غرفة نويباور: التاريخ ، الخصائص ، الاستخدامات - مادة الاحياء - 2026

و نويباور الغرفة ، مقياس الهيموغلوبين أو عدادة الكريات، هي صك مختبر تتكون من لوحة خاصة الزجاج السميك. تستخدم هذه الكاميرا في عد بعض أنواع الخلايا مثل خلايا الدم الحمراء وخلايا الدم البيضاء والصفائح الدموية ، على الرغم من إمكانية استخدامها لعد الجراثيم والحيوانات المنوية والطفيليات وما إلى ذلك.

يقدم بعض الخصائص الغريبة للغاية ، حيث يتكون من 3 مناطق ، منطقة مركزية للعد ومنطقتين دعم. تحتوي كل غرفة على منطقتين للعد أو شعيرات متصالبة ، واحدة في الأعلى والأخرى في الأسفل.

غرفة نويباور. المصدر: SantiBadia. تحرير الصورة.

هذه لديها أقسام متعددة في شكل شبكة. مناطق العد هي المربعات المتوسطة الموجودة في الزوايا الأربع لكلا الجراتيكولز ، بالإضافة إلى المربع المركزي.

يجب أن يتم تجميع الكاميرا بعناية فائقة ، حيث تؤثر أي تفاصيل على عدد الخلايا. هناك العديد من الأخطاء التي يمكن ارتكابها ، ولكن في حالة حدوث أي منها ، يجب فك الكاميرا وتنظيفها وإعادة تركيبها. تشمل الأخطاء الرئيسية ما يلي:

فائض الغرفة أو نقص الملء ، وترك الغرفة جافة ، ومحاولة إزالة السوائل الزائدة بشاش ، وإمالة الغرفة عند نقلها ، وملء غرفة متسخة أو مبللة ، وعدم خلط المخفف أو العينة جيدًا ، من بين أشياء أخرى. كل هذه الأخطاء ستؤدي إلى قيمة غير حقيقية.

التاريخ

حجرة Neubauer هي أداة دقيقة ، وعملية التصنيع تخضع لرقابة صارمة على الجودة. تم إنشاؤه للعد الدقيق للجسيمات أو العناصر المكونة لكل مم ³ ، مثل الخلايا في السوائل المختلفة. تم نحت الرسم الدقيق بقلم رصاص ماسي.

خصائص غرفة نويباور

الحجرة بأكملها بحجم الشريحة العادية بحيث يمكن وضعها على مرحلة المجهر.

تتكون الغرفة من ثلاثة أسطح مركزية مستطيلة (أ ، ب ، ج). في المنطقة "ب" تقع منطقة R أو منطقة العد ، وتسمى أيضًا الشبكة. واحدة على كل جانب من الكاميرا ، مفصولة بالمنطقة "د".

رسم تخطيطي لغرفة نيوباور. المصدر: دليل عملي لأمراض الدم. كلية التحليل الحيوي بجامعة كارابوبو ، فنزويلا.

كل غراتيكول هي منطقة مصقولة تحتوي على منطقة العد محفورة. يتكون من مربع بمساحة 9 مم ² وينقسم داخليًا إلى 9 مربعات بمساحة 1 مم ² لكل منها. تنقسم مربعات الزاوية الأربعة إلى 16 مربعًا أصغر (مساحة 0.0625 مم ²).

تتشكل هذه الشبكات من خلال سلسلة من خطوط المليمتر التي تتقاطع مع بعضها البعض ، وتشكل شبكات رسومية تمامًا ومحددة بالقياسات التي تم تحديدها. تم نقش هذه الخطوط برأس ماسي.

تحسين شبكة Neubauer. المصدر: دليل عملي لأمراض الدم من كلية التحليل الحيوي بجامعة كارابوبو ، فنزويلا.

الجوانب الأربعة تتوافق مع منطقة العد. في هذه الجوانب أو الزوايا يتم حساب غالبية الخلايا (خلايا الدم الحمراء والكريات البيض) ، بينما يتم حساب الصفائح الدموية في المنطقة المركزية.

تحتوي المنطقة المركزية على المزيد من التقسيمات ، فهي تتكون من مربع 1 مم ² مقسم إلى 25 مربعًا مساحة كل منها 0.04 مم ². وتنقسم هذه بدورها إلى 16 شبكة بمساحة 0.0025 مم ².

وصف شبكة Neubauer المحسنة. أ) مربع الزوايا ، ب) المربع المركزي ، ج) مربع متوسط ​​المربع المركزي. المصدر: دليل عملي لأمراض الدم من كلية التحليل الحيوي بجامعة كارابوبو ، فنزويلا.

تعمل المنطقة "أ" و "ج" كدعم لوضع جسم غطاء خاص يسمى شريحة قياس الدم أو غطاء مقياس الدم.

