أجار TSI: الأساس المنطقي والتحضير والاستخدامات - مادة الاحياء - 2026

و أجار TSI أو ثلاثة أضعاف أجار الحديد السكر هو وسيلة الصلبة التي هي بمثابة ل اختبار الكيمياء الحيوية لتوجيه عملية تحديد الأولي للغرام سلبية العصيات. يعتمد على إظهار تخمر السكريات الموجودة وإنتاج كبريتيد الهيدروجين والغاز.

يشبه تكوينه وأساسه إلى حد كبير اختبار Kligler للحديد ، مع اختلاف أن الأخير يحتوي فقط على الجلوكوز واللاكتوز. بدلاً من ذلك ، كما يوحي اسمه ، يحتوي أجار الحديد الثلاثي السكر على ثلاثة كربوهيدرات قابلة للتخمر: الجلوكوز واللاكتوز والسكروز.

صور اختبار TSI مع كائنات دقيقة مختلفة A. Escherichia coli ، B. Shigella flexneri ، C) Salmonella typhimurium ، D. Pseudomonas aeruginosa. المصدر: Witmadrid ، من ويكيميديا ​​كومنز

بالإضافة إلى ذلك ، يحتوي وسط TSI على أربعة مشتقات بروتينية تجعله أجارًا مغذيًا للغاية: مستخلص الخميرة ، ومستخلص اللحوم ، والببتون والببتون البروتيني. يحتوي أيضًا على كبريتات الأمونيوم الحديدية ، ثيوسلفات الصوديوم ، كلوريد الصوديوم ، الفينول الأحمر ، والأجار.

عدم قدرة الكائنات الحية الدقيقة على تخمير الجلوكوز الموجود في الوسط يستبعده على الفور من الانتماء إلى عائلة Enterobacteriaceae. ومن ثم فإن هذا الاختبار ضروري في تحديد مسار التعريف الذي يجب اتباعه لتحديد الجنس والأنواع.

يقرر كل مختبر ما إذا كان سيعمل مع TSI agar أو مع Kligler iron agar.

أساس

كل من المركبات تؤدي وظيفة داخل الوسط.

كلوريد الصوديوم وأجار

كلوريد الصوديوم ضروري للحفاظ على التوازن الأسموزي للوسط. بينما يعطي أجار الاتساق الصلب.

مؤشر PH (أحمر الفينول)

تتم موازنة الأس الهيدروجيني للوسط المحضر عند 7.3 ويتحول مؤشر الأس الهيدروجيني (أحمر الفينول) إلى اللون الأصفر أقل من 6.8. هذا يعني أن الكميات الصغيرة من الأحماض الناتجة عن تخمير السكريات ستحول الوسط من الأحمر البرتقالي إلى الأصفر.

في حالة عدم حدوث تخمير ، سيكون هناك قلونة للوسط من خلال استخدام الببتون ، ويتحول من الأحمر البرتقالي إلى الأحمر القوي.

مشتقات البروتين (مستخلص الخميرة ، مستخلص اللحوم ، الببتون وببتون البروتين)

عندما تستقلب البكتيريا البروتينات الموجودة في أجار TSI ، يتم إنتاج الأمينات التي تجعل الوسط قلويًا (بشكل رئيسي على المستوى المائل) ، لأن التفاعل يتطلب الأكسجين. يحول الأمينات الإطار إلى اللون الأحمر الفاتح.

لكن هذا سيعتمد على قدرة البكتيريا على تخمير الكربوهيدرات أم لا.

تخمر الكربوهيدرات (الجلوكوز واللاكتوز والسكروز)

يمكن أن تعطي دراسة تخمير السكريات عدة صور وكل صورة يتم تفسيرها بشكل مختلف. يقسم تفسير الاختبار الكائنات الحية الدقيقة إلى 3 فئات: مخمرات الجلوكوز غير المخمرة واللاكتوز غير المخمرة واللاكتوز / مخمر السكروز.

وتجدر الإشارة إلى أن كمية الجلوكوز في الوسط محدودة ، في حين أن تركيز اللاكتوز والسكروز أعلى 10 مرات.

