أجار مولر هينتون: الأساس والتحضير والاستخدامات - مادة الاحياء - 2026

لا يعتبر Mueller Hinton Agar انتقائيًا ، حيث يتكون وسط المغذيات الصلبة من ضخ اللحوم ، وحمض الببتون ، والكازين ، والنشا ، والأجار ، والماء المقطر. تسمح هذه الوسيلة بنمو ميكروبي ممتاز لمعظم البكتيريا سريعة النمو.

تم إنشاؤه في الأصل بواسطة John Howard Müeller و Jane Hinton لعزل البكتيريا التي تتطلب احتياجات غذائية مثل Neisseria gonorrhoeae و Neisseria meningitidis. ومع ذلك ، نظرًا لخصائصه ، فقد تبين أنه مثالي لدراسة القابلية للمضادات الحيوية ، مما يوفر نتائج موثوقة وقابلة للتكاثر.

المضادات الحيوية (مولر هينتون أجار). المصدر: Dr Graham Beards at en.wikipedia

لذلك ، فإن أجار مولر هينتون هو وسيط الاستزراع المقبول من قبل معهد المعايير السريرية والمخبرية (CLSI) واللجنة الأوروبية لاختبار الحساسية لمضادات الميكروبات ، لأداء اختبار الحساسية لمضادات الميكروبات بواسطة طريقة نشر قرص كيربي و باور.

أساس

كونه وسيطًا غذائيًا غير انتقائي ، فهو ممتاز لنمو معظم البكتيريا المسببة للأمراض.

من ناحية أخرى ، فإن تركيبتها البسيطة تجعل المواد تنتشر عليها بسهولة ، كونها خاصية أساسية لاختبار الحساسية عن طريق طريقة انتشار القرص.

ومن خصائصه الأخرى أنه يحتوي على كمية منخفضة من المثبطات ، مما يسمح بتقييم السلفوناميدات والتريميثوبريم والتتراسيكلين بشكل فعال.

ومع ذلك ، يجب ألا يغيب عن الأذهان أن الوسيط يجب أن يفي بشروط معينة لضمان عمله بشكل صحيح ، بما في ذلك:

تعديل الأس الهيدروجيني وعمق الأجار والتركيز المناسب من الثايمين والثيميدين و Ca ⁺⁺ و Mg ⁺⁺ و Zn ⁺⁺.

عليك أيضًا أن تعرف أن المنهجية موحدة وبالتالي يجب استيفاء جميع المعلمات ، مثل:

تركيز اللقاح ، تركيز أقراص المضادات الحيوية وحفظها ، وضع العدد المناسب من الأقراص على الأجار ، المسافة بين قرص وآخر ، الوضع الاستراتيجي لبعض المضادات الحيوية ، الغلاف الجوي ، درجة الحرارة ووقت حضانة.

تجهيز

تزن 37 جم من وسط مولر هينتون المجفف وتذوب في لتر واحد من الماء المقطر. سخني الوسط مع التحريك للمساعدة في الذوبان. يغلي لمدة 1 دقيقة.

الأوتوكلاف للتعقيم عند 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. عند إزالتها من الأوتوكلاف ، يجب وضع القارورة في حمام مائي عند 50 درجة مئوية حتى تبرد. صب 25 إلى 30 مل في أطباق بتري معقمة قطرها 10 سم.

يجب أن يبلغ متوسط ​​سماكة الألواح 4 مم (مثالي) ، ويسمح بمدى يتراوح بين 3-5 مم.

إذا كنت ترغب في تحضير أجار الدم باستخدام أجار مولر هينتون كقاعدة ، اسكب 5٪ من دم الضأن المعقم والمنزوع الليفتين قبل التقديم على الأطباق.

يجب أن يكون الرقم الهيدروجيني النهائي للوسيط بين 7.2 إلى 7.4.

استثمرها واحفظها في الثلاجة حتى الاستخدام. اترك اللوح يصل إلى درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام.