يبلغ الارتفاع بين الرقاقة وسطح العد 0.1 مم. تعد قياسات مساحة سطح مربعات العد ، بالإضافة إلى ارتفاع الحجرة وتخفيف العينة ، بيانات ضرورية لإجراء الحسابات النهائية.

التطبيقات

يتم استخدامه لعد الخلايا. إنه مفيد بشكل خاص في مجال أمراض الدم ، لأنه يتيح عد سلاسل خلايا الدم الثلاثة ؛ أي خلايا الدم الحمراء وخلايا الدم البيضاء والصفائح الدموية.

ومع ذلك ، يمكن استخدامه في مناطق أخرى ، على سبيل المثال لحساب عدد الحيوانات المنوية أو الجراثيم أو البكتيريا أو العناصر الأخرى ذات الأهمية اعتمادًا على نوع العينة.

كيف تستعمل؟

إعداد عينة

لإجراء تعداد الخلايا ، يبدأ عمومًا من تخفيف سابق. مثال: لعد خلايا الدم البيضاء ، قم بتحضير مخفف 1:20 مع سائل ترك. يتم خلط التخفيف جيدًا قبل تحميل الماصة وتركيب غرفة Neubauer.

هناك أوقات يكون فيها التخفيف 1:20 غير كافٍ للحساب. على سبيل المثال ، في المرضى الذين يعانون من أنواع معينة من اللوكيميا المزمنة. في هذه الحالات ، يجب إجراء تخفيفات أعلى مثل 1: 100.

من ناحية أخرى ، إذا كان العدد منخفضًا جدًا ، كما هو الحال في قلة الكريات البيض الشديدة ، يمكن إجراء تخفيفات أصغر لتركيز العينة. مثال: يمكنك عمل تخفيف بنسبة 1:10.

التغييرات التي تم إجراؤها تؤثر على الحسابات.

تركيب غرفة Neubauer

يتم تجميع غرفة Neubauer عن طريق وضع شريحة قياس الدم في المنطقة المركزية. يجب أن يكون كلاهما نظيفًا وجافًا جدًا. لوضع الصفيحة ، يتم التقاطها من الحواف وإسقاطها برفق على الكاميرا.

يتم تعبئتها بوضع طرف ماصة أو ماصة Thoma التلقائية بزاوية 35 درجة عند حافة منطقة التحميل. يتم تفريغ السائل بسلاسة وتمتلئ منطقة التحميل بواسطة الشعيرات الدموية. يتم ذلك من كلا الجانبين لتحميل الشعيرات المتصالبة.

لا ينبغي زيادة التحميل على إعادة النشر ولا ينبغي حرمانهم من السوائل. يجب أن يكون الحمل دقيقًا. من المهم أن تتم الحشوة بشكل متجانس ، أي يجب ألا تكون هناك فقاعات.

بمجرد تجميع الحجرة ، تُترك للراحة لمدة دقيقتين بحيث تسقط الخلايا إلى الأسفل ويكون تصورها وعدها أسهل.

بعد وقت الراحة ، يتم تثبيته على مرحلة المجهر الضوئي للمراقبة. أولاً ، يتم التركيز على هدف 10x وإذا لزم الأمر ، فإنه يذهب إلى 40X.

لتحسين تصوره ، يتم تقليل مرور الضوء من المجهر. للقيام بذلك ، يتم خفض المكثف وإغلاق الحجاب الحاجز قليلاً.

عد

بالنسبة لتعداد خلايا الدم البيضاء أو الكريات البيض ، يجب حساب السطح الكامل لمربعات الزاوية الوسيطة الأربعة والمربع المركزي لكل شبكة شبكية.

يبدأ العد في المربع الموجود في الزاوية اليسرى العليا. تبدأ من المربع الأول في الصف الأول ، أي من اليسار إلى اليمين حتى تصل إلى الطرف المقابل.

هناك تنزل لأسفل وتنظر للخلف من اليمين إلى اليسار حتى تصل إلى الطرف الآخر ، وهكذا ، يتم حساب الخلايا داخل كل شبكة بطريقة متعرجة. يتم حساب 16 شبكة لكل مربع متوسط.

لتجنب حساب خلية مرتين ، توجد قواعد حول الخلايا الموجودة على الخطوط الحدودية لكل شبكة. يتم حساب الخلايا الموجودة على الأسطر اليسرى والعلوية ويتم تجاهل الخلايا الموجودة على الأسطر اليمنى والسفلى.

يجب أن يكون عداد الخلايا اليدوي متاحًا بحيث يقوم المشغل بالضغط على مفتاح الجهاز عدة مرات كلما لوحظت خلايا. باستخدام العداد ، يمكن للمشغل العد دون الحاجة إلى البحث من الحقل المجهري. في نهاية العد ، سترى العدد الإجمالي للخلايا التي تم عدها.