ستبدأ بكتيريا عائلة Enterobacteriaceae وغيرها من الكائنات الحية الدقيقة المخمرة للجلوكوز في تخمير هذا السكر لأنه أبسط كربوهيدرات للطاقة.

من ناحية أخرى ، يعتبر اللاكتوز والسكروز من الكربوهيدرات المعقدة التي يجب تكسيرها وتحويلها إلى جلوكوز من أجل دخولها في دورة Embden-Meyerhof.

- الكائنات الدقيقة لا تخمر الجلوكوز

عندما تكون الكائنات الحية الدقيقة الملقحة غير قادرة على تخمير الجلوكوز ، فلن تكون قادرة على تخمير الكربوهيدرات الأخرى. لذلك ، لا تتشكل أحماض هنا ، ولكن هناك تكوين للأمينات في المائل باستخدام البيبتون.

في هذه الحالة ، يتحول الإطار إلى أحمر أقوى وقد يظل الجزء السفلي من الأنبوب دون تغيير أو قد يكون قلويًا أيضًا ، مما يترك الأنبوب بأكمله أحمر.

التفسير: K / K تعني قاع قلوي مائل / قلوي أو قاع محايد

في الصورة في بداية المقال ، انظر صورة الأنبوب د.

تشير هذه النتيجة إلى أن الكائن الدقيق لا ينتمي إلى عائلة Enterobacteriaceae.

- الكائنات الدقيقة لا تخمر اللاكتوز / السكروز

إذا كانت البكتيريا قادرة على تخمير الجلوكوز وليس اللاكتوز أو السكروز ، فسيحدث ما يلي:

ستستهلك البكتيريا كل الجلوكوز الموجود بعد حوالي 6 إلى 8 ساعات ، لتكون قادرة على تحمض كل من الشطبة والكتلة ؛ أي أن الأجار سيتحول تمامًا إلى اللون الأصفر ولكن عندما ينضب الجلوكوز ولا يمكن استخدام اللاكتوز والسكروز ، تبدأ البكتيريا في عملية التمثيل الغذائي للبروتينات.

يحتاج هذا التفاعل إلى الأكسجين ، وبالتالي يحدث تحلل البيبتون على السطح (المائل). تقوم الأمينات المنتجة بقلوية الإطار من الأصفر إلى الأحمر. يتضح هذا التفاعل بعد 18 إلى 24 ساعة من الحضانة.

التفسير: K / A تعني شطبة وحمضية قلوية.

في الصورة في بداية المقال انظر صورة الأنبوب ب.

- الكائنات الدقيقة المخمرة للاكتوز / السكروز

من الواضح أن الكائنات الحية الدقيقة القادرة على تخمير اللاكتوز والسكروز يمكن أن تخمر الجلوكوز. بعد استنفاد الحد الأدنى من الجلوكوز الموجود في الوسط ، يبدأ البيروفات المتكونة في التمثيل الغذائي لتكوين الأحماض من خلال دورة كريبس الهوائية ، وفي فترة 8 إلى 12 ساعة ، سيكون كل الوسط أصفر.

إذا كانت البكتيريا قادرة على تكسير اللاكتوز أو السكروز ، فسيستمر إنتاج الأحماض ، وبعد 18 إلى 24 ساعة ، سيستمر لون الأنبوب بأكمله - المائل والسدادة - في اللون الأصفر.

وتجدر الإشارة إلى أن استخدام الجلوكوز يتم بطريقتين: إحداهما هوائية عند شطبة الأنبوب ، والأخرى لا هوائية في أسفل الأنبوب.

التفسير: A / A تعني شطبة حمضية / قاع حمضي. قد يكون أو لا يحتوي على غاز.

في الصورة في بداية المقال ، انظر صورة الأنبوب أ.

