- أساس
- مجموعة متنوعة من الملونات
- تقنية
- المواد
- قد جرونوالد محلول صبغ مركز
- مركز جيمسا للبقع
- تحضير محلول المخزن المؤقت عند درجة الحموضة 7.2
- إجراء تلطيخ مسحة الدم أو نخاع العظم
- الوضع الكلاسيكي
- وضع سريع
- تقنية تلوين مسحات السائل المنوي
- مواصفات مهمة
- التطبيقات
- علم الخلايا المهبلي
- عينة الحيوانات المنوية
- المراجع
في مايو جرونوالد بالغيمزا أو بابنهايم وصمة عار هي تقنية تلطيخ التفاضلية التي يمزج بالغيمزا ومايو جرونوالد الكواشف. يتم استخدامه للتمييز بين خلايا الدم الطبيعية وغير الطبيعية في مسحات الدم المحيطي ونخاع العظام ، وكذلك لتلوين المقاطع النسيجية والعينات الخلوية.
كل من الكواشف -جيمسا وماي جرونوالد- مشتق من تلطيخ من نوع رومانوسكي ، وهي تقنية تعتمد على مزيج من الأصباغ الحمضية والقاعدية.
مسحة تظهر العدلة المجزأة والخلايا الميلانية في حالة سرطان الدم النخاعي المزمن ، ملطخة بصبغة ماي غرونوالد جيمسا. الدكتور رامون سيمون لوبيز (https://es.m.wikipedia.org/wiki/Archivo:LMC-1.JPG) من خلال Wikipedia.org.
قام Giemsa بتحسين التقنية عن طريق تثبيت خليط اليوزين والميثيلين الأزرق ومشتقاتهما مع الجلسرين. بدلاً من ذلك ، يستخدم May Grünwald الأيوزين والميثيلين الأزرق ، باستخدام الميثانول كمذيب. وقد أسفر هذا المزيج الاستراتيجي عن نتائج ممتازة.
على الرغم من أنه فيما يتعلق بملاحظة مورفولوجيا الخلية ، فإنها تعمل بطريقة مشابهة لبقع جيمسا ورايت ، إلا أن هذه التقنية تعمل على تحسين الأساليب السابقة من خلال تنقية تلطيخ الطفيليات التي تسبب الملاريا ومرض شاغاس وداء الليشمانيات وداء المشعرات.
بالإضافة إلى ذلك ، فقد ثبت أنها تقنية مفيدة للغاية للدراسة الخلوية للسائل المنوي. لقد برز ليس فقط من خلال إظهار الخصائص المورفولوجية للحيوانات المنوية ، ولكن أيضًا من خلال السماح بالتمايز عالي الكفاءة للخلايا البيضاء والخلايا الظهارية وخلايا تكوين الحيوانات المنوية.
أساس
تتبع هذه التقنية أساس بقع رومانوسكي ، حيث تمتلك الأصباغ الحمضية تقاربًا انتقائيًا للمكونات الخلوية الأساسية والمكونات الحمضية التي تجذب البقع الأساسية.
شرح بطريقة أخرى ، كل من تركيبات الخلايا والأصباغ لها شحنة كهربائية موجبة أو سالبة ؛ مثل صد الاتهامات وجذب رسوم مختلفة.
على سبيل المثال ، الأصباغ الأساسية مثل الميثيلين الأزرق مشحونة بشكل إيجابي وتنجذب إلى الهياكل سالبة الشحنة. هذا هو السبب في أن هذه الصبغة تلطخ النوى الغنية بالحمض النووي والحمض النووي الريبي التي تحتوي على مجموعات فوسفات سالبة الشحنة.
كما أن حبيبات الخلايا القاعدية المجزأة والسيتوبلازم لخلايا الدم البيضاء أحادية النواة المحتوية على الحمض النووي الريبي ملطخة أيضًا.
وبالمثل ، تحمل الصبغة الحمضية شحنة سالبة ، وهذا هو سبب ارتباطها ببنى موجبة الشحنة مثل كريات الدم الحمراء وحبيبات الحمضات المجزأة. أما بالنسبة لحبيبات العدلات المجزأة ، فتثبت كلا الأصباغ.