العمليات الحسابية

بالنسبة للحسابات ، يمكنك المتابعة بعدة طرق. يمكن عد غراتيكول واحد أو يمكن حساب كليهما ويتم حساب متوسط ​​كلاهما. في هاتين الحالتين ، يجب ضرب الخلايا المحسوبة بعامل ، والذي سيكون في هذه الحالة 40. وبالتالي ^{يتم الحصول على} العدد الإجمالي لكل مم ³.

ولكن إذا تم حساب الشبكتين ولم يتم أخذ المتوسط ​​، فيجب ضربه بعامل مختلف ، في هذه الحالة في 20.

-عامل الضرب

إليك كيفية حساب عامل الضرب.

يتم أخذ البيانات المختلفة في الاعتبار للحسابات ، بما في ذلك عيار التخفيف وارتفاع الغرفة والمساحة المحسوبة.

تخفيف

التخفيف القياسي المستخدم هو 1:20 لعدد الكريات البيض.

ارتفاع الغرفة

يبلغ الارتفاع بين الحجرة وصفيحة خلايا الدم 0.1 ملم.

منطقة عد

إذا تم حساب 5 مربعات بمساحة ¹ مم ² ، فهذا يعني أن إجمالي مساحة العد هي 5 مم ². يجب مضاعفة هذه البيانات بارتفاع الغرفة للحصول على الحجم الإجمالي المحسوب. أي 5 مم ² × 0.1 مم = 0.5 مم ³.

الصيغ والحسابات

مع البيانات التي لدينا يقال:

إذا كان في 0.5 مم ³ - هناك --- عدد الخلايا المحسوبة

في 1 مم ³ - سيكون هناك - X n ° من الخلايا

X عدد الخلايا = (عدد الخلايا المحسوبة × 1) / 0.5 مم ³

ولكن يجب أيضًا مراعاة التخفيف. لذلك ، تكون الصيغة كما يلي:

(عدد الخلايا المحسوبة × 1) × 20 / 0.5 مم ³

أخيرًا ، للتلخيص ، يمكن ضرب عدد الخلايا المحسوبة بـ 40. وبالتالي ، يتم الحصول على قيمة الكريات البيض لكل مم ³.

إذا تم حساب القصتين ، فسيتم تغيير بيانات المنطقة المحسوبة ، والتي ستكون في هذه الحالة 10 مربعات ، أي 10 مم ². ويبلغ إجمالي حجم العد 1 مم 3. ستكون الصيغة:

(عدد الخلايا المحسوبة × 1) × 20/1 مم ³

لذلك ، في هذه الحالة ، سيكون عامل الضرب هو 20.

اخطاء

- إذا تم تجاوز أو تجاوز السائل عند تحميل الكاميرا ، سيختلف ارتفاع الكاميرا. ينتج عن هذا أن العد أعلى من الشيء الحقيقي. إذا حاولت إزالة الفائض بالشاش أو القطن ، فهذا خطأ كبير. سيؤدي هذا الإجراء إلى تركيز الخلايا وزيادة العد.

-إذا تم تحميله بشكل سيئ ، فسيكون العدد أقل من الحقيقي.

- إذا تم تركيب الكاميرا وتركها لتجف ، فلن يكون من الممكن العد لأنها ستعطي نتائج خاطئة.

- إذا لم يتم خلط العينة المخففة جيدًا قبل تحميل الغرفة ، فهناك خطر حدوث خطأ في القراءة ، حيث لن يتم توزيع الخلايا بشكل متجانس. لذلك ، سيكون هناك تركيز أقل أو أعلى للخلايا ، اعتمادًا على ما إذا كانت العينة مأخوذة من سطح السائل أو من قاع الأنبوب على التوالي.

- يقلل وجود الفقاعات من كمية السائل الذي يجب أن يدخل الشبكة ، مما يتداخل مع التصور الصحيح وتوزيع الخلايا. كل هذا يؤثر بشكل كبير على النتائج.

- أثناء العد ، لا تنظر من المجهر حتى يتم الانتهاء من كل مربع كبير لتجنب الضياع.

- أحد أسباب الخطأ هو إمالة الكاميرا بعد التركيب. لهذا السبب يجب رفع مرحلة المجهر بعناية.

توصية

إذا اكتشفت لأي سبب وجود خلل في ملء الحجرة ، فمن المستحسن تفكيك هذا المستحضر وتنظيف الغرفة وإعادة التجميع من نقطة الصفر.

توخى الحذر عند تنظيف الكاميرا لتجنب خدش الشعر المتقاطع. من ناحية أخرى ، يجب أن تدرك أن شريحة قياس الدم حساسة وهشة. التعامل غير السليم يمكن أن يكسرها.

قبل أن تبدأ في العد ، تأكد من توزيع الخلايا بشكل جيد. يحدث التوزيع غير المتكافئ للخلايا من سوء خلط العينات أو التخفيف. إذا حدث هذا ، يجب تكرار التجميع.

إحدى الطرق لمعