- أساس
- الملاحقة القضائية
- البقع النسيجية
- دورية حمض شيف (PAS)
- جروكوت
- زيل نيلسن
- غرام والحبر الصيني
- أورسين
- ثلاثي الألوان ماسون
- افكار اخيرة
- المراجع
تعتبر الكيمياء النسيجية أداة مفيدة في دراسة مورفولوجيا الأنسجة البيولوجية المختلفة (النباتات والحيوانات) بسبب مبدأ تفاعلها مع مكونات الأنسجة مثل الكربوهيدرات والدهون والبروتينات ، من بين أمور أخرى ، الأصباغ الكيميائية.
لا تسمح هذه الأداة القيمة فقط بتحديد تركيبة الأنسجة والخلايا وهيكلها ، ولكن أيضًا التفاعلات المختلفة التي تحدث فيها. وبالمثل ، يمكن إثبات تلف الأنسجة المحتمل الناجم عن وجود الكائنات الحية الدقيقة أو الأمراض الأخرى.
البقع النسيجية. فيروس النيل ، البكتيريا موجبة الجرام وسالبة الجرام (الجرام) ، هيستوبلازما كبسولات (Grocott) ، المتفطرة السلية (Ziehl Neelsen). المصدر: Pixinio.com/Wikipedia.org/Nephron / CDC / Dr. جورج ب. كوبيكا
قدمت كيمياء الأنسجة ، من القرون الماضية ، مساهمات مهمة ، مثل إثبات وجود الحاجز الدموي الدماغي من قبل بول إيرليش. كان هذا ممكنًا لأن دماغ حيوان التجربة الذي استخدمه إيرليش لم يكن ملطخًا بالأنيلين ، وهو صبغة أساسية.
أدى ذلك إلى استخدام أصباغ مختلفة مثل الميثيلين الأزرق والإندوفينول ، من أجل تلطيخ الأنواع المختلفة من الخلايا. أدى هذا الاكتشاف إلى تصنيف الخلايا إلى محبة للحمض ، قاعدية ومحبة للعدلات ، وفقًا لتلطيخها المحدد.
طبقت الدراسات الحديثة هذه التقنية لإظهار وجود مركبات مختلفة ، بما في ذلك الفينولات ، وكذلك الكربوهيدرات والدهون غير الهيكلية ، في أنسجة أنواع Litsea glaucescens ، المعروفة باسم laurel. العثور على هذه ، سواء في الورقة أو في الخشب.
وبالمثل ، حدد Colares et al ، 2016 ، النبات ذي الأهمية الطبية Tarenaya hassleriana ، باستخدام تقنيات الكيمياء النسيجية. في هذا النوع ، تم إثبات وجود النشا ، والميروسين ، وكذلك المركبات الفينولية والمحبة للدهون.
أساس
تعتمد كيمياء الأنسجة على تلطيخ الهياكل الخلوية أو الجزيئات الموجودة في الأنسجة ، وذلك بفضل تقاربها مع أصباغ معينة. رد فعل تلوين هذه الهياكل أو الجزيئات في شكلها الأصلي ، تصور لاحقًا في المجهر الضوئي أو المجهر الإلكتروني.
تعود خصوصية التلوين إلى وجود مجموعات تقبل الأيونات الموجودة في الخلايا أو جزيئات الأنسجة.
أخيرًا ، الهدف من التفاعلات الكيميائية النسيجية هو القدرة على إظهارها من خلال التلوين. من أكبر الهياكل البيولوجية إلى أصغر الأنسجة والخلايا. يمكن تحقيق ذلك بفضل حقيقة أن الأصباغ تتفاعل كيميائيًا مع جزيئات الأنسجة أو الخلايا أو العضيات.
الملاحقة القضائية
يمكن أن يتضمن التفاعل الكيميائي النسيجي خطوات قبل تنفيذ التقنية ، مثل التثبيت والدمج وقطع الأنسجة. لذلك ، يجب أن يؤخذ في الاعتبار أنه في هذه الخطوات يمكن أن يتلف الهيكل المراد تحديده ، مما يؤدي إلى نتائج سلبية خاطئة ، حتى لو كانت موجودة.
على الرغم من ذلك ، فإن التثبيت المسبق للنسيج بشكل صحيح مهم ، لأنه يمنع التحلل الذاتي أو تدمير الخلايا. لهذا الغرض ، يتم استخدام التفاعلات الكيميائية مع المذيبات العضوية مثل: الفورمالديهايد أو الجلوتارالدهيد وغيرها.
