اختبار VOGES-PROSKAUER: الأساس والتحضير والاستخدامات - مادة الاحياء - 2025

و فوغس-بروسكاور الاختبار هو اختبار الكيمياء الحيوية المستخدمة للمساعدة في التعرف على البكتيريا التي تنتمي إلى عائلة المعوية. إنه مفيد بشكل خاص للتمييز بين سلالات الإشريكية القولونية من كليبسيلا والأمعاء وغيرها.

يتم إجراء الاختبار في وسط استزراع سائل يسمى ميثيل الأحمر - فوغس بروسكاوير ، والمعروف بالاختصار RM / VP. يتكون هذا الوسط من عديد البيبتون المخزن والجلوكوز وفوسفات ثنائي البوتاسيوم والماء المقطر.

اختبار Methyl Red-Voges Proskauer (RM / VP) التجاري / VP إيجابي وسلبي على التوالي. المصدر: صورة التقطها المؤلف ماجستير. Marielsa Gil / Sudipta.nov15 ، من ويكيميديا ​​كومنز

وسيط RM / VP الحالي عبارة عن تعديل لوسط Clark and Lubs ، والذي يحتوي في الأصل على تركيز أقل من البيبتون والجلوكوز. وبالتالي ، تم إنتاج كمية أقل من أيون الهيدروجين ، المطلوب للتفاعل الإيجابي Voges-Proskauer.

يعتمد الاختبار على قدرة الكائنات الحية الدقيقة على استخدام الجلوكوز من خلال طريق بوتيلين جليكول ، وتشكيل منتج نهائي محايد يسمى الأسيتوين ، في وجود الأكسجين ودرجة الحموضة القلوية.

في وسط RM / VP ، بالإضافة إلى القدرة على الكشف عن اختبار Voges-Proskauer ، يمكن أيضًا الكشف عن اختبار الميثيل الأحمر.

أساس

أساس اختبار Voges-Proskauer

توفر النغمات المتعددة الموجودة في الوسط المتطلبات الغذائية الأساسية لنمو البكتيريا. من جانبه ، الجلوكوز هو المركب الرئيسي. تمتلك العديد من البكتيريا القدرة على استقلاب الجلوكوز وتشكيل حمض البيروفيك.

حمض البيروفيك هو نقطة وسطية في استقلاب الجلوكوز ومن هناك يمكن لكل كائن حي أن يتخذ طرقًا مختلفة. سيشكل بعضها أحماض مختلطة ، مثل حمض اللاكتيك وحمض الخليك وحمض الفورميك وحمض السكسينيك ، بينما سيشكل البعض الآخر منتجات محايدة مثل 2،3-بيوتانيديول.

يكشف اختبار Voges-Proskauer عن قدرة الكائنات الحية الدقيقة على تكوين أسيتيل ميثيل كاربينول (أسيتوين) ، وهو منتج وسيط لـ 2،3-بيوتانيديول في ظل الظروف الهوائية.

يتم تقليل الأسيتوين ويشكل 2،3-بيوتانيديول ، ولكن هذا التفاعل قابل للعكس ، لذلك إذا تم أكسدة 2،3-بيوتانيديول ، يتم تكوين الأسيتوين. لذلك ، الأكسجين ضروري.

فوسفات ثنائي البوتاسيوم هو المخزن المؤقت الذي يخزن الخليط عند درجة الحموضة 6.9 ± 0.2.

أساس الإفصاح عن الأدلة وتفسيرها

لإثبات التفاعل ، يجب إجراء تطوير باستخدام اثنين من الكواشف (كواشف باريت) ، والمعروفة باسم Voges A و Voges B.

Voges A هو محلول 5٪ من α-naphthol ، و Voges B عبارة عن تحضير 40٪ من هيدروكسيد البوتاسيوم. في حالة عدم توفر هيدروكسيد البوتاسيوم ، يمكن استبداله بنسبة 40٪ هيدروكسيد الصوديوم.

Α-Naphthol هو محفز سيزيد من شدة لون التفاعل ، مما يجعل الاختبار أكثر حساسية. يجب دائمًا إضافة α-naphthol أولاً ، مع اهتزاز الأنبوب بحيث يتلامس الوسيط مع الأكسجين. بهذه الطريقة يتأكسد الأسيتوين الموجود إلى ثنائي الأسيتيل ، ويتأكسد 2،3-بوتانيديول لتشكيل الأسيتوين ، ويمرر هذا إلى ثنائي الأسيتيل.

هذه هي الطريقة التي يرتبط بها α-naphthol بـ diacetyl ، والذي بدوره انضم إلى نواة guanidine الموجودة في حمض الأرجينين الأميني ، ويأتي الأخير من pluripeptones.

من جانبها، البوتاسيوم أو هيدروكسيد الصوديوم هو المسؤول عن امتصاص CO ₂ والتفاعل مع peptones. يتسبب هذا التفاعل في تكوين لون السلمون الوردي الذي يمكن رؤيته بوضوح بعد هز الأنبوب جيدًا.

يجب أن يتم خلط الكميات الصحيحة من ثنائي الأسيتيل والببتون و ألفا نافثول حتى يظهر اللون على الفور. إذا لم يحدث ذلك ، يُسمح للأنبوب بالراحة لمدة 15 دقيقة قبل الترجمة.