لون الوسيط المحضر بيج فاتح.

التطبيقات

يتم استخدامه لإجراء اختبار الحساسية للمضادات الحيوية أو المضادات الحيوية لمعظم مسببات الأمراض سريعة النمو وغير المتطلبة.

إذا تم استكمال الأجار بالدم ، يتم استخدامه لإجراء المضاد الحيوي للكائنات الحية الدقيقة مثل: Streptococcus pneumoniae ، Haemophilus sp ، Neisseria meningitidis ، من بين أمور أخرى. كما تم استخدامه لعزل الليجيونيلا المستروحة.

تقنية المضاد الحيوي

قبل إجراء المضاد الحيوي ، يجب تحضير محلول بكتيري يعادل 1.5 × 10 ⁸ خلايا.

لهذا الغرض ، يتم أخذ 3 إلى 4 مستعمرات من الثقافة النقية وتعليقها في مرق تربتيكاز فول الصويا أو في مرق Müeller Hinton ، في الحضانة لمدة 2 إلى 6 ساعات ويتم تعديل التركيز بمحلول ملحي معقم ، ومقارنته بمعيار Mac Farland الخاص بـ 0.5٪.

إذا كانوا يطالبون بالكائنات الحية الدقيقة ، يمكن تعليق المستعمرات مباشرة حتى تركيز 0.5٪ ماك فارلاند. بعد ذلك ، يتم زرع صفيحة Müeller Hinton بمسحة مشربة بالمحلول البكتيري المحضر.

للقيام بذلك ، يتم غمر المسحة في المحلول ثم يتم إزالة السائل الزائد عن طريق الضغط على جدران الأنبوب. بعد ذلك مباشرة ، يتم تمرير المسحة على السطح بالكامل ، دون ترك أي مكان دون مساس ، ثم يتم تدوير اللوحة قليلاً ويتم زرعها مرة أخرى. تتكرر العملية مرتين أخريين.

اتركه لمدة 10 دقائق ثم أدخل أقراص المضادات الحيوية بملقط معقم ، تاركًا مسافة 24 ملم بينهما. بعد وضع كل قرص على أجار ، اضغط على كل قرص برفق بالملقط للتأكد من أنها تلتصق جيدًا.

بمجرد الانتهاء من العملية ، يتم قلب اللوحة واحتضانها عند 35-37 درجة مئوية في الهوائيات لمدة 16 إلى 18 ساعة. إذا كانت كائنًا دقيقًا متطلبًا ، فقد تستحق المايكرويروفيليا وإذا كان المضاد الحيوي يحتوي على أقراص أوكساسيلين ، فيجب قراءته بعد 24 ساعة.

تستخدم المسطرة لقياس قطر كل هالة. يجب تسجيل النتائج بالملليمتر. بعد ذلك ، ترتبط القيم التي تم الحصول عليها بجداول نقاط القطع المنشورة بواسطة دليل CLSI الحالي.

قياس هالة التثبيط. المصدر: USCDCP، Pixnio.com

أبلغ عن حساس (S) أو متوسط ​​(I) أو مقاوم (R) ، حسب الحالة.

يتم اختيار المضادات الحيوية وفقًا للكائن الدقيق المعزول ونوع العدوى التي ينتجها.

في بعض الأحيان يجب أن يوضع في الاعتبار الوضع الاستراتيجي للمضادات الحيوية للكشف عن الأنماط المظهرية للمقاومة.

وضع القرص الاستراتيجي على أجار مولر هينتون

بالنسبة للبكتيريا المعوية ، يجب وضع قرص حمض الكلافولانيك مقابل الجيل الثالث والرابع من السيفالوسبورينات. يشير التوسيع على شكل بيضة إلى أن السلالة هي منتج لبيتا لاكتامازات واسعة الطيف (ESBL). هذا يعني أنه لا ينبغي معالجة المريض بأي من السيفالوسبورينات.

