لطخة رايت: الأساس المنطقي والمواد والتقنية والاستخدامات - مادة الاحياء - 2026

و رايت وصمة عار هي تقنية تلطيخ تم إنشاؤها من قبل الطبيب الشرعي الأمريكية جيمس هوميروس رايت في عام 1902، استنادا إلى وصمة عار Romanowsky. نظرًا لأن بقعة رومانوسكي كانت غير مستقرة ، قام رايت بدمج الميثانول كمذيب ومثبت.

هذا التلوين متعدد الألوان ، مما يعني أنه يولد عدة ألوان اعتمادًا على البنية التي تمتص الصبغة. تم استخدام تقنية التلوين هذه على نطاق واسع لإجراء التعداد التفاضلي لخلايا الدم البيضاء ودراسة مورفولوجيا خلايا الدم الحمراء والصفائح الدموية وخلايا الدم البيضاء في الدم المحيطي ونخاع العظام.

مسحات دم محيطية مختلفة ملطخة بصبغة رايت. أ. سرطان الدم الحاد ب. المتصورة النشيطة داخل كريات الدم الحمراء. C. المتصورة المنجلية ، الخلايا الكبيرة. D. اللمفاويات

تطبيقه مهم للغاية ، حيث يمكن رؤية التشوهات في خطوط الخلايا المختلفة في الدم ، مما يسهل تشخيص الأمراض مثل اللوكيميا أو الالتهابات البكتيرية أو الطفيلية.

ربما تكون هذه هي أكثر التطبيقات شيوعًا التي تستخدم فيها هذه التقنية ، لكنها ليست الوحيدة. كما أنه مفيد في عينات أخرى غير الدم ونخاع العظام ، مثل إفرازات الأنف ، ومخاط البراز ، والبلغم ، وعينات الجلد ، وغيرها.

مبررات بقعة رايت

ولدت بقعة رايت من بقعة رومانوسكي ، والتي تتكون من محلول كحول ميثيل لصبغة حمضية (يوزين Y) وصبغة أساسية (أزرق ميثيلين) ومنتجات الأكسدة الخاصة بها.

يتسبب مزيج الصبغات المستخدمة في صبغة رايت في التأثير المعروف باسم Romanowsky ، أي أنه يعطي لونًا أرجوانيًا جميلًا لنواة الكريات البيض والحبيبات العدلات ، بينما تلطخ خلايا الدم الحمراء باللون الوردي.

المكونات المسؤولة عن إعطاء التدرج اللوني النموذجي لصبغة رايت هي الأزرق B و eosin Y. وسيعتمد التأثير الملاحظ على ارتباط الأصباغ بالتركيبات الكيميائية وتفاعلات اللون الأزرق B و eosin Y.

الهياكل الحمضية مثل الأحماض النووية ، والبروتينات النووية ، والسيتوبلازم التفاعلي غير الناضج لبعض أنواع الخلايا ، وإصلاح اللون الأزرق B (البقعة الأساسية).

بينما الهياكل الأساسية مثل الهيموغلوبين ، حبيبات الحمضات المقسمة ، من بين الهياكل الخلوية الأخرى ، تربط اليوزين Y (الصبغة الحمضية).

يمكن أن تتأثر نتيجة التلوين بعوامل مختلفة ، مثل الأس الهيدروجيني لصبغة رايت والعازل ومحلول الغسيل ؛ وكذلك وقت التلوين والتثبيت.

لذلك ، تعد كل خطوة في تحضير الكواشف أمرًا بالغ الأهمية ويجب تنفيذها مع الاهتمام بكل التفاصيل.

المواد

لطخة رايت. يتطلب 100 مل:

تزن 0.3 جرام من بقعة رايت ، وقياس 97 مل من الميثانول و 3 مل من الجلسرين.

تجهيز

ضع الكمية الثقيلة من تلوين رايت في ملاط ​​وادمج الجلسرين تدريجيًا حتى يذوب المسحوق تمامًا.

بعد ذلك ، يضاف الميثانول ويخلط ويصب في زجاجة كهرمان.

قبل الاستخدام ، يجب رج المحلول بحركات لطيفة وتصفيته.

محلول المخزن المؤقت

في لتر واحد من الماء المقطر ، تمت إضافة 3.76 جم من هيدرو فوسفات ثنائي الصوديوم (Na ₂ HPO ₄ 2H ₂ 0) بالإضافة إلى 2.1 جم من فوسفات البوتاسيوم ثنائي الهيدروجين (KH ₂ PO ₄).