عادة ما يكون الاختبار إيجابيًا بعد 2 إلى 5 دقائق ، حيث يمكن رؤية لون وردي باهت. إذا تُركت للوقوف لمدة 30 دقيقة إلى 1 ساعة ، ستكون شدة اللون بحد أقصى (أحمر شديد).

سيظهر اختبار سلبي عندما يتحول لون المرق إلى اللون الأصفر. بعد ساعة واحدة ، إذا كان الاختبار سالبًا ، فقد يتكون لون نحاسي نتيجة تفاعل هيدروكسيد البوتاسيوم على α-naphthol.

تجهيز

متوسط ​​MR / VP

تزن 17 جم من وسط المزرعة المجففة وتذوب في لتر من الماء المقطر. اتركه لمدة 5 دقائق. يُسخن حتى يغلي ليذوب تمامًا يقدم من 3 إلى 4 مل في أنابيب ويعقم في الأوتوكلاف عند 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.

وسط الاستزراع المجفف لونه بيج والوسط المحضر لونه كهرماني فاتح.

الرقم الهيدروجيني النهائي للوسط هو 6.9 ± 0.2.

فوجيس كاشف

تزن 5 جم من α-naphthol وتذوب في 50 مل من الكحول الإيثيلي (المطلق). ثم استمر في إضافة الكحول الإيثيلي حتى يصل إلى 100 مل.

كاشف فوجيس ب

تزن 40 جم من هيدروكسيد البوتاسيوم وتذوب في 50 مل من الماء المقطر في دورق. يجب وضع الزجاج في حمام مائي بارد للتحكم في درجة الحرارة ، لأنه عندما يذوب المستحضر ، ترتفع درجة الحرارة بشكل حاد.

بعد أن يصبح المحلول باردًا ، يتم نقله إلى دورق حجمي وتصنيعه حتى 100 مل من الماء المقطر.

إجراء اختبار Voges-Proskauer

لإجراء اختبار Voges-Proskauer ، يتم تلقيح مرق RM / VP بالكائنات الحية الدقيقة قيد الدراسة ، من مزرعة نقية لمدة 18 إلى 24 ساعة.

لا ينبغي أن يكون اللقاح كثيفًا جدًا. يتم تحضينها عند 35-37 درجة مئوية لمدة 24 إلى 48 ساعة ، على الرغم من أن الحضانة لعدة أيام ضرورية في بعض الأحيان. يرى كوان آند ستيل أن 5 أيام هي الحد الأدنى من فترة الحضانة اللازمة للكشف عن جميع أنواع Voges-Proskauer (VP) الإيجابية من عائلة Enterobacteriaceae.

تطوير الاختبار

افصل قسامة 1 مل في أنبوب وقم بتطويرها على النحو التالي: ضع 12 قطرة (0.6 مل) من كاشف Voges A و 4 قطرات (0.2 مل) من Voges B. اخلطها لتهوي واتركها تستقر لمدة 5 - 10 دقائق قبل الترجمة. ومع ذلك ، إذا كان الاختبار لا يزال سالبًا ، اتركه يجلس وراقب الأنبوب بعد 30 دقيقة إلى ساعة واحدة.

يشير ظهور اللون الأحمر الوردي إلى أن تفاعل Voges-Proskauer إيجابي. إذا ظل الوسيط أصفر ، يكون رد الفعل سلبيًا.

تعد إضافة المطورين بالترتيب والكمية المشار إليها أمرًا ضروريًا لتجنب السلبيات الخاطئة.

استعمال

يعد اختبار Voges-Proskauer مفيدًا في التفريق بين سلالات الإشريكية القولونية السلبية VP ، من الأجناس Klebsiella و Enterobacter و Serratia ، من بين سلالات أخرى ، إيجابية VP.

المصدر: Koneman E، Allen S، Janda W، Schreckenberger P، Winn W. (2004). التشخيص الميكروبيولوجي. 5th إد. التحرير Panamericana SA Argentina.

سؤال وجواب

يمكن استخدام سلالات التحكم لاختبار جودة الوسط المحضر ، بما في ذلك Escherichia coli ATCC 25922 و Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 و Proteus mirabilis ATCC 43071 و Salmonella typhimurium و Enterobacter cloacae ATCC 13047.

النتائج المتوقعة هي تفاعلات موجبة لفوجس بروسكاور فقط للعدوى الرئوية و E. cloacae. البقية تعطي ردود فعل سلبية.

المراجع

1. مختبرات بريتانيا. MR-VP متوسط. 2015 متاح على: www.britanialab.com
2. مختبرات Microkit. M-Identity Voges Proskauer. 2014. متاح:
3. ماك فادن ج. (2003). الاختبارات البيوكيميائية لتحديد البكتيريا ذات الأهمية السريرية. الطبعة الثالثة. افتتاحية بان أميريكانا. بوينس ايرس. الأرجنتين.
4. Forbes B، Sahm D، Weissfeld A. (2009). بيلي وسكوت التشخيص الميكروبيولوجي. 12 إد. التحرير Panamericana SA Argentina.
5. Koneman E ، Allen S ، Janda W ، Schreckenberger P ، Winn W. (2004). التشخيص الميكروبيولوجي. 5th إد. التحرير Panamericana SA Argentina.