مجموعة متنوعة من الملونات
في هذه التقنية ، تتعايش مجموعة من التفاعلات بين الأصباغ المتعامدة و المتغيرة اللون. ترتبط العناصر المتعامدة اللون (إيوزين وأزرق الميثيلين) ببنية الخلية التي ترتبط بها وتوفر لونًا ثابتًا لا يتغير.
من ناحية أخرى ، فإن المتغيرات (مشتقات الميثيلين الأزرق اللازوردي A و اللازوردي B) ، تختلف في لونها الأصلي بمجرد أن يتم ربطها بالهيكل المحدد ، وقد يكون هناك مجموعة متنوعة من الظلال.
أخيرًا ، تتطلب الخطوة التي يتخذها محلول May Grünwald وجود الماء ، لأنه بدون ذلك سوف تخترق الصبغة الهياكل ولكنها لن تصلح. ولكي يحدث هذا ، يجب أن تصبح الصبغة قطبية أو مؤينة ، وبالتالي تكون قادرة على التعجيل والربط مع الهياكل ذات الصلة.
تقنية
المواد
- الشرائح.
- جسور التلوين.
- حل May-Grünwald.
- صبغة جيمسا.
- ماء مقطرة.
قد جرونوالد محلول صبغ مركز
يجب وزن 0.25 جم من يوزين - ميثيلين أزرق (وصمة عار حسب May Grünwald) وحلها في 100 مل من الميثانول. ثم يخلط المستحضر لمدة ساعة ويترك للراحة لمدة 24 ساعة. بعد مرور الوقت ، يتم تصفيته.
لتطبيق هذه التقنية ، يجب تخفيف صبغة May Grünwald على النحو التالي: للحصول على 200 مل من الصبغة المخففة ، قم بقياس 30 مل من المحلول المركز ، أضف 20 مل من محلول منظم و 150 مل من الماء المقطر المعدل إلى pH7.2-7.3. في وقت لاحق يتم خلطها وتصفيتها.
مركز جيمسا للبقع
يجب وزن 0.5 جم من الأزرق اللازوردي - يوزين - ميثيلين (صبغة وفقًا لـ Giemsa) ، مذابًا في 50 مل من الميثانول و 50 مل من الجلسرين يضاف إلى الخليط.
لتنفيذ هذه التقنية ، قم بتخفيف 1:10 بمحلول منظم واتركه يرتاح لمدة 10 دقائق. يمكن تصفيته إذا لزم الأمر.
تحضير محلول المخزن المؤقت عند درجة الحموضة 7.2
يجب وزنها:
- 40 مجم من ثنائي فوسفات هيدروجين البوتاسيوم (KH2PO4).
- 151 مجم من ثنائي فوسفات هيدروجين الصوديوم 12 هيدرات (Na2HPO4).
يذوب كلا المركبين في 100 مل من الماء.
إجراء تلطيخ مسحة الدم أو نخاع العظم
هناك وضعان: كلاسيكي وسريع.
الوضع الكلاسيكي
- غطي اللطاخات لمدة 2 إلى 3 دقائق بمحلول May-Grünwald المخفف.
- اغسل بالماء المقطر لإزالة المحلول السابق.
- غطيه بنفس محلول الغسيل واتركيه لمدة دقيقة. الفكرة هي أن الصبغة السابقة مثبتة في الهياكل وفي نفس الوقت يتم ترطيب الخلايا.
- أضف 12 قطرة من صبغة Giemsa المخففة إلى الماء المخزن وانفخ لخلطها وتجانسها. اتركه يرتاح لمدة 15 إلى 20 دقيقة.
- اغسل المسحات بالماء المقطر وضعها لتجف في الهواء.
- ركز واعرض خلايا الدم الملطخة تحت مجهر ضوئي باستخدام هدف 40X. إذا لزم الأمر ، يمكن استخدام 100X.
وضع سريع
- قم بتغطية اللطاخة ببقعة May Grünwald المخففة لمدة دقيقة واحدة.
- يغسل بالماء المقطر.
- غطيه بالماء واتركه يرتاح لمدة دقيقة واحدة.
- أضيفي بقعة جيمسا المخففة واتركيها لمدة 5 دقائق.
- اغسلها بالماء المقطر واتركها لتجف في الهواء.
التقنيات الموصوفة هنا هي دليل إرشادي ، ولكن يجب أن يؤخذ في الاعتبار أن الإجراءات وأوقات التلوين تختلف باختلاف الشركة التجارية التي توزع الكواشف. يُنصح باتباع الخطوات الموضحة بدقة من قبل كل منزل تجاري.
