و أجار TCBS هو وسيلة للثقافة انتقائية للغاية والتفضيلية الصلبة، وتستخدم لعزل وزراعة البكتيريا من جنس الضمة، وخاصة ضمة الكوليرا، V. نظيرة الحالة للدم وV. vulnificus كما مسببات الأمراض الرئيسية من هذا النوع.
يشير الاختصار TCBS إلى Thiosulfate Citrate Bile Sucrose. يُعرف هذا الأجار أيضًا بالوسيط الانتقائي لـ Vibrios. تم إنشاء الصيغة الأصلية بواسطة Nakanishi وتم تعديلها لاحقًا بواسطة Kobayashi.
وسط TCBS التجاري وصفيحة أجار TCBS المصنفة بضمة الكوليرا. المصدر: الصورة 1: مأخوذة بواسطة المؤلف ماجستير. مارييلسا جيل / الصورة 2: Microrao ، JJMMC ، Davangere ، كارناتاكا ، الهند
يتكون من مستخلص الخميرة ، ببتون اللحم ، التريبتين ، سترات الصوديوم ، ثيوسلفات الصوديوم ، ثور الصفراء ، السكروز ، كلوريد الصوديوم ، سترات الحديديك ، البروموثيمول الأزرق ، الثيمول الأزرق والأجار.
تسمح هذه التركيبة بالتنمية الكافية لأنواع الضمات من عينات الماء والغذاء والبراز ؛ باستثناء Vibrio hollisae ، الذي لا ينمو على هذا الوسط. علاوة على ذلك ، فإن وسط TCBS قادر على منع نمو البكتيريا المصاحبة الأخرى ، وخاصة القولونيات.
بسبب مشاكل الجهاز الهضمي وخارجه الخطيرة التي تنتجها بعض الأنواع من جنس الضمة ، فإن تشخيصه مهم للغاية. يصاب البشر بشكل رئيسي عن طريق تناول الأطعمة النيئة أو غير المطبوخة جيدًا من البحر أو المياه الملوثة ، ولكن أيضًا من خلال عدوى الجروح.
لهذا السبب ، يجب أن تشمل المختبرات السريرية TCBS أجار في دراسة زراعة البراز لعينات البراز السائل ، خاصة مع ظهور ماء الأرز. خاصة إذا أبلغ المريض عن ملامسته لمياه البحر أو تناول المحار أو الأسماك.
أساس
خلاصة الخميرة ، بيبتون اللحم ، والتريبتين هي المصدر الغذائي لهذه الوسيلة. ومع ذلك ، فإن أجار TCBS هو وسط غير مضياف لمعظم البكتيريا.
يتم الحصول على انتقائية عالية من خلال إضافة سترات الصوديوم والصفراء الثور ؛ كلاهما من العوامل المثبطة التي توفر أيضًا درجة حموضة قلوية للوسط ، مما يحد من نمو النباتات المصاحبة ويفضل نمو ضمة الكوليرا ، من بين الأنواع الأخرى. وتجدر الإشارة إلى أن ضمة الكوليرا شديدة الحساسية للحموضة.
من جانبه ، يقوم كلوريد الصوديوم بموازنة الوسط تناضحيًا. علاوة على ذلك ، نظرًا لأن تركيزه مرتفع ، فإنه يعمل أيضًا كعامل مثبط ، ويفضل نمو البكتيريا الملحية.
السكروز هو السكر القابل للتخمر الذي ، مع مؤشرات الأس الهيدروجيني الأزرق البروموثيمول والأزرق الثيمول ، يعطي الوسط طابعه التفاضلي. لهذا السبب ، يمكن باستخدام هذه الوسيلة التفريق بين سلالات تخمير السكروز وبين السلالات غير المخمرة.
تتطور مستعمرات سلالات تخمير السكروز إلى اللون الأصفر وستحول الوسط من الأخضر إلى الأصفر بسبب إنتاج الحمض. تنمو المواد غير المخمرة شفافة ويظل الوسط هو اللون الأصلي (الأخضر).
وبالمثل ، يحتوي هذا الوسط على ثيوسلفات الصوديوم كمصدر للكبريت وسيترات الحديديك كعامل نامي. يظهر كلاهما بكتيريا قادرة على إنتاج كبريتيد الهيدروجين (غاز عديم اللون). H 2 ويتكون من S وحمض وفي وقت لاحق على التفاعل مع سترات الحديديك ومرئية أشكال راسب السوداء.
أخيرًا ، الأجار هو ما يوفر الاتساق القوي للوسط.
تجهيز
تزن 89 جم من الوسط المجفف وتذوب في لتر واحد من الماء المقطر. يساعد على الذوبان عن طريق التسخين والتحريك المتكرر. يمكن غلي الخليط لمدة تصل إلى دقيقتين.
لا يتم تعقيم هذه الوسيلة بالبخار المضغوط. بعد الذوبان ، يتم تقديمه مباشرة على أطباق معقمة. عندما تتصلب ، يتم ترتيبها بطريقة مقلوبة على الصفائح الدموية وتخزينها في الثلاجة (2-8 درجة مئوية) حتى الاستخدام.