إنتاج الغاز

بعض الكائنات الحية الدقيقة قادرة على إنتاج الغاز أثناء تخمير السكريات. يتضح الغاز في الأنبوب من خلال الضغط الذي يمارسه داخل الأجار. يتسبب الضغط في تكوين الفقاعات أو إزاحة الأجار. في بعض الأحيان ، يمكن أن يؤدي تكوين الغاز إلى كسر الوسط.

من المهم أنه في وقت بذر وسيط TSI ، يتم عمل الثقب بشكل نظيف من خلال مركز الأجار حتى يصل إلى القاع. إذا تم تحويل الثقب باتجاه جدران الأنبوب ، فقد يتسبب ذلك في نتائج إيجابية خاطئة في إنتاج الغاز ، حيث إنه سوف يهرب عبر القناة المشكلة بشكل خاطئ.

يحتاج إنتاج الغاز ، وكذلك التفاعلات التي تحدث في شطبة أجار ، إلى الأكسجين ، لذلك يوصى بتغطية الأنبوب بسدادة قطنية ، وإذا تم استخدام غطاء الباكليت ، فلا يجب أن يكون محكمًا تمامًا.

تم الإبلاغ عن إنتاج الغاز على أنه إيجابي (+) أو سلبي (-).

أنماط تكوين الغاز. المصدر: مخطط من ماجستير. مارييلسا جيل. مصدر الصورة: VeeDunnFlickr.com/Y_tambe ، عبر ويكيميديا ​​كومنز

ثيوسلفات الصوديوم وكبريتات الأمونيوم الحديدية

تمتص البكتيريا القادرة على إنتاج كبريتيد الهيدروجين (غاز عديم اللون) الكبريت من ثيوسلفات الصوديوم الموجود في الوسط. مرة واحدة H ₂ يتكون S، يتفاعل مع كبريتات الأمونيوم الحديدية، وإنتاج كبريتيد الحديد (واضحة للعيان راسب أسود).

تم الإبلاغ عن إنتاج H ₂ S على أنه إيجابي (+) أو سلبي (-).

في الصورة في بداية المقال انظر صورة الأنبوب ج.

تجهيز

يزن 62.5 جم من وسط أجار الحديد الثلاثي المجفف (TSI) ويذوب في لتر واحد من الماء المقطر.

تسخين حتى يذوب أجار تماما. يغلي لمدة دقيقة مع التحريك بشكل متكرر. قم بتوزيع 4 مل من الوسط في أنبوب اختبار 13/100 بأغطية قطنية.

تعقيم في الأوتوكلاف عند 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. أخرجه من الأوتوكلاف واتركه بزاوية. يجب الحرص على أن يكون لكل من القاعدة والإطار نفس المسافة.

يحفظ فى الثلاجة 2-8 درجة مئوية. اتركه يسخن قبل نثر السلالة البكتيرية.

لون الوسط المجفف بيج فاتح والوسط المحضر أحمر برتقالي.

الرقم الهيدروجيني النهائي للوسط المحضر هو 7.3 ± 0.2.

التطبيقات

يستخدم اختبار TSI على نطاق واسع على مستوى معمل الأحياء الدقيقة. هذا الاختبار ضروري لتوجيه نوع الاختبار الذي يجب تطبيقه من أجل تحديد الجنس والأنواع. يمكن أن يؤدي التنفيذ الجيد والتفسير إلى توفير المواد والعمالة.

إذا كانت النتيجة TSI K / K وكان اختبار أوكسيديز السيتوكروم إيجابيًا ، فمن المعروف أنه يجب استخدام الاختبارات لتحديد قضبان سلبية الجرام غير المخمرة ، مثل Pseudomonas ، Alcaligenes ، Achromobacter ، Burkholderia ، من بين أجناس أخرى. إذا كان أوكسيديز سالب ، فإنه موجه نحو أجناس Acinetobacter ، Stenotrophomonas ، إلخ.

من ناحية أخرى ، إذا تم الحصول على TSI A / A أو K / A وكان اختبار أوكسيديز السيتوكروم سالبًا ، فكلما انخفض عدد النترات إلى نيتريت ، سنكون على يقين من أنه كائن دقيق ينتمي إلى عائلة Enterobacteriaceae. في هذه الحالة ، سيركز مسار التحديد على اختبارات محددة لهذه المجموعة من البكتيريا.