تخلط جيدا حتى تذوب جميع الكواشف المدمجة. ضبط الأس الهيدروجيني إلى 7.2. تصب في وعاء زجاجي وتحفظ في درجة حرارة الغرفة.

المواد الإضافية اللازمة لأداء التلوين

بالإضافة إلى ذلك ، هناك حاجة إلى مواد أخرى لتكون قادرة على تنفيذ تقنية التلوين ، وهي: شرائح أو أغلفة الأشياء ، جسر التلوين ، القمصان التي تحتوي على الماء أو المخزن المؤقت للغسيل ، ومؤقت للحفاظ على أوقات التلوين وبعض مواد التجفيف (ورق ماص أو شاش أو قطن).

مكونات بقعة رايت

الميثانول

يعمل الكحول (الميثانول) كمثبت لمسحة الدم على الشريحة.

وهو في الأساس كاشف لتقليل التخثر وتجفيفه وتثبيته. لذلك ، تتمثل وظيفتها في تخثر البروتينات وجعلها غير قابلة للذوبان ، ولكن دون تغيير طبيعتها فعليًا.

الميثانول هو كاشف تثبيت اللطاخة الأكثر استخدامًا في جميع المختبرات ، حيث أنه يوفر نتائج أفضل من الإيثانول. التركيز المثالي هو 99٪.

المثبط

يقوم المخزن المؤقت (المحلول المخزن) بوظيفة ضبط أو الحفاظ على الرقم الهيدروجيني للصبغة ، نظرًا لأن الرقم الهيدروجيني المعدل إلى 7.2 يعد أمرًا ضروريًا لهياكل الخلايا لتكون قادرة على امتصاص الأصباغ بشكل صحيح.

من ناحية أخرى ، تعمل خطوة تثبيت الميثانول على تجفيف الخلايا ويساعد المخزن المؤقت على ترطيبها.

يوزين (ص)

يوزين له انجذاب لبنات البناء لأنه صبغة حمضية. من المعروف أن نوعين من اليوزين متشابهان جدًا مع بعضهما البعض ، لدرجة أنه يمكن استخدام أي منهما ، والحصول على نفس النتيجة.

أحدهما يسمى يوزين Y ، أو يوزين أصفر ، أو رباعي بروموفلوريسين ، والآخر يسمى يوزين ب ، إريثروسين ب المزرق ، أو ديبرومودينيتروفلوريسئين. ومع ذلك ، فإن eosin Y هو الأكثر استخدامًا.

أهم خصائص هذه الصبغة هي قطبيتها السلبية ، مما يجعلها تنجذب إلى هياكل الخلايا موجبة الشحنة.

الميثيلين الأزرق

إنه التلوين الأساسي. الخاصية الرئيسية لها هي metachromasia ، أي أنه لن تكون كل الهياكل ملطخة بنفس اللون ، فهي تعتمد على التركيب الكيميائي للهياكل التي يتم تلوينها.

يتحول البعض إلى اللون الأزرق الفاتح أو الأزرق الداكن ، ويتحول البعض الآخر إلى اللون الأرجواني الداكن أو البنفسجي الباهت.

تقنية

1-إجراء عملية فرد العينة بحيث يبقى غشاء رقيق إما على شريحة أو ساترة.

2-اتركه يجف في الهواء لمدة ساعتين تقريبًا.

3-ضع اللطاخة الجافة على جسر التلوين أو صينية التلوين بحيث يكون انتشار العينة متجهًا لأعلى.

4-قم بتغطية الورقة باستخدام بقعة رايت قطرة قطرة حتى يتم تغطية السطح بالكامل. اتركيه لمدة 5 - 8 دقائق.

5-يجب أن تغطي البقعة الشريحة بالكامل ، دون انسكاب فوق الحواف. إذا بدأ التبخر خلال فترة التلوين ، أضف بضع قطرات إضافية.

6-بعد ذلك أضف كمية متساوية من ممتص الصدمات ، انفجر قليلاً حتى يظهر اللمعان المعدني المميز. الوقت من 10 إلى 15 دقيقة.

7-يغسل بماء الصنبور ، مع وضع التيار اللطيف حتى يصبح لون الورقة وردية.

8-بشاش مبلل بالكحول ، قم بإزالة الصبغة الملتصقة بالجزء الخلفي من الشريحة.