يتم تضمين القماش بحيث يحافظ على تماسكه عند القطع وبالتالي يمنعه من التشوه. أخيرًا ، يتم إجراء القطع باستخدام مشراح لدراسة العينات عن طريق الفحص المجهري البصري.
بالإضافة إلى ذلك ، قبل الشروع في التلوين الكيميائي للنسيج ، يوصى بدمج عناصر تحكم إيجابية خارجية أو داخلية في كل دفعة من الاختبارات. وكذلك استخدام أصباغ محددة للهياكل المراد دراستها.
البقع النسيجية
منذ ظهور تقنيات الكيمياء النسيجية حتى الوقت الحاضر ، تم استخدام مجموعة واسعة من البقع ، بما في ذلك تلك الأكثر استخدامًا مثل: حمض الدوري شيف (PAS) ، Grocott ، Ziehl-Neelsen و Gram.
وبالمثل ، تم استخدام الأصباغ الأخرى بشكل أقل تكرارًا مثل حبر الهند ، أو صبغة الأورسين أو صبغة ماسون ثلاثية الألوان ، من بين أشياء أخرى.
دورية حمض شيف (PAS)
باستخدام هذا التلوين ، يمكن ملاحظة الجزيئات التي تحتوي على نسبة عالية من الكربوهيدرات ، مثل: الجليكوجين والموسين. ومع ذلك ، فهو مفيد أيضًا في تحديد الكائنات الحية الدقيقة مثل الفطريات والطفيليات. بالإضافة إلى تراكيب معينة (الغشاء القاعدي) في الجلد والأنسجة الأخرى.
أساس هذا التلوين هو أن الصبغة تؤكسد روابط الكربون بين مجموعتي هيدروكسيل قريبين. ينتج عن هذا إطلاق مجموعة الألدهيد ، ويتم الكشف عن ذلك بواسطة كاشف شيف ، مما ينتج عنه لون أرجواني.
يتكون كاشف شيف من الفوكسين الأساسي ، ميتابيسلفيت الصوديوم وحمض الهيدروكلوريك ، وهذه المكونات مسؤولة عن التلوين الأرجواني ، عند وجود مجموعات الألدهيد. خلاف ذلك يتم إنشاء حمض عديم اللون.
تعتمد شدة التلوين على كمية مجموعات الهيدروكسيل الموجودة في السكريات الأحادية. على سبيل المثال ، في الفطريات والأغشية القاعدية والموسين والجليكوجين ، يمكن أن يتحول اللون من الأحمر إلى الأرجواني ، بينما تلطخ النواة باللون الأزرق.
جروكوت
إنها واحدة من أكثر البقع حساسية في تحديد الفطريات في الأنسجة التي تحتوي على البارافين. هذا يسمح بتحديد الهياكل الفطرية المختلفة: الخيوط والجراثيم والأبواغ الداخلية وغيرها. لذلك ، تعتبر وصمة عار روتينية لتشخيص فطار.
يستخدم بشكل خاص في تشخيص داء الفطريات الرئوية مثل تكيسات الرئة وداء الرشاشيات الناجم عن بعض الفطريات من أجناس Pneumocystis و Aspergillus ، على التوالي.
يحتوي هذا المحلول على نترات الفضة وحمض الكروميك ، وهذا الأخير مثبت وملون. الأساس هو أن هذا الحمض ينتج أكسدة مجموعات الهيدروكسيل إلى الألدهيدات ، عن طريق أحشاء مخاطية موجودة في الهياكل الفطرية ، على سبيل المثال في جدار الخلية للفطريات.
أخيرًا ، تتأكسد الفضة الموجودة في المحلول بواسطة الألدهيدات ، مما يتسبب في تلون أسود يسمى تفاعل الأرجنتافين. يمكن أيضًا استخدام الأصباغ المتباينة مثل اللون الأخضر الفاتح ، وبالتالي ستلاحظ الهياكل الفطرية باللون الأسود مع خلفية خضراء فاتحة.
زيل نيلسن
يعتمد هذا التلوين على وجود مقاومة حمض الكحول ، جزئيًا أو كليًا ، في بعض الكائنات الحية الدقيقة مثل أجناس Nocardia و Legionella و Mycobacterium.
يوصى باستخدام هذه البقعة ، لأن جدار الخلية للكائنات الدقيقة المذكورة سابقًا يحتوي على دهون معقدة تعيق تغلغل الأصباغ. خاصة في عينات من الجهاز التنفسي.
في ذلك ، يتم استخدام الملونات القوية مثل carbol fuchsin (تلوين أساسي) ويتم تطبيق الحرارة بحيث يمكن للكائنات الحية الدقيقة الاحتفاظ بالتلوين ولا يتغير لونها بالأحماض والكحول. أخيرًا ، يتم تطبيق محلول أزرق الميثيلين لتلوين الهياكل التي تغير لونها.