التعبير الظاهري عن إنتاج بيتا لاكتاماز (ESBL) ممتد الطيف في سلالة الإشريكية القولونية. المصدر: صورة التقطها المؤلف ماجستير. مارييلسا جيل

في المكورات العنقودية من المهم وضع قرص الاريثروميسين أو أزيثروميسين أمام قرص الكليندامايسين (اختبار D).

تشير الهالة المقاومة في الإريثروميسين والتسطيح في هالة الكليندامايسين إلى أن السلالة تمتلك مقاومة إجهاد محفزة للكلندامايسين (ICR). هذا يعني أن علاج الكليندامايسين لن يكون فعالاً.

للبحث عن سلالات AMP C المحفزة في Enterobacteriaceae وبعض قضبان سالبة الجرام غير المخمرة ، تواجه أقراص tazobactan ceftazidime أو cefoxitin أو piperacillin قرص imipenem ، على مسافة 27 مم.

تشير الهالة المسطحة في أحد الأقراص التي تواجه imipenem إلى وجود AMP C.

للبحث عن مركب AMP C ، يتم مواجهة قرص 500 ميكروغرام من كلوكساسيللين مع سيفتازيديم (30 ميكروغرام) وسيفوتاكسيم (30 ميكروغرام) ، على مسافة 25 ملم. تشير الهالة المتسعة في أي من السيفالوسبورينات إلى الإيجابية.

يمكن أيضًا استبدال قرص cloxacillin بقرص 9 مم من ورق الترشيح Whatman No. 6 المشبع بحمض فينيل البوريك (400 ميكروغرام) بمسافة 18 مم. يتم تفسيره مثل السابق.

أخيرًا ، للتحقق من إنتاج metallobetalactamases خاصة في Pseudomonas aeruginosa ، يتم استخدام قرص مشبع بـ 10 ميكرولتر من حمض إيثيلين ديامينيترا أسيتيك (EDTA 750 ميكروغرام) وحمض الثيوجليكوليك (SMA 300 ميكروغرام) ، والذي يواجه أقراص إيميبينيم وميروبينيم ، على مسافة 15 ملم.

يكون الاختبار إيجابيًا إذا كان هناك اتساع في هالات الإيميبينيم أو الميروبينيم باتجاه قرص EDTA / SMA. يجب تأكيد هذه النتيجة من خلال اختبار Hodge المعدل.

تتكون هذه الطريقة من تلقيح سلالة الإشريكية القولونية ATCC 25922 على صفيحة مولر هينتون. يتم وضع قرص إيميبينيم في وسط اللوحة ثم يتم عمل خط من القرص إلى المحيط مع سلالة P. aeruginosa المشتبه بها. يمكن اختبار ما يصل إلى 4 سلالات لكل لوحة.

سيكون الاختبار إيجابيًا إذا كانت هناك منطقة تشويه لهالة imipenem حول علامة التمدد.

أسباب النتائج الخاطئة

- يمكن أن تنتج أقراص المضادات الحيوية المحفوظة بشكل سيئ مقاومة خاطئة. على سبيل المثال ، يكون قرص oxacillin شديد التأثر بالتغيرات في درجة الحرارة.

- ينتج الرقم الهيدروجيني للوسط الموضح أدناه (الحمضي) هالات أصغر في الأمينوغليكوزيدات والماكروليد (خطر حدوث مقاومة خاطئة) ، وهالات أكبر في البنسلين والتتراسيكلين والنوفوبيوسين (خطر الحساسية الزائفة).

- إذا كان الرقم الهيدروجيني أعلى مما هو محدد (قلوي) فإن التأثيرات المذكورة أعلاه تنعكس.

- الوسائط التي تحتوي على تركيزات عالية من الثايمين والثيميدين لها تأثير ، مما يقلل بشكل كبير من هالات تثبيط السلفوناميدات وتريميثوبريم.

- تنتج التركيزات العالية من الكالسيوم والمغنيسيوم مقاومة خاطئة للأمينوغليكوزيدات والبوليميكسين ب والتتراسيكلين ضد سلالات الزائفة الزنجارية.

