- أساس
- تجهيز
- تحضير منزلي (غير تجاري)
- التحضير باستخدام وسيلة تجارية
- التحضير لاختبارات التخمير
- أنواع أخرى من ماء الببتون
- المياه الببتونية المخزنة أو المخزنة
- -مياه الببتون القلوية
- استعمال
- عينات البراز
- عينات الطعام
- سؤال وجواب
- محددات
- المراجع
و البيبتون هو وسيلة لتخصيب السائل، وغير الانتقائية، تستخدم أساسا في عينات المواد الغذائية مخفف أو غيرها من المواد. هذا الوسيط من الناحية الكيميائية بسيط للغاية ، فهو يحتوي على ببتون اللحوم وكلوريد الصوديوم والماء.
لها قيمة غذائية معينة تسمح بإثراء العينة. إذا كانت هناك بكتيريا مُسيئة ، فإن هذا الوسيط لديه القدرة على إصلاح قابلية البقاء. إنه مفيد بشكل خاص في استعادة البكتيريا التي تنتمي إلى عائلة Enterobacteriaceae.
ماء الببتون في زجاجات. المصدر: ماجستير. مارييلسا جيل
في حالة استعادة السالمونيلا ، يوصى باستخدام متغير ماء الببتون المصفى ؛ يعمل هذا كوسيط ما قبل التخصيب للعينة ، وفي هذه الحالة تحتوي على عناصر أخرى مثل فوسفات ثنائي الصوديوم وفوسفات ثنائي بوتاسيوم.
عادة يتم تحضير ماء الببتون عند درجة حموضة متعادلة ، ولكن هناك متغيرات أخرى حيث يكون من الضروري أن يكون الرقم الهيدروجيني 8.5 ± 0.2 (قلوي) ، لأن البكتيريا المراد عزلها تكون قلوية ، مثل ضمة الكوليرا.
علاوة على ذلك ، يمكن استخدام هذا الوسط كوسيط أساسي لاختبارات تخمير الكربوهيدرات.
أساس
توفر البيبتون العناصر الغذائية اللازمة لنمو البكتيريا ، وخاصة النيتروجين والأحماض الأمينية قصيرة السلسلة ، بينما يحافظ كلوريد الصوديوم على التوازن الأسموزي.
علاوة على ذلك ، فإن الوسيلة تجعل من الممكن تفريق وتجانس وإصلاح الخلايا البكتيرية التي تضررت من العمليات الصناعية.
كمخفف فهو مثالي ، حيث يحل محل المحلول الفسيولوجي (SSF) أو محلول الفوسفات العازل (PBS) بشكل فعال.
يتضح النمو البكتيري من خلال ملاحظة تعكره.
تجهيز
تحضير منزلي (غير تجاري)
تزن 1 جرام من الببتون و 8.5 جرام من كلوريد الصوديوم ، تذوب في 1 لتر من الماء المقطر. يجب تعديل الأس الهيدروجيني إلى 7.0. لهذا ، يمكن استخدام 1N كلوريد الصوديوم.
التحضير باستخدام وسيلة تجارية
تزن 15 جم من الوسط المجفف وتذوب في لتر من الماء المقطر. تجانس الخليط. إذا لزم الأمر ، يُغلى الخليط لمدة دقيقة واحدة للمساعدة في الذوبان الكامل. يقدم في زجاجات سعة 100 مل أو 10 مل حسب الحاجة. الأوتوكلاف عند 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.
تبرد وتستخدم أو تخزن في الثلاجة. الرقم الهيدروجيني النهائي للوسط هو 7.2 ± 0.2.
لون الوسط المجفف بيج فاتح والوسط المحضر كهرماني فاتح.
التحضير لاختبارات التخمير
إلى المستحضر السابق - قبل التعقيم - يجب إضافة الكربوهيدرات إلى التركيز النهائي بنسبة 1٪ ، بالإضافة إلى مؤشر Andrade (حمض الفوكسين) أو الفينول الأحمر (0.018 جم / لتر). يجب أن تكون الأنابيب مزودة بجرس دورهام لمراقبة تكوين الغاز.
أنواع أخرى من ماء الببتون
المياه الببتونية المخزنة أو المخزنة
يحتوي على هيدروليزات إنزيمية للكازين ، كلوريد الصوديوم ، ثنائي هيدروجين فوسفات البوتاسيوم وفوسفات هيدروجين الصوديوم دوديكاهيدراتي. الرقم الهيدروجيني النهائي 7.0 ± 0.2.
لتحضيره ، يزن 20 جرام من الوسط المجفف ويذوب في لتر واحد من الماء المقطر. اتركه يرتاح لمدة 5 دقائق تقريبًا. سخنيها لمدة دقيقة واحدة حتى تذوب تمامًا.
تصب في برطمانات مناسبة حسب الحاجة. تعقيم باستخدام الأوتوكلاف عند 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.
-مياه الببتون القلوية
تزن 25 جم من الوسط المجفف وتذوب في 1 لتر من الماء. تابع كما هو موضح أعلاه. يتراوح الرقم الهيدروجيني من 8.3 إلى 8.7.
استعمال
يتم إجراء اللقاح عن طريق وضع العينة مباشرة.
يتم استخدامه لتخفيف العينات ، خاصة عند الاشتباه في وجود بكتيريا تالفة. عادة ما تكون التخفيفات 1:10 و 1: 100.
احتضان لمدة 24 ساعة في الهوائية عند 35-37 درجة مئوية.
عينات البراز
بالنسبة لعينات براز السالمونيلا ، يوصى باستخدام المياه المخزنة أو المخزنة كوسيط للتخصيب المسبق.
للقيام بذلك ، تابع ما يلي:
إذا تم تشكيل البراز ، خذ 1 جم من العينة. إذا كانت سائلة ، خذ 1 مل من البراز وعلقها في أنبوب به 10 مل من ماء الببتون المغلف. في حالة مسحات المستقيم ، قم بتفريغ المادة الموجودة في المسحة في الأنبوب بمياه الببتون المخزنة.
في جميع الحالات ، قم بخلط وتجانس العينة جيدًا.
احتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 18 إلى 24 ساعة. ثقافة فرعية لاحقة في مرق التخصيب مثل مرق سيلينيت سيستين أو مرق رباعي عند 37 درجة مئوية لمدة 18-24 ساعة أكثر. أخيرًا ، قم بالزراعة في وسائط انتقائية للسالمونيلا ، مثل SS agar و XLD agar و Hektoen agar وغيرها.
عينات الطعام
تُستخدم مياه الببتون كوسيلة للتخصيب أو كمخفف بسيط ، ولكن إذا تم البحث عن أنواع السالمونيلا ، يتم استخدامها كوسيط للتخصيب المسبق ، كما تم وصفه بالفعل.
في الغذاء المضي قدما على النحو التالي:
للأطعمة الصلبة تزن 25 جم من العينة وللأطعمة السائلة قياس 25 مل منها. ضع الجزء المذكور في قوارير تحتوي على 225 مل من ماء الببتون. خلط وتجانس العينة.
إذا اشتبه في أن الحمل الميكروبي مرتفع ، فيمكن إجراء تخفيفات متسلسلة أو عشرية لتسهيل حساب وحدات تشكيل المستعمرة (CFU).
يعتمد عدد التخفيفات على نوع العينة وخبرة المحلل.
على العكس من ذلك ، إذا اشتبه في أن الحمل الميكروبي منخفض جدًا ، فليس من الضروري إجراء التخفيفات. بعد ذلك ، ثقافة فرعية على الوسائط الانتقائية.
في حالة الطعام من البحر ، مثل المحار والأسماك ، من بين أمور أخرى ، بحثًا عن ضمة الكوليرا أو أنواع أخرى من الضمة ، يجب استخدام مياه الببتون المعدلة إلى درجة الحموضة 8.5 (مياه الببتون القلوية).
سؤال وجواب
من كل دفعة محضرة ، يجب تحضين أنبوب أو أنبوبين دون تلقيح لمدة 24 ساعة في الهوائية عند 37 درجة مئوية. في نهاية الوقت ، لا ينبغي ملاحظة أي عكارة أو تغير في اللون.
يمكن أيضًا استخدام سلالات التحكم المعروفة لتقييم فعاليتها:
لهذا ، يمكن استخدام السلالات البكتيرية التالية: Escherichia coli ATCC 25922 ، Escherichia coli ATCC 8927 ، Staphylococcus aureus ATCC 6538 ، Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 ، Salmonella typhimurium ATCC 1428 ، Salmonella enteritidis ATCC 13076.
في جميع الحالات ، من المتوقع حدوث تطور جرثومي مرض ، والذي يتم ملاحظته من خلال تعكر الوسط.
محددات
- الوسيلة المجففة شديدة الرطوبة ، لذا يجب حفظها بعيدًا عن الرطوبة.
- يجب عدم استخدام الوسيط في حالة ملاحظة أي نوع من التدهور.
- يجب تخزين وسط الاستزراع المجفف بين 10 - 35 درجة مئوية
- يجب حفظ الوسيلة المعدة في الثلاجة (2-8 درجة مئوية).
المراجع
- تقنيات Camacho A و Giles M و Ortegón A و Palao M و Serrano B و Velázquez O. للتحليل الميكروبيولوجي للأغذية. 2009 ، الطبعة الثانية. كلية الكيمياء UNAM. المكسيك. نسخة لمدير الكتيبات والوثائق (AMyD) لكلية الكيمياء ، UNAM 1. متاح على:
- مختبرات بريتانيا. ماء الببتون المقصف. 2015 متاح على: britanialab.com
- مختبرات نيوجين. ماء الببتون. متاح على: foodafety.neogen.com
- مختبرات بريتانيا. ماء الببتون. 2015 متاح على: britanialab.com
- مختبرات ميرك. المياه الببتونية المخزنة. متاح على: merckmillipore.com
- مختبرات كوندا بروناديسا. مياه الببتون القلوية. متاح في: condalab.com
- Forbes B، Sahm D، Weissfeld A. (2009). بيلي وسكوت التشخيص الميكروبيولوجي. 12 إد. التحرير Panamericana SA Argentina.