تلطيخ كينيون: الأساس المنطقي والتقنيات - مادة الاحياء - 2026

و تلطيخ Kinyoun هو أسلوب تلطيخ المستخدمة للبكتيريا وصمة عار والطفيليات الكحول حمض مقاومة. ولدت من تعديل تلوين Ziehl-Neelsen ؛ يتم تفسير كلتا الطريقتين بنفس الطريقة ولكن تختلف في عنصرين: في تحضير الكاشف الرئيسي وفي أن تقنية كينيون لا تستخدم الحرارة.

لهذا السبب يُعرف أيضًا باسم Ziehl-Neelsen المعدل على البارد أو بقعة Kinyoun الباردة. يستخدم لتلطيخ المتفطرة السلية ، المتفطرة الجذامية ، الفطريات غير النمطية ، Nocardias sp ، Cryptosporidium parvum ، Cryptosporidium meleagridis ، Cryptosporidium felis ، Cryptosporidium muris و Cyclosporas cayetanis.

Cryptosporidium parvum ملطخة بصبغة Kinyoun. Punlop Anusonpornperm ، من ويكيميديا ​​كومنز

من الجدير بالذكر أن النوكارديا تلطخ بشكل ضعيف بهذه التقنية لأنها مقاومة جزئيًا للأحماض والكحول ، لذلك هناك تعديل في المنهجية لهذا الجنس.

في المقابل ، تم دمج تقنية كينيون الباردة مع تقنية الترايكروم المعدلة بواسطة ديدييه للكشف عن الكوكسيديا (Cryptosporidium parvum و Isospora belli) وجراثيم ميكروسبوريديا (Enterocytozoon bieneusi و Encephalitozoon intestinalis).

أساس

كاشف التلوين الرئيسي هو carbolfuchsin أو carbol fuchsin ، والذي له خاصية الارتباط بالأحماض الكربوليكية الموجودة داخل جدار الخلية الشمعية الغني بالدهون (الأحماض الفطرية) من المتفطرات وبعض الطفيليات.

لا يبطل التبييض الحمضي هذه الرابطة ؛ لذلك ، يتم تعريف الكائنات الحية الدقيقة على أنها سريعة الحمض.

على عكس تقنية Ziehl-Neelsen التي تعمل على إصلاح الصبغة بالحرارة ، فإن هذه الخطوة ليست ضرورية في تقنية Kinyoun ، لأن محلول الفوكسين الكربولي المحضر لهذه التقنية يحتوي على تركيز عالٍ من الفينول.

يذوب الفينول المادة الدهنية في جدار الخلية ، مما يسمح بدخول صبغة الكاربولفوكسين. بعد أن تخترق الصبغة ، تظل ثابتة على الرغم من غسل الكحول الحمضي.

وبهذه الطريقة ، تكتسب الكائنات الحية الدقيقة سريعة الحموضة اللون الأحمر المميز ، في حين أن كل شيء غير سريع الحموضة يتغير لونه ويصبح لونه أزرق.

تقنية

المواد

- تعديل carbol fuchsin.

- كحول - حامض.

- الميثيلين الأزرق.

تحضير Kinyoun carbol fuchsin

- الفوشسين الأساسي: 4 غرام.

- الفينول: 8 مل.

- الكحول (95٪): 20 مل.

- ماء مقطر: 100 مل.

يجب إذابة الفوشسين الأساسي ببطء في الكحول ، مع الخلط باستمرار. بعد ذلك ، يتم إذابة الفينول المتبلور في حمام مائي عند 56 درجة مئوية. بمجرد الذوبان ، يضاف 8 مل إلى محلول الفوكسين المحضر أعلاه.

تحضير الكحول الحمضي

- حمض الهيدروكلوريك المركز: 3 مل.

- ايثانول (95٪): 97 مل.

يجب قياسه وضمه وخلطه.

تحضير صبغة الميثيلين الزرقاء المتباينة

- الميثيلين الأزرق: 0.3 جرام.

- ماء مقطر: 100 مل.

يتم وزنها وحلها.

تقنية تلطيخ كينيون

1- تحضير مسحة مباشرة من العينة ، والتي يمكن أن تكون من البلغم أو سائل الرئة أو رواسب البول أو السائل النخاعي أو البراز ، من بين أمور أخرى ؛ أو من معلق للكائنات الدقيقة التي تم الحصول عليها من مستعمرات نقية تم تطويرها في وسط الاستزراع الأولي.

2- إصلاح المسحة بالحرارة.

3- ضع المسحة على جسر التلوين وقم بتغطيتها بكاشف Kinyoun carbol fuchsin المحضر. اتركه يرتاح لمدة 3 إلى 5 دقائق.

4- يغسل بالماء المقطر.

5- مبيض بالكحول الحمضي لمدة 3 دقائق ثم اغسله مرة أخرى بالماء المقطر.

6- قم بالتبييض مرة أخرى بالكحول الحمضي لمدة دقيقة أو دقيقتين حتى يتوقف التلوين.

7- اغسل بالماء المقطر واتركه حتى يصفى مع وضع الشريحة في وضع رأسي.

8- غطي المستحضر بأزرق الميثيلين واتركيه لمدة 4 دقائق.