تقنية تلوين مسحات السائل المنوي
1- قم بتغطية المسحة بطبقة رقيقة من محلول May Grünwald لمدة 4 دقائق.
2- أزل الملون واغسل بالماء المقطر.
3- ضع طبقة من الجيمسا المخفف (1:10) في ماء مقطر لمدة 15 دقيقة.
4- قم بإزالة الصبغة وغسلها بالماء المقطر.
5- دعه يجف وراقب تحت المجهر.
الألوان المتوقعة مع صبغة May Grünwald Giemsa
مواصفات مهمة
تتطلب هذه التقنية أن تحتوي الكواشف ومحاليل الغسيل على درجة حموضة معدلة إلى 7.2 -7.3 ، بحيث لا يتم تشويه تقاربات الأصباغ للهياكل الخلوية ولا يتغير اللون النهائي المتوقع.
التطبيقات
تُستخدم هذه التقنية في المختبرات السريرية لتلطيخ الدم المحيطي ومسحات نخاع العظام وأقسام الأنسجة والخلايا.
في مجال أمراض الدم ، تعتبر هذه التقنية ذات أهمية حيوية في دراسة تشوهات الخلايا من حيث الشكل والحجم والعدد. إنها أداة قيمة للغاية لتشخيص أمراض معينة ، مثل اللوكيميا وفقر الدم.
بالإضافة إلى ذلك ، فهو ذو فائدة كبيرة عند البحث عن الطفيليات في مناطق أمراض الدم (Plasmodium sp و Trypanosoma cruzi) أو المناطق النسيجية (Leishmanias sp).
علم الخلايا المهبلي
فيما يتعلق بعلم الخلايا المهبلي ، فإن هذه التقنية مفيدة بشكل خاص لمراقبة المشعرات المهبلية. هذا اكتشاف مهم ، لأن وجوده يحاكي صور السرطان في الموقع التي تختفي لاحقًا عند القضاء على الطفيلي.
عينة الحيوانات المنوية
لقد كانت أداة مثالية لدراسة عينات الحيوانات المنوية ، لأنها توفر معلومات قيمة عن جودة الحيوانات المنوية.
تتعلق البيانات التي تقدمها بشكل أساسي بالعدد والتشكيل ، وكذلك بالخلايا المصاحبة التي قد تكون موجودة والتي لها أهمية حيوية ، مثل الخلايا الجرثومية والكريات البيض والخلايا الظهارية.
من خلال هذا التحليل يمكن وصف التشوهات التي لوحظت في الحيوانات المنوية في الرأس والرقبة والجزء الأوسط والقطعة الرئيسية.
بالإضافة إلى ذلك ، يمكنهم أيضًا المساعدة في إظهار حالات هيموسبيرميا (وجود خلايا الدم الحمراء في السائل المنوي) وكثرة النطاف أو نقص النطاف (زيادة عدد الكريات البيض في السائل المنوي).
المراجع
- Costamagna S، Prado M. التحقق من صحة الاختبار الجديد ، بقع May Grünwald-Giemsa و Gram ووسائط الثقافة لتشخيص Trichomonas vaginalis. باراسيتول. 2001 ؛ 25 (1-2): 60-64. متوفر في: scielo.
- مختبر Merck KGaA. قد Grünwald eosin methylene blue للفحص المجهري.
- "وصمة عار مايو غرونوالد جيمسا." ويكيبيديا، الموسوعة الحرة. 15 تشرين الثاني (نوفمبر) 2018 ، الساعة 14:37 بالتوقيت العالمي المنسق. 8 يناير 2019، 04:29: en.wikipedia.org
- معمل بانريك للكيماويات الزجاجية. كواشف للتقنيات النسيجية وأمراض الدم والأحياء الدقيقة. متاح في: glasschemicals.com
- Retamales E ، Manzo V. توصية لتلطيخ مسحات الدم لقراءة مخطط الدم. المختبر الوطني والمرجعي للطب الحيوي. معهد الصحة العامة في شيلي.
- Sarabia L. Spermiogram وفقًا لمعايير منظمة الصحة العالمية. برنامج علم التشريح والبيولوجيا التنموي. مدرسة الطب. جامعة تشيلي. متاح في: pp.centramerica.com