من ناحية أخرى ، إذا تم الحصول على صورة K / A أو A / A وكان اختبار أوكسيديز السيتوكروم إيجابيًا ، فستهدف الاختبارات الإضافية التي سيتم تجميعها إلى تحديد سلالات التخمير التي لا تنتمي إلى عائلة Enterobacteriaceae ، مثل: Aeromonas ، Plesiomonas و Vibrio و Pasteurella.

سيوجه TSI مع كبريتيد الهيدروجين ، أوكسيديز سلبي ، تحديد الأجناس التالية من عائلة Enterobacteriaceae: Proteus ، Citrobacter ، Edwardsiella ، Leminorella ، Pragia ، Trabusiella أو Salmonella.

وهناك TSI مع قليل أو معتدل كبريتيد الهيدروجين في شطبة القلوية مع خلفية قلوية وأوكسيديز إيجابي توجيه استخدام اختبارات لتحديد H غير تخمر ₂ S- إنتاج سلبية الغرام قضبان، مثل الجرية Shewanella.

أخيرًا ، يمكن استخدام TSI للتحقيق في إنتاج كبريتيد الهيدروجين في عصيات إيجابية الجرام ، خاصة عند الاشتباه في Erysipelothrix rhusiopathiae.

زرعت

يجب تلقيح وسط TSI بمستعمرات نقية ، معزولة في الثقافات الأولية أو الانتقائية. إذا تم أخذ المستعمرة من وسائط انتقائية تم بذرها بعينات ذات نباتات مختلطة ، فيجب توخي الحذر لأخذها فقط من السطح ، حيث قد توجد سلالات قابلة للحياة مثبطة في هذا الوسط في الجزء السفلي من المستعمرة.

لذلك ، لا ينبغي أبدًا تبريد الحلقة على وسط انتقائي ثم يتم أخذ المستعمرة وتلقيحها بوسط TSI.

يتم البذر باستخدام إبرة أو حلقة مستقيمة. يتم عمل ثقب ، مع الحرص على أنه يمر من منتصف الوسط حتى الوصول إلى القاع ، ثم يتم الانتهاء من البذر عن طريق تلقيح السطح بشكل متعرج. لا تقم بثقبين.

احتضان عند 37 درجة مئوية في الهوائية لمدة 18-24 ساعة. ترجم في هذا الوقت ، لا قبل ولا بعد.

محددات

يجب قراءة اختبار TSI في غضون 18 إلى 24 ساعة من الحضانة. قد تعطي القراءة قبل هذا الوقت نتيجة إيجابية خاطئة لتخمير A / A. في حين أن القراءة بعد هذا الوقت يمكن أن تؤدي إلى صورة سلبية خاطئة عن مادة غير مخمرة ، بسبب استهلاك الببتونات التي تجعل الوسط قلويًا.

المراجع

1. ماك فادن ج. (2003). الاختبارات البيوكيميائية لتحديد البكتيريا ذات الأهمية السريرية. الطبعة الثالثة. افتتاحية بان أميريكانا. بوينس ايرس. الأرجنتين.
2. Forbes B، Sahm D، Weissfeld A. (2009). بيلي وسكوت التشخيص الميكروبيولوجي. 12 إد. التحرير Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E ، Allen S ، Janda W ، Schreckenberger P ، Winn W. (2004). التشخيص الميكروبيولوجي. 5th إد. التحرير Panamericana SA Argentina.
4. "TSI أجار." ويكيبيديا، الموسوعة الحرة. 10 يوليو 2018 ، 08:09 بالتوقيت العالمي المنسق. 10 فبراير 2019 ، 03:33 متاح على: es.wikipedia.org
5. مختبرات بريتانيا. TSI Agar (أجار الحديد الثلاثي السكر). 2015 متاح على: britanialab.com
6. مختبرات BD. أجار الحديد الثلاثي السكر (TSI Agar). 2003 متاح في: bd.com