9- اترك المسحة تجف جيداً قبل وضع زيت الغمر لمشاهدتها تحت المجهر.

خدمة

أمراض الدم

إنه مثالي لتلوين مسحات الدم المحيطية ، وفحص مسحات الدم السميكة ودراسة الخلايا من عينات نخاع العظم.

نظرًا للخصائص الكيميائية لهذه المجموعة من الأصباغ ، يمكن التعرف بسهولة على هياكل الخلايا ، ويمكن تمييز الأنواع المختلفة من الخلايا الموجودة.

سيلان الأنف

هذه التقنية مفيدة جدًا في تحديد خلايا الإفرازات الأنفية (الخلايا الظهارية ، الحمضات المجزأة ، الخلايا متعددة الأشكال) في تشخيص التهاب الأنف التحسسي.

علم الطفيليات

بهذا المعنى ، فقد كان مفيدًا في دراسة الليشمانيا sp داخل المنسجات للأنسجة الخلوية تحت الجلد في تقرحات الجلد. وبالمثل ، يتم استخدامه لتحديد الكريات البيض في عينات البراز (مخطط الدم في البراز).

في هذه الحالة ، من المهم للطبيب معرفة ما إذا كانت كثرة الكريات البيضاء الموجودة في البراز متعددة الأشكال أو أحادية النواة. ستوجه هذه النتيجة في مخطط الدم في البراز ما إذا كانت عدوى بكتيرية أو فيروسية على التوالي

من ناحية أخرى ، يمكن العثور على الطفيليات المنتشرة في الدم داخل كريات الدم الحمراء أو خالية في البلازما. الطفيليات التي تم البحث عنها هي Plasmodium spp و Trypanosoma cruzii و filarias ، وهي مفيدة في الطب البيطري في البحث عن Theileria equi و Babesia caballi ، العوامل المسببة لمرض البيبسيوس ، خاصة في الخيول.

تجعل صبغة رايت وصمة جيمزا من الممكن التمييز بين الطفيليات الدموية والمكونات الخلوية العادية. يمكن استخدام نوعين من الفروق لهذا:

انتشر رقيقة

ينتشر الدم على شكل غشاء رقيق على شريحة. ملطخ بصبغة رايت ، مما يكشف عن خصائص النواة والسيتوبلازم.

قطرة سميكة

تستخدم هذه المنهجية للتحقق من وجود الطفيليات في كمية أكبر من الدم.

للقيام بذلك ، يتم وضع قطرة دم كبيرة على شريحة. بمجرد الوصول إلى هناك ، يجب إزالة رجفان القلب ، مما يجعل دوائر أكبر وأكبر من المركز إلى الخارج ، باستخدام حافة شريحة أخرى.

أخيرًا ، لكي تكون قادرًا على مراقبة الطفيليات في المسحة السميكة ، يجب أن يتم تحلل كريات الدم الحمراء بالماء.

التهابات الجهاز التنفسي

على مستوى الجهاز التنفسي ، هذه التقنية مفيدة أيضًا ، لأن الخلايا الموجودة في عينات البلغم أو غسل الشعب الهوائية أو القصبات الهوائية ، مهمة لتحديد التشخيص.

وبالمثل ، يمكن هنا تمييز الخلايا متعددة الأشكال والخلايا وحيدة النواة.

علم الجراثيم

استخدام هذه التقنية في علم الجراثيم محدود ، لأنها ليست جيدة لتلوين البكتيريا ، وهذا هو سبب استخدام تقنيات تلطيخ أخرى متخصصة في تلطيخها.

ومع ذلك ، فقد تم استخدامه للبحث عن الخلايا الظهارية مع المتدثرة الحثرية أجسام متضمنة في مسحات الغشاء المخاطي في مجرى البول أو باطن عنق الرحم ، على الرغم من أنه يجب الاعتراف بأنها ليست أفضل طريقة لذلك.

من الممكن أيضًا ملاحظة البكتيريا الشبيهة باللولب مثل Borrelia burgdorferi بين خلايا الدم الحمراء في المرضى المصابين ، بالإضافة إلى التقرن أو إدراج أجسام Ehrlichia sp في سيتوبلازم الخلايا الليمفاوية أو الخلايا الوحيدة أو العدلات في لطاخة الدم.

علم الفطريات

هيستوبلازما كابسولاتوم هي فطر ممرض يتم تشخيصه في كثير من الأحيان عن طريق المراقبة المجهرية لعينات الأنسجة المختلفة ، الملطخة بصبغة رايت.