يجب أن يظل الوسط بعد التحضير عند درجة الحموضة 8.6 ± 0.2.
لون الوسط المجفف هو البيج الفاتح أو البيج المخضر ، ولون الوسط أخضر الغابة أو أخضر مزرق.
من المهم السماح للألواح بالتسخين قبل زرع العينات.
استعمال
العينة الأكثر شيوعًا لعزل الضمة هي البراز الإسهال.
يجب نقل عينات البراز ، إذا لم يكن بذرها على الفور على الوسط الانتقائي ، على وسط كاري بلير.
لزيادة حساسية المزرعة ، يمكن تمرير البراز عبر ماء الببتون عند درجة حموضة 8.4 كوسيط إثراء لمدة أقصاها 8 ساعات ، ومن هناك تتم زراعته في وسط TCBS.
يجب أيضًا أن يؤخذ في الاعتبار أن بعض سلالات الضمات يمكن أن تسبب تسمم الدم في المرضى الذين يعانون من كبت المناعة ، وبالتالي يمكن عزلهم من مزارع الدم. وبالمثل ، يمكن تحليل عينات من الماء والغذاء من البحر عند انتشار وباء مرض الكوليرا.
زرعت
يجب أن يكون لقاح عينة الدراسة بارزًا ، ويتم البذر بطريقة التخطيط عن طريق الإرهاق. يتم تحضين الصفائح عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة في التمارين الهوائية.
المستعمرات المفترضة لضمة الكوليرا متوسطة الحجم ، ناعمة ، معتم ، ذات حواف رفيعة ولونها أصفر بسبب تخمر السكروز.
تنمو أنواع V. alginolyticus و V. fluvialis و V. hareyi و V. cincinnatiensis و V. furnissii و V. metschnikovii وبعض V. vulnificus بطريقة مماثلة. أنواع الضمات الأخرى المهمة سريريًا مثل V. parahaemolyticus لا تخمر السكروز ، وتتطور كمستعمرات زيتون خضراء.
صفيحة أجار TCBS المصنفة مع Vibrio parahaemolyticus. المصدر: isis325 فليكر
من ناحية أخرى ، يجب ألا يغيب عن البال أن بعض سلالات Aeromonas و Plesiomonas التي هي أوكسيديز (+) يمكن أن تنمو في هذا الوسط ، مما يؤدي إلى تكوين مستعمرات صفراء يمكن أن تربك الطبيب. بينما تنمو بعض سلالات Pseudomonas أيضًا أوكسيديز (+) كمستعمرات خضراء مثل V. parahaemolyticus.
تحديد
لا ينبغي أبدًا إجراء اختبار أوكسيديز الموجب لجنس الضمة من المستعمرات التي تم الحصول عليها من أجار TCBS ، لأن النتيجة التي تم الحصول عليها ستكون سلبية كاذبة تتداخل المركبات الموجودة في الوسط بشدة مع هذا الاختبار. لذلك ، يجب أن تكون مصنوعة من ثقافات فرعية على أجار الدم.
سؤال وجواب
لإثبات أن الوسيلة في حالة جيدة ، يُنصح بزرع سلالات تحكم معروفة أو معتمدة ، ومراقبة ما إذا كان النمو يلبي الخصائص المتوقعة.
لهذا يمكنك استخدام سلالات من:
- ضمة الكوليرا - نمو مرض (مستعمرات صفراء ، حدود شفافة).
- Vibrio parahaemolyticus - - نمو مرضٍ (مستعمرة ذات مركز أخضر وحدود شفافة).
-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - نمو مرضٍ (مستعمرات صفراء مع هالات من نفس اللون حول المستعمرة).
- المكورات البرازية ATCC 29212 - تثبيط كلي أو جزئي (مستعمرات صغيرة صفراء أو شفافة).
- Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853- تثبيط جزئي أو كلي (المستعمرات الزرقاء).
-الإشريكية القولونية ATCC 25922 - مثبطة تمامًا.
- Proteus mirabilis ATCC 43071 - تثبيط كلي أو جزئي. (المستعمرات الصغيرة مركز أخضر حدود شفافة).
يجب أن تكون حضانة الوسط غير الملقح دون تغيير.
المراجع
- مختبرات ديفكو فرانسيسكو سوريا ملغيزو. TCBS أجار. 2009 متاح في: f-soria.es
- مختبر BD. BD. TCBS Agar 2003 متوفر على: bd.com
- مختبرات بريتانيا. متوسط TCBS. 2015 متاح على: britanialab.com
- مختبرات أكوميديا. TCBS أجار. 2016 متاح على: foodafety.neogen.com
- Forbes B، Sahm D، Weissfeld A. (2009). بيلي وسكوت التشخيص الميكروبيولوجي. 12 إد. التحرير Panamericana SA Argentina.
- Koneman E ، Allen S ، Janda W ، Schreckenberger P ، Winn W. (2004). التشخيص الميكروبيولوجي. 5th إد. التحرير Panamericana SA Argentina.