط آجار Sabouraud dextrose (Emmons) كما هو موصوف سابقًا وإضافة 10 مل من محلول الكلورامفينيكول قبل التعقيم لكل لتر من الوسط.

Sabouraud Emmons Dextrose Agar مع سيكلوهيكسيميد

محلول مخزون سيكلوهيكسيميد

- تزن 5 جرام من الهكسيميد الحلقي

- يجب قياس 100 مل من الأسيتون

- مزج

يتم تحضير وسط آجار Sabouraud dextrose (Emmons) كما هو موصوف بالفعل وإضافة 10 مل من محلول مخزون سيكلوهيكسيميد قبل التعقيم لكل لتر من الوسط.

سابورو دكستروز أجار (إيمونز) مع الكلورامفينيكول وسيكلوهيكسيميد

يتم تحضير وسط أجار Sabouraud dextrose (Emmons) كما هو موصوف بالفعل وإضافة 10 مل من محلول الكلورامفينيكول و 10 مل من محلول مخزون الكلورامفينيكول لكل لتر من الوسط قبل التعقيم.

المضادات الحيوية الأخرى التي يمكن إضافتها

20.000 إلى 60.000 وحدة من البنسلين لكل لتر متوسط.

30 مجم من الستربتومايسين لكل لتر متوسط.

يجب دمج كليهما بعد تعقيم الوسيط ، وتبريده قليلاً (50-55 درجة مئوية).

0.04 جم من نيومايسين لكل لتر متوسط.

0.04 جم جنتاميسين لكل لتر متوسط.

إعتبارات خاصة

من أجل السلامة ، يُفضل زرع أجار Sabouraud dextrose في أنابيب على شكل إسفين (مائل في منقار الفلوت) بدلاً من أطباق بتري ، لتجنب تشتت واستنشاق الجراثيم.

من المهم أن تكون أنابيب أجار Sabouraud مغطاة بالقطن وليس بغطاء لولبي ، حيث ثبت أن الظروف شبه اللاهوائية تمنع تكوين الجراثيم في بعض السلالات ، على سبيل المثال Coccidioides immitis. كما أن معظم الفطريات هوائية.

في حالة استخدام غطاء لولبي ، لا تغلق بإحكام.

سؤال وجواب

يجب أن تخضع الوسائط المعدة لمراقبة الجودة للتحقق من عملها بشكل صحيح. لهذا ، يتم زرع بعض سلالات التحكم.

بالنسبة لآجار Sabouraud dextrose مع الكلورامفينيكول ، يمكن استخدام سلالات ATCC من Candida albicans ، والتي يجب أن تتمتع بنمو ممتاز. يتم تلقيح صفيحة أخرى بسلالات الإشريكية القولونية ، والتي يجب تثبيطها تمامًا.

يتم أيضًا تحضين الصفيحة غير الملقحة حيث لا ينبغي أن تنمو الكائنات الحية الدقيقة.

بالنسبة لأجار Sabouraud dextrose مع الكلورامفينيكول والسيكلوهيكسيميد ، يمكن استخدام سلالات من Trichophyton mentagrophytes ، ويجب أن تتطور بشكل جيد. يتم تلقيح صفيحة أخرى بسلالة من Aspergillus flavus ، حيث يجب أن يكون هناك نمو ضئيل أو معدوم. بالإضافة إلى ذلك ، يتم تحضين الصفيحة غير الملقحة لإثبات عقمها.

بالنسبة إلى Sabouraud dextrose agar with cycloheximide ، يتم استخدام سلالات المبيضات البيضاء ، Trichophyton rubrum أو Microsporum canis ، والتي يجب أن تظهر نموًا جيدًا.

وبالمثل ، يتم تضمين سلالة من Aspergillus flavus ، تظهر نموًا ضئيلًا أو معدومًا. أخيرًا ، احتضن صفيحة غير محصنة للتحكم في العقم.

التطبيقات

الثقافة الأولية

يحتوي أجار سابورو دكستروز الكلاسيكي على 4 جرامات من سكر العنب وهو ممتاز كوسيط عزل أولي ، حيث يُظهر الشكل المورفولوجي المميز لكل فطر.

كما أنها ممتازة لإظهار إنتاج الصبغ. ومع ذلك ، فهي ليست أفضل وسيلة لمراقبة التبويض.

كما أنه لا ينصح به لزراعة Blastomyces dermatitidis ، والذي يثبطه التركيز العالي للجلوكوز الموجود.

من ناحية أخرى ، للزراعة يجب أن تؤخذ بعين الاعتبار بعض الاعتبارات.

تنمو بعض الفطريات بشكل أفضل في درجة حرارة الغرفة ، مثل العفن ، والبعض الآخر ينمو بنجاح عند 37 درجة مئوية ، مثل بعض الخمائر ، والبعض الآخر يمكن أن ينمو في درجات الحرارة (الفطريات ثنائية الشكل).

لهذا السبب ، من الضروري أحيانًا استخدام العديد من ألواح أجار Sabouraud لنفس العينة ، نظرًا لأن البذر المكرر يتم غالبًا لاحتضان صفيحة واحدة في درجة حرارة الغرفة وأخرى عند 37 درجة مئوية.

على سبيل المثال ، زرعت Sporothrix schenckii في لوحين ؛ يتم تحضين أحدهما في درجة حرارة الغرفة للحصول على مرحلة العفن والآخر يتم تحضينه عند 37 درجة مئوية للحصول على مرحلة الخميرة ، ولكن في الأخير من الضروري إضافة 5٪ من الدم إلى الوسط.

في حالات أخرى ، مثل عينات الورم الفطري ، يتم زرع صفيحتين من صابورو أجار ، أحدهما يحتوي على الكلورامفينيكول والآخر بهكسيميد حلقي. الأول سيسمح بنمو العوامل المسببة للورم الفطري من أصل فطري (الورم الفطري) والعوامل المسببة الثانية للورم الفطري من أصل بكتيري ، مثل الورم الفطري الشعاعي.

التجرثم

يحتوي آجار Sabouraud Dextrose المعدل من Emmons على 2 جرام من سكر العنب ولا يستخدم فقط للعزل ، ولكن أيضًا لتكاثر الفطريات والحفاظ عليها.

في هذا الوسط ، يمكن استعادة سلالات Blastomyces dermatitidis.

الحفاظ على

للحفاظ على مزارع الفطر ، يمكن تخزينها في الثلاجة (2-8 درجة مئوية). يمكن أن يختلف وقت الحفظ بين 2 إلى 8 أسابيع. بعد هذا الوقت يجب أن تتم ثقافتهم الفرعية لتكرار العملية.

بعض الفطريات تبقى في أفضل حالاتها في درجة حرارة الغرفة ، مثل Epidermophyton foccosum و Trichophyton schoenleinnii و T. violaceum و Microsporum audounii.

يمكن إطالة مدة الحفاظ على الإجهاد لتجنب تعدد الأشكال إذا تمت إزالة الدكستروز تمامًا من الأجار وإذا تم تقليل كمية الأجار في الوسط لتجنب الجفاف.

الثقافات الصغيرة

لتحديد بعض الفطريات الخيطية ، من الضروري إجراء الزراعة الدقيقة باستخدام Sabouraud agar أو وسائل خاصة أخرى لمراقبة هياكل التكاثر الجنسي واللاجنسي.

في علم الفطريات البشرية

يستخدم بشكل أساسي في تشخيص الأمراض الفطرية وخاصة تلك التي تصيب الجلد وملحقاته (الشعر والأظافر).

يمكن أن تكون العينات عبارة عن إفرازات أو إفرازات أو الجلد أو الشعر أو الأظافر أو البلغم أو السائل النخاعي أو البول. مسببات الأمراض المعزولة بشكل شائع هي الفطريات الجلدية ، الفطريات التي تسبب داء فطريات تحت الجلد والجهازية.

علم الفطريات الحيوانية

غالبًا ما تتأثر الحيوانات بالعدوى الفطرية ، لذلك فإن Sabouraud Agar مفيد في علم فطريات الحيوانات كما هو الحال في البشر.

على سبيل المثال ، غالبًا ما تؤثر الفطريات الجلدية على الحيوانات. هذا هو الحال مع Microsporum canis var distortum ، الذي يصيب كثيرًا الكلاب والقطط والخيول والخنازير والقرود. وبالمثل ، فإن Microsporum gypseum تصيب الكلاب والقطط والماشية.

تتأثر الطيور مثل الدجاج والديك والدجاج بـ Microsporum gallinae.

الفطريات الأخرى ، مثل Zymonema farciminosum ، هي أيضًا سبب المرض في الحيوانات ، وخاصة في الخيول والبغال والحمير ، مما يؤدي إلى حدوث التهاب كبير في الأوعية اللمفاوية.

تؤثر Sporothrix schenkii و Histoplasma capsulatum على الحيوانات الأليفة والبشر.

علم الفطريات البيئية

يمكن للعديد من الفطريات المسببة للأمراض أو الانتهازية أن تتركز في أي وقت في بيئة معينة ، خاصة في غرف العمليات ووحدات العناية المركزة (ICUs) في العيادات والمستشفيات. لذلك من الضروري القيام بالرقابة عليها.

الأماكن الضعيفة الأخرى هي المكتبات والمباني القديمة ، والتي يمكن أن تتأثر بتركيز الفطريات البيئية.

في الدراسات البيئية ، يستخدم Sabouraud dextrose agar لعزل الفطريات.

علم الفطريات الصناعية

لا يمكن أن يكون أجار Sabouraud سكر العنب غائبًا عن دراسة الفطريات الملوثة في إنتاج مستحضرات التجميل والأغذية والمشروبات والجلود والمنسوجات وغيرها.

علم الفطريات النباتية

تعاني النباتات أيضًا من أمراض تسببها الفطريات ، وتؤثر على أجزاء مختلفة من النبات ، والتي يمكن أن تنهي الحصاد ، وتسبب خسائر كبيرة في الزراعة.

المراجع

1. كوينكا م ، جاديا الأول ، مارتين إي ، بيمان جيه ، بونتون جيه ، رودريغيز (2006). التشخيص الميكروبيولوجي للفطريات ودراسات الحساسية لمضادات الفطريات. توصيات الجمعية الإسبانية للأمراض المعدية والأحياء الدقيقة السريرية. متاح في: coesant-seimc.org
2. مختبر ValteK. (2009). سابورو دكستروز أجار مع سيكلوهيكسيميد. متاح على: andinamedica.com.
3. نافارو أو. (2013). علم الفطريات البيطرية. الجامعة الزراعية الوطنية. نيكاراغوا.
4. Forbes B، Sahm D، Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 إد. الأرجنتين. التحرير Panamericana SA
5. Casas-Rincón G. علم الفطريات العام. 1994. الطبعة الثانية جامعة فنزويلا المركزية ، إصدارات المكتبات. فنزويلا كراكاس.