9- يغسل بالماء المقطر ويترك ليجف في الهواء.

10- افحص 40X ثم 100X.

لتحسين وتسريع تلطيخ الكائنات الدقيقة سريعة الحموضة ، أضف قطرة واحدة من عامل ترطيب (مثل Tergitol رقم 7) إلى 30 أو 40 مل من Kinyoun Carbol Fuchsin.

تقوم بعض المعامل بتغيير صبغة الميثيلين الزرقاء المتباينة إلى اللون الأخضر الفاتح أو حمض البيكريك ؛ الأول يعطي الخلفية لونًا أخضر والثاني يعطي لونًا أصفر.

تقنية كينيون الخاصة للنوكاردياس

لتحسين تلطيخ البكتيريا من جنس Nocardia ، يتم استخدام تعديل لصبغة Kinyoun. التقنية كالتالي:

1- قم بتغطية اللطاخة بـ Kinyoun carbol fuchsin لمدة 3 دقائق.

2- يغسل بالماء المقطر.

3- تغير اللون لفترة وجيزة باستخدام الكحول الحمضي المحضر بنسبة 3٪ حتى يتوقف اللون عن الزوال.

4- اغسله مرة أخرى بالماء المقطر.

5- غطي المستحضر بأزرق الميثيلين واتركيه يعمل لمدة 30 ثانية.

6- يغسل بالماء المقطر ويترك ليجف في الهواء.

تم تعديل تقنية carbol fuchsin و trichrome المدمجة بواسطة Didier

يوصى باستخدام هذه التقنية لتحليل عينات البراز للكشف عن جراثيم الكوكسيديا و Microsporidium في نفس الوقت. الإجراء الواجب اتباعه هو كما يلي:

1- قم بتغطية اللطاخة بـ Kinyoun carbol fuchsin لمدة 10 دقائق.

2- أزل الملون واغسل بالماء المقطر.

3- مبيض لمدة 30 ثانية بكحول حمض الهيدروكلوريك.

4- اغسله مرة أخرى بالماء المقطر.

5- غطي المسحة بمحلول ثلاثي الكروم لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية.

6- اغسل بالماء المقطر.

7- مبيض لمدة 10 ثوان بكحول حامض الخليك.

8- اغسل اللطاخة لمدة 30 ثانية باستخدام 95٪ من الإيثانول.

سؤال وجواب

كعنصر تحكم إيجابي ، يتم تحضير مسحات بسلالات Mycobacterium tuberculosis وتلطيخها بالكواشف المعدة للتحقق من أن البكتيريا تأخذ اللون المناسب (أحمر - فوشيا).

يمكن أيضًا استخدام الضوابط السلبية من خلال تحضير اللطاخات بأي سلالة غير حمض الكحول السريع ، وبالتالي التحقق من أن العينة بأكملها تأخذ اللون المتباين.

مقارنة بين تقنية كينيون وتقنية Ziehl-Neelsen

تقنية Kinyoun أبسط لأنها تلغي خطوة التسخين ، لكن ميزتها الرئيسية هي أنها تتجنب انبعاث أبخرة شديدة السمية ومسببة للسرطان على المدى الطويل. لذلك ، فإن بقعة كينيون أكثر أمانًا لتلطيخ الأفراد.

من المهم أن نأخذ في الاعتبار أنه يجب الحرص على أن الكواشف لا تتلامس مباشرة مع الجلد ، لأنها تآكل والتبييض قابل للاشتعال.

أما بالنسبة للعيوب ، فإن اللطاخة السلبية لا تشير بالضرورة إلى عدم وجود الكائن الحي. علاوة على ذلك ، يمكن أن يؤدي وجود الحطام الخلوي إلى نتائج إيجابية خاطئة ، مما يؤدي إلى الارتباك في التشخيص.

مرجع

1. الكيمياء السريرية التطبيقية. (2016). طقم BK Kinyoun متوفر على الرابط: cromakit.es
2. أوروزكو ريكو ميغيل. كينيون وصمة عار واثنين من الكوكسيديا في فيروس نقص المناعة البشرية. المجلة الطبية MD. 2011 ؛ 3 (2): 137
3. فوربس ب ، ساحم د ، ويسفيلد أ (2009). بيلي وسكوت التشخيص الميكروبيولوجي. 12 إد. الأرجنتين. التحرير Panamericana SA
4. Koneman E ، Allen S ، Janda W ، Schreckenberger P ، Winn W. (2004). التشخيص الميكروبيولوجي. (الطبعة الخامسة). الأرجنتين ، الافتتاحية Panamericana SA
5. المساهمين في ويكيبيديا. "بقعة كينيون". ويكيبيديا، الموسوعة الحرة. ويكيبيديا ، الموسوعة الحرة ، 8 فبراير 2018. الويب. 5 يناير 2019.
6. Combol A و Fernández N و Figueredo E و Acuña A و Zanetta E. تنفيذ تقنية تلطيخ للتشخيص المتزامن لـ Coccidia و Microsporidia. معهد النظافة بجامعة الجمهورية. مونتيفيديو. أوروغواي. متاح على: hygiene.edu.uy