- أساس
- تقنية
- المواد
- نيجروزين
- حبر صيني
- مواصفات لأخذ العينات
- تنفيذ التقنية بالعينات المباشرة
- تنفيذ التقنية بسلالات من الثقافة
- الملاحظة المجهرية
- مميزات
- عيب
- تلطيخ الأنسجة بالحبر الهندي
- المراجع
و تلطيخ سلبية هي طريقة لتلوين خاص لتسليط الضوء على وجود كبسولة في بعض الكائنات الحية الدقيقة ، أساسا العقدية الرئوية، الكلبسيلة الرئوية والمستخفية neoformans-، من العينات السريرية أو ثقافات نقية.
العينة المباشرة التي يشيع استخدامها لتطبيق تلطيخ سلبي هي السائل النخاعي. تمثل هذه التقنية بديلاً سريعًا للتشخيص الافتراضي لالتهاب السحايا ، وخاصة المكورات المستخفية الحديثة.
ألف جير الأسنان الملون بالحبر الهندي ، B. Cryptococcus neoformans var gatti مغلف بشكل ضعيف كما يحدث في الطبيعة ، باستخدام النيجروسين. C. Cryptococcus neoformans var gatti مع كبسولة سميكة كما هو موجود في شكلها الطفيلي ، باستخدام nigrosin. المكورات المستخفية الحديثة مع حبر هندي مخفف قليلاً. جيزيل كويندي ، من ويكيميديا كومنز / CDC ، عبر ويكيميديا كومنز / مصدر الصورة: موفرو المحتوى: CDC / Dr. لينور هالي ، عبر ويكيميديا كومنز
وبالمثل ، يمكن وضع هذه البقعة على البلغم والسوائل المعقمة بشكل عام ، وكذلك على السلالات المأخوذة من ثقافات صغيرة نقية. تستخدم هذه التقنية حبر نيجروزين أو الهند لتنفيذها ؛ لذلك ، يعد تطبيق منهجية بسيطة للغاية وغير مكلفة توفر معلومات ذات قيمة تشخيصية كبيرة في وقت قصير.
بهذا المعنى ، فإن أي مختبر قادر على إجراء هذا التلوين. بالطبع ، يجب أن يكون لدى المختبر موظفين أكفاء ، قادرين على التعرف على الخمائر المعزولة أو الناشئة عن Cryptococcus neoformans وتمييزها عن الكريات البيض والتحف التي قد تظهر في العينة.
أساس
يعمل حبر نيجروزين والهند بطريقة مماثلة ؛ لذلك ، يمكن استخدام أي من المادتين بالتبادل.
تسمى هذه التقنية التلوين السلبي لأنها تعمل بشكل مخالف لبقية تقنيات التلوين. في هذا ، ما يبقى غير مصبوغ هو الهيكل المطلوب أو الذي يرغب المرء في رؤيته ؛ وهذا هو ، الكائنات الحية الدقيقة.
لذلك ، يعتمد التلوين على تلطيخ الجزء السفلي من اللطاخة بلون غامق. في هذا السيناريو ، تبرز الهياكل الانضغاطية بلون فاتح أو عديم اللون.
بشكل عام ، تكون الخمائر راسخة ، وتحيط بها هالة واضحة تتوافق مع الكبسولة. يحدث هذا لأن الحبر الهندي والنيغروسين مواد غير قادرة على اختراق السكريات التي تشكل كبسولة الكائنات الحية الدقيقة.
من الجدير بالذكر أن الهياكل الأخرى التي قد تكون موجودة في العينة المباشرة ، مثل الكريات البيض أو خلايا الدم الحمراء ، لا تخترق أيضًا.
ومع ذلك ، إذا ماتت الكائنات الحية الدقيقة ، يمكن للصبغة أن تخترق بداخلها ، بحيث يكون هذا التلوين مفيدًا أيضًا لتقييم قابلية الكائنات الدقيقة للحياة.
تقنية
المواد
نيجروزين
يدين Nigrosine باسمه باللون الأسود. هي مادة اصطناعية يتم الحصول عليها من تسخين خليط المركبات العضوية - مثل النيتروبنزين والأنيلين وهيدروكلوريت الأنيلين - باستخدام عامل مساعد (الحديد أو النحاس) في التفاعل المذكور.
حبر صيني
الحبر الصيني مادة يستخدمها الآسيويون بشكل أساسي في الكتابة ، وصناعة الأعمال الفنية ، والرسم الأحادي اللون. تحظى بشعبية كبيرة في الثقافة الصينية.
يتم الحصول عليها من حبر الحبار الممزوج بالفحم المسحوق ، وهو نتاج حرق الأشجار منخفضة الراتنج.
من الممكن أيضًا تحضيره من السخام الناتج عن حرق الهيدروكربونات (الزيوت النباتية) ، جنبًا إلى جنب مع بروتين الجيلاتين الذي يمنحه الاتساق الصحيح لتجنب ترسب جزيئات الكربون.
مواصفات لأخذ العينات
- لا يشترط الصيام.
- يجب أن تحتوي عينة السائل الدماغي النخاعي أو البلغم أو السائل المعقم على 1 مل على الأقل من الحجم ويجب نقلها إلى المختبر في درجة حرارة الغرفة على الفور.
