BIURET: الأساس المنطقي ، الكواشف ، الإجراء ، الاستخدامات - مادة الاحياء - 2026

و البيوريت هو كاشف المستخدمة لتحديد بروتين سلسلة طويلة وقصيرة السلسلة. يستخدم بشكل خاص في مجال الكيمياء التحليلية وتحليل البول لفحص تركيز البروتينات الكلية في المصل والبلازما والبول.

يمكن زيادة أو تقليل قيم البروتين في بعض الأمراض. تحدث أعراض نقص بروتينات الدم عادة في مرضى الكلى ، والمرضى الذين يعانون من سوء التغذية ، والمرضى الذين يعانون من التهابات مزمنة.

يتكون التركيب الكيميائي للمجمع في اختبار Biuret الإيجابي للتفاعل. المصدر: Yikrazuul / flickr

بينما لوحظ فرط بروتين الدم في أمراض مثل الورم النقوي المتعدد ، الذئبة الحمامية الجهازية ، التهاب الشغاف الجرثومي ، التهاب السحايا الجرثومي ، غلوبولين الدم في والدنستروم ، من بين أمور أخرى.

من ناحية أخرى ، فإن وجود البروتين في البول يرجع إلى ترشيح الألبومين عن طريق الكلى. هذا هو السلوك المرضي الذي يجب دراسته.

بهذا المعنى ، يعتبر Biuret مفيدًا جدًا ، لأنه يسمح بتحديد وجود البروتينات في المصل والبلازما والبول ، من بين العديد من العينات الأخرى.

حتى Biuret يمكن استخدامه للتحقيق في وجود وتركيز البروتينات في عينات غير مكتشفة أو عينات ذات تركيب غير معروف. لذلك ، يتم استخدامه على نطاق واسع في مجال البحث.

يعتمد اختبار Biuret على اكتشاف روابط الببتيد. يتم الاختبار في وسط قلوي. يجب أن تحتوي العينة على اثنين على الأقل من روابط الببتيد لتكوين مركب بنفسجي-أرجواني. يتكون المجمع من اتحاد الروابط وأيون النحاس.

أساس

يتكون كاشف Biuret من هيدروكسيد البوتاسيوم وكبريتات النحاس وطرطرات الصوديوم والبوتاسيوم. يستخدم هيدروكسيد الصوديوم في قلونة الوسط ، لأن هذه الحالة ضرورية لحدوث التفاعل.

المواد التي تتفاعل مع البروتينات هي كبريتات النحاسي ، في حين أن طرطرات الصوديوم لها وظيفة عدم السماح بتكوين هيدروكسيد النحاس ، والذي يميل إلى الترسب والتداخل مع التفاعل.

إذا تم العثور على مواد بها روابط ببتيدية (عديد ببتيدات أو بروتينات) في العينة ، فسيكون الاختبار إيجابيًا.

يتم تفسير التفاعل على أنه إيجابي عندما يتحول المحلول إلى اللون الأرجواني. يتم إنتاج اللون من خلال تكوين معقد بين اثنين على الأقل من روابط الببتيد التي تحتوي على مجموعة CO-NH والكاتيونات النحاسية.

يمكن تكوين المركب البنفسجي بطريقتين: الأولى عن طريق فقدان البروتونات من مجموعات الأميد التي ترتبط بالمعدن (نزع الكرونوتيون) ، والأخرى عن طريق اتحاد إلكترونات الأكسجين والنيتروجين التي تكون حرة ومرتبطة بالنحاس.

يمكن أن يختلف هذا التفاعل في شدته ولونه حسب نوع البروتين.

يمكن إجراء الاختبار نوعيا أو كميا. في الشكل النوعي يتم الإبلاغ عنها على أنها إيجابية أو سلبية. بينما في الشكل الكمي ، يمكن قياس التركيز بطريقة القياس الطيفي.

تتم قراءة التفاعل بين 540-560 نانومتر. كثافة اللون تتناسب طرديا مع تركيز روابط الببتيد في العينة.

الكواشف

-20٪ هيدروكسيد الصوديوم (هيدروكسيد الصوديوم)

-بنتاهيدراتي كبريتات الكوب 1٪ (CuSO _4. 5H ₂ O)

- طرطرات الصوديوم والبوتاسيوم المخلوط رباعي هيدرات (KNaC ₄ H ₄ O ₆ · 4H ₂ O)

استقرار كاشف Biuret

- يجب حفظها في الثلاجة.

معالجة

تقنية

- ضع 100 ميكرولتر من العينة أو المعيار لتحليلها في أنبوب الاختبار.

- إضافة 2 مل من هيدروكسيد الصوديوم.

- امزج جيداً.

- إضافة 5 مل من كاشف Biuret.

- تخلط وتترك لترتاح لمدة 25 دقيقة في درجة حرارة الغرفة وتغطى وتحمي من الضوء.

- مراقبة تكوين اللون من عدمه وقياس الطيف الضوئي.

منحنى المعايرة

يمكن استخدام الألبومين المصل البقري كمعيار لأداء منحنى المعايرة. يتم تحضير تركيزات مختلفة منه. على سبيل المثال 25 و 50 و 75 و 100 و 125 و 150٪.

يتم إعداد التفاعل بكل هذه التركيزات المعروفة ويتم قراءة الامتصاص بطول موجة يبلغ 540 نانومتر. مع بيانات التركيزات المعروفة وقراءات الامتصاص يتم عمل منحنى المعايرة.