- تنتج التركيزات المنخفضة من الكالسيوم والمغنيسيوم حساسيات زائفة للأمينوغليكوزيدات والبوليميكسين ب والتتراسكلين ضد سلالات الزائفة الزنجارية.

- يؤثر وجود الزنك على نتائج أقراص الكاربابينيم (إيميبينيم ، ميروبينيم وإرتابينيم).

- سوف ينتج عن سماكة الوسط الذي يقل عن 3 مم نتائج حساسية خاطئة ، بينما ينتج عن السماكة فوق 5 مقاومة خاطئة.

- إن تعبئة الأقراص في المضاد الحيوي سيعطي هالات مشوهة ، لأن إفراز المضادات الحيوية يكون فورياً.

- لقاحات ضعيفة جدًا تؤثر على النتائج ، حيث لن يكون هناك نمو موحد أو متكدس في الأجار ، وهي حالة ضرورية لتكون قادرًا على قياس هالات التثبيط ، بالإضافة إلى حقيقة أن الهالات يمكن أن تعطي أكبر من الطبيعي.

- اللقاح المحمّل بشكل مفرط يمكن أن يعطي هالات أصغر من المعتاد.

- عدم احترام المسافة بين الأقراص يتسبب في تداخل هالة مع أخرى ولا يمكن قراءتها بشكل صحيح.

-Incubate مع CO ₂ زيادة حجم هالات من التتراسيكلين وميثيسيلين أقراص.

-الاحتضان عند درجات حرارة أقل من 35 درجة مئوية ينتج هالات أكبر.

- إضافة الدم يقلل من حجم هالة السلفا.

تحديد

إن حساسية المضاد الحيوي الذي يظهر في المضاد الحيوي ضد الكائنات الحية الدقيقة (في المختبر) لا يضمن أنه سيعمل في الجسم الحي.

سؤال وجواب

لمعرفة ما إذا كان الوسيط يحتوي على كمية كافية من الثايمين ، يجب زراعة سلالة من Enterococcus faecalis ATCC 29212 ويجب اختبار القابلية لتريميثوبريم سلفاميثوكسازول (SXT) ، ويجب أن يعطي هالة تساوي أو> 20 مم لتكون مرضية.

المراجع

1. "مولر هينتون أجار". ويكيبيديا، الموسوعة الحرة. 16 نوفمبر 2018، 12:23 UTC. 27 يناير 2019، 04:22
2. Forbes B، Sahm D، Weissfeld A. (2009). بيلي وسكوت التشخيص الميكروبيولوجي. 12 إد. التحرير Panamericana SA Argentina.
3. Cona E. شروط لدراسة حساسية جيدة عن طريق اختبار انتشار أجار. القس تشيل إنفيكت ، 2002 ؛ 19 (2): 77-81
4. مختبر ديفكو فرانسيسكو سوريا ملغيزو. أجار مولر هينتون مع 5٪ دم غنم. 2009 متاح على:
5. مختبر BD Müeller Hinton II Agar. 2017 متاح على:.bd.com
6. مختبرات بريتانيا. مولر هينتون أجار. 2015 متاح على: britanialab.com
7. Koneman E ، Allen S ، Janda W ، Schreckenberger P ، Winn W. (2004). التشخيص الميكروبيولوجي. 5th إد. التحرير Panamericana SA Argentina.
8. Martínez-Rojas D. إنزيم betalactamases من النوع AmpC: العموميات وطرق الكشف عن النمط الظاهري. القس س. فين. ميكروبيول. 2009 ؛ 29 (2): 78-83. متاح على: scielo.org.
9. Perozo A، Castellano M، Ling E، Arraiz N. الكشف المظهري عن metallobetalactamases في العزلات السريرية من Pseudomonas aeruginosa. كاسميرا ، 2012 ؛ 40 (2): 113-121. متاح على: scielo.org.