- يجب أخذ عينات السائل النخاعي والسوائل المعقمة من قبل طبيب متخصص.
- يمكن أن تكون أيضًا ثقافة نقية لسلالة مشبوهة مرتبطة بمسببات الأمراض المذكورة أعلاه.
تنفيذ التقنية بالعينات المباشرة
- يجب طرد العينات ، ثم يتم التخلص من المادة الطافية وأخذ الرواسب.
- يتم وضع قطرة من مادة الطرد المركزي (الرواسب) وقطرة من الحبر الهندي أو النيجروزين على شريحة نظيفة.
- يجب خلطها جيدًا وتغطيتها بورقة ساترة ، مما يسمح للقطرة بالانتشار كغشاء رقيق دون المرور فوق الحواف.
- بعد ذلك يتم تركيب المستحضر على المجهر.
- إذا كان المستحضر غامقًا جدًا ، يمكن تخفيفه بالماء.
تنفيذ التقنية بسلالات من الثقافة
- يتم أخذ جزء صغير جدًا من الثقافة الشابة بإبرة بذرة ويتم إذابته في قطرة من الحبر الهندي الموضوعة مسبقًا على شريحة نظيفة.
- يتم وضع ساترة في الأعلى.
- لوحظ في المجهر عند 10x ثم 40X.
يمكنك أيضًا إذابة جزء من المستعمرة في الماء المقطر ، ومن هناك خذ قطرة وخلطها بالحبر الهندي. بهذه الطريقة ، لن يكون التحضير كثيفًا للغاية ، مما يجعل من الممكن مراقبة الهياكل في عزلة ؛ إذا كانت هناك حشود ، فلن يتم ملاحظتها جيدًا.
منهجية أخرى هي ما يلي:
- ضع قطرة من ثقافة التعليق على أحد طرفي الشريحة.
- ضع قطرة من نيجروزين في نفس النهاية واخلط.
- بمساعدة شريحة أخرى ، انشر العينة كما لو كنت تقوم بعمل مسحة دموية.
- دعه يجف وراقب تحت المجهر.
الملاحظة المجهرية
يجب عليك أولاً التركيز على هدف 10x للحصول على رؤية واسعة للمجال. بعد ذلك ، يجب البحث عنها إذا كانت هناك مساحات واضحة ؛ إذا كان هناك تركيز ، 40X لمعرفة التفاصيل.
مميزات
- سهل التنفيذ.
- إنها تقنية غير مكلفة.
- لا تتطلب هذه الطريقة تثبيت المسحة بالحرارة أو باستخدام مواد كيميائية ؛ لذلك ، يتم ملاحظة الكائنات الحية الدقيقة دون تشوهات.
- لا يحتاج المستحضر الطازج إلى التجفيف ، لذلك يمكن ملاحظته على الفور ، مما يؤدي إلى الحصول على نتائج سريعة.
عيب
بمجرد التجميع ، يجب ملاحظة الاستعدادات الطازجة على الفور ؛ إذا سمح لهم بالتجفيف ، لم يعد من الممكن ملاحظتهم ويجب تثبيت واحد جديد.
تلطيخ الأنسجة بالحبر الهندي
وظيفة أخرى يمكن أن يؤديها الحبر الهندي في مختبرات علم الأمراض. يتم تطبيق هذا على عينات الأنسجة المأخوذة جراحيًا لتحديد هوامش استئصال الورم.
يتم رش الأنسجة المميزة بحمض الأسيتيك. يعمل هذا بمثابة مادة لاذعة ويمنع تسرب الحبر عند تعرض الأنسجة للمعالجة الروتينية لإعداد الخزعة.
تتكون العملية من نقع الأنسجة في الكحول والزيلين ، ثم نقعها في شمع البارافين. ترشد هذه العلامة أخصائي علم الأمراض عند مراقبة الأنسجة ، مشيرًا إلى مكان هامش القطع الجراحي أو أي نقطة أخرى مهمة.
المراجع
- «نيجروسينا». ويكيبيديا، الموسوعة الحرة. 11 تموز (يوليو) 2017 ، الساعة 22:46 بالتوقيت العالمي المنسق. 6 يناير 2019 ، 16:56: en.wikipedia.org
- "الحبر الصيني". ويكيبيديا، الموسوعة الحرة. 1 أكتوبر 2018، 03:08 UTC. 6 يناير 2019 ، 18:20: es.wikipedia.org/
- Silva L و Silva C و Fernández N و Bueno C و Torres J و Rico M و Macías J والمتعاونون. (2006). العاملون في مجتمع إكستريمادورا المتمتع بالحكم الذاتي. جدول الأعمال المحدد المجلد الرابع. الافتتاحية MAD. إشبيلية - إسبانيا ، ص 211-212.
- Silva M، García M، Corrales J، Ponce E. (2006). فني مختبر متخصص ، Galician Health Service (SERGAS). موضوع معين جدول الأعمال المجلد 2. التحرير MAD. إشبيلية - إسبانيا ، ص 79-80.
- Forbes B، Sahm D، Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 إد. الأرجنتين. التحرير Panamericana SA