كيف يتم ملاحظة تراكيب عينة الدم مع بقعة رايت؟

المصدر: Retamales E، Mazo V. Institute of Public Health، Government of Chile. توصيات لتلوين مسحات الدم لقراءة مخطط الدم.

توصيات لتلوين جيد

يجب أن تجف شرائح عينة الدم في الهواء تلقائيًا. يجب أن تكون المسحات رفيعة قدر الإمكان للحصول على تثبيت أفضل للصبغة وتجنب الإفراط في التلطيخ.

للحصول على تلطيخ عالي الجودة ، يُنصح بالتلوين في غضون ساعتين من تحضير اللطاخة. من ناحية أخرى ، فإن العينة المثالية هي الدم الشعري ، بدون مضادات التخثر.

ومع ذلك ، إذا تم استخدام الدم الوريدي ، فيجب استخدامه كمضاد للتخثر EDTA وليس الهيبارين ، لأن الأخير يمكن أن يشوه هياكل الخلايا.

لتجنب تلف الملون المحضر ، يجب تخزينه في أماكن جافة.

أثناء عملية الغسيل ، يوصى باستخدام الماء المعدل لدرجة الحموضة المحايدة.

أخيرًا ، يُنصح باختبار طرق التلوين المستخدمة في المختبر من وقت لآخر.

يتم ذلك عن طريق تلطيخ العينات أو الأنماط الممتدة ، كعنصر مراقبة الجودة. هذه الخطوة مهمة ، لأنها تضمن تحضير التلوين بشكل صحيح وتوحيد أوقات التلوين بشكل جيد.

إذا كانت ورقة النمط سيئة اللون ، فهناك مشاكل يجب حلها.

الأخطاء الشائعة في تلوين رايت

تلطيخ شاحب جدا

عادة ما تكون اللطاخات الباهتة جدًا ناتجة عن وقت تلطيخ قصير جدًا أو الغسيل المفرط. يتم تصحيحه بإطالة وقت التلامس مع الصبغة أو تقليل وقت الغسيل.

رواسب التلوين

يمكن أن يكون لوجود رواسب الصبغة في اللطاخة عدة أسباب ، ومع ذلك ، فإن الأسباب الأكثر شيوعًا هي: استخدام صبغة غير مفلترة ، وتلطيخ جسور تلطيخ غير متساوية ، واستخدام أوراق متسخة بالغبار أو الشحوم ، وعدم غسلها جيدًا تلطيخ كامل.

مسحة حمراء أو زرقاء للغاية

المخزن المؤقت مسؤول عن الرقم الهيدروجيني للصبغة. سوف ينتج عن الأصباغ التي يكون الرقم الهيدروجيني أقل من ذلك (الحمضي) مسحات شديدة الاحمرار.

إذا كان الرقم الهيدروجيني للصبغة أعلى (قلوي) ، فسيتم الحصول على مسحة شديدة الزرقة.

وضع التخزين

يجب تخزين الكاشف في درجة حرارة الغرفة.

المراجع

1. Gutiérrez V. دراسة مقارنة بين طريقة تلطيخ رايت واختبار إليسا لتشخيص داء إيرليخيات الكلاب في مدينة سان بيدرو سولا بهندوراس. 2008. رسالة درجة للتأهل لدرجة الطب البيطري. جامعة سان كارلوس في غواتيمالا.
2. López-Jácome L، Hernández-Durán M، Colín-Castro C، Ortega-Peña S، Cerón-González G، Franco-Cendejas F. البقع الأساسية في مختبر الأحياء الدقيقة. البحث في الإعاقة. 2014 ؛ 3 (1): 10-18.
3. "لطخة رايت". ويكيبيديا، الموسوعة الحرة. 18 مايو 2018، 12:05 UTC. 8 ديسمبر 2018، 20:37
4. كالديرون أ ، كاردونا ي ، فيرغارا Ó. تردد Babesia spp. في صيد الخيول ، قرطبة (كولومبيا). القس udcaactual divulg cient. 2013 ؛ 16 (2): 451-458.
5. فوربس ب ، ساحم د ، ويسفيلد أ (2009). بيلي وسكوت التشخيص الميكروبيولوجي. 12 إد. الأرجنتين. التحرير Panamericana SA
6. Retamales E، Mazo V. Institute of Public Health Government of Chile. توصيات لتلوين مسحات الدم لقراءة مخطط الدم.