لوحظ وجود مقاومة الحمض والكحول في الهياكل الملطخة باللون الأحمر ، في حين أن الهياكل التي لا تقاوم البهتان ملطخة باللون الأزرق.
غرام والحبر الصيني
يعتبر غرام وصمة عار مفيدة للغاية في تشخيص الالتهابات البكتيرية والفطرية وغيرها. هذا التلوين يجعل من الممكن التمييز بين الكائنات الحية الدقيقة إيجابية الجرام وسالبة الجرام ، مما يظهر بوضوح الاختلافات الموجودة في تكوين جدار الخلية.
بينما الحبر الهندي هو بقعة تستخدم لمقارنة الهياكل التي تحتوي على السكريات (كبسولة). هذا لأن حلقة تتشكل في البيئة ، تكون ممكنة في Cryptococcus neoformans.
أورسين
مع هذا التلوين ، يتم تلوين الألياف المرنة والكروموسومات للخلايا المختلفة ، مما يسمح بتقييم عملية نضوج الأخيرة. لهذا السبب ، فقد كان مفيدًا جدًا في الدراسات الوراثية الخلوية.
يعتمد هذا على امتصاص الصبغة بواسطة الشحنة السالبة للجزيئات مثل الحمض النووي الموجودة في نوى مجموعة متنوعة من الخلايا. لذلك هذه ملطخة باللون الأزرق إلى الأرجواني الداكن
ثلاثي الألوان ماسون
تستخدم هذه البقعة للتعرف على بعض الكائنات الحية الدقيقة أو المواد التي تحتوي على أصباغ ميلانية. هذه هي حالة داء الفطريات ، التي تسببها الفطريات الكاذبة ، وداء القاتمة ، والورم الفطري الأسود.
افكار اخيرة
في السنوات الأخيرة ، كان هناك العديد من التطورات في إنشاء تقنيات التشخيص الجديدة ، حيث تشارك الكيمياء النسيجية ولكنها مرتبطة بأساسيات أو مبادئ أخرى. هذه التقنيات لها غرض مختلف ، كما في حالة الكيمياء الهيستولوجية المناعية أو الكيمياء النسيجية الإنزيمية.
المراجع
- Acuña U، Elguero J. Histoquímica. ان. تشيم. 2012 ؛ 108 (2): 114-118. متاح على: are.iqm.csic.es
- Mestanza R. تكرار البقع الكيميائية النسيجية PAS و Grocott و Ziehl-Neelsen المستخدمة لتحديد الكائنات الحية الدقيقة ، والتي تم إجراؤها في خدمة التشريح المرضي بمستشفى Eugenio Espejo التخصصي في عام 2015. الجامعة المركزية في الإكوادور ، كيتو ؛ 2016 متوفر على: dspace.uce.edu
- Tapia-Torres N ، de la Paz-Pérez-Olvera C ، Román-Guerrero A ، Quintanar-Isaías A ، García-Márquez E ، Cruz-Sosa F. الكيمياء النسيجية ، إجمالي محتوى الفينول والنشاط المضاد للأكسدة لأوراق وخشب litsea كونث glaucescens (Lauraceae). الخشب والغابات. 2014 ؛ 20 (3): 125-137. متاح على: redalyc.org
- كولاريس ، مينيسوتا ، مارتينيز ألونسو ، إس ، أرامباري ، آم. علم التشريح والكيمياء النسيجية لنبات تارينيا هاسليريانا (كليوماسيا) ، وهو نوع ذو أهمية طبية. نشرة أمريكا اللاتينية ومنطقة البحر الكاريبي للنباتات الطبية والعطرية 2016 ؛ 15 (3): 182-191. متاح على: redalyc.org
- بونيفاز أ. علم الفطريات الطبية الأساسية. الطبعة الرابعة. المكسيك: محرران McGraw-Hill Interamericana ، SA de CV 2012.
- سيلفا دييجو فيليب بيزيرا ، سانتوس هيلين بانديرا دي بونتيس ، ليون خورخي إسكويش ، جوميز داليانا كويروغا دي كاسترو ، ألفيس بوليانا مونيز ، نوناكا كاسيانو فرانسيسكو ويغي. التحليل السريري المرضي والكيميائي المناعي لسرطان الخلايا الحرشفية في الخلايا المغزلية في اللسان: حالة نادرة. آينشتاين (ساو باولو) 2019 ؛ 17 (1): eRC4610. متاح من: scielo.br