في كل تحديد أو دفعة من العينات المعالجة ، يوصى بتركيب معيار. يمكن استخدام ألبومين مصل البقر 0.1-2 مجم / مل كمعيار معايرة.

يتم إجراء القياسات على مقياس طيف ضوئي عند 540 نانومتر.

يتم استيفاء الخطية حتى تركيز 12 جم / ديسيلتر.

التشوش

المواد التي تتداخل مع اختبار Biuret

على الرغم من أنه ليس متكررًا جدًا ، إلا أنه يجب ملاحظة أن بعض المواد قد تتداخل أثناء تنفيذ هذا الاختبار. على سبيل المثال ، يمكن أن يمنع وجود الأمونيا تكوين اللون.

وبالمثل ، يمكن أن تمتص مواد أخرى بنفس الطول الموجي ، مثل أصباغ معينة.

من ناحية أخرى ، يمكن أن يحدث التداخل عندما تشكل مادة أخرى غير الرابطة الببتيدية معقدًا مع الملح النحاسي. مثال: بعض الكربوهيدرات وبعض الدهون.

في حالة أن العينة المراد تحليلها تقدم نوعًا من الرواسب ، فيجب ترشيحها أو طردها قبل إجراء الاختبار.

المواد التي لا تتداخل مع اختبار Biuret

لا يتأثر الاختبار بوجود:

- البيليروبين حتى تركيز 20 مجم / ديسيلتر.

- الهيموجلوبين حتى تركيز 750 مجم / ديسيلتر.

- ديكستران يصل إلى تركيز 30 جم / لتر.

- الدهون الثلاثية حتى تركيز 4000 مجم / ديسيلتر.

مميزات

- إنها طريقة بسيطة للتنفيذ.

-إنه اختبار اقتصادي.

- يتميز بخصوصية عالية للبروتينات.

-تدخل قليل.

سلبيات

لديها حساسية ضعيفة للكشف عن كميات منخفضة من البروتين. يؤكد العمل الذي قام به فوينتيس وآخرون أن طريقة اختبار Biuret لها حد اكتشاف يبلغ 1 مجم / مل من البروتين وحد أقصى قدره 3 مجم / مل.

ومع ذلك ، تشير الأبحاث الأخرى التي أجريت في جامعة أمازون إلى قيم أقل بكثير. حد الكشف الذي أبلغت عنه الدراسة هو 0.020 مجم / مل والحد الكمي هو 1.33 مجم / مل.

التطبيقات

يستخدم كاشف أو اختبار Biuret لتحديد البروتينات في العينات السريرية وغير السريرية في المعامل الروتينية والبحثية.

الأمراض التي تحدث مع زيادة أو نقصان

من المهم في العديد من الأمراض تحديد تركيز البروتينات الكلية في العينات السريرية ، والتي قد تكون مرتفعة أو منخفضة.

ترتفع في:

-ورم نقيي متعدد،

-الذئبة الحمامية الجهازية،

- التهاب الشغاف الجرثومي ،

-التهاب السحايا الجرثومي،

غلوبولين الدم في والدنستروم ، من بين أمور أخرى.

ينخفض ​​في:

-قصور كلوي،

- الأشخاص الذين يعانون من درجات حادة من سوء التغذية ،

- مرضى التهابات مزمنة من بين آخرين.

العينات السريرية

أكثر العينات السريرية شيوعًا هي المصل والبلازما والبول. القيمة الطبيعية للبروتينات في مصل الدم أو البلازما هي 6.0-8.8 جرام / ديسيلتر.

لا يتجاوز تركيز البروتينات في البول عند البالغين 150 مجم / 24 ساعة.

بروتين البول / قيمة نسبة الكرياتينين في البول طبيعية

الرضع: <0.50 مجم

للأطفال بعمر سنتين فما فوق: الفهرس: 0.20 ملغ

الكبار: <0.2 ملغ

العينات غير السريرية

يمكن استخدام تفاعل Biuret مع أنواع عديدة من العينات غير السريرية ، مثل منتجات الألبان أو مضادات السموم أو أي مادة غير معروفة تريد التحقق من وجود البروتينات فيها.

المراجع

1. Vázquez J، Guerra L، Quintana J، Ramírez J، Fernando Ry Vázquez Y. (2014). الخصائص الفيزيائية والكيميائية ومحتوى البروتين من المستخلصات السائلة لمحار المنغروف (Crassostrearizophorae). المجلة الكوبية للكيمياء ، 26 (1) ، 66-74. تم الاسترجاع في 26 يونيو 2019 ، من http: //scielo.sld
2. Chaparro S، Lara A، Sandoval A، Sosa S، Martínez J، Gil J. التوصيف الوظيفي لوز بذور المانجو (Mangifera indica L.) Revista Ciencia en Desarrollo. 2015 ؛ 6 (1): 67-75
3. "بيوريت". ويكيبيديا، الموسوعة الحرة. 19 حزيران (يونيو) 2019، 16:37 UTC. 26 يونيو 2019، 22:18
4. فوينتيس إف ، كيسبي الأول ، غارسيا ج.التوحيد القياسي لطريقة Biuret لتحديد إجمالي البروتينات في مصل مضاد متعدد التكافؤ ينتج في المركز الوطني للمنتجات البيولوجية INS. بول - إنست ناك سالود 2012 ؛ 18 (11-12). متاح على: repositorio.ins.gob.pe
5. وينر لابوراتوريز. مجموع البروتينات. طريقة القياس اللوني لتقدير البروتينات الكلية في مصل الدم والبلازما. متاح على: wiener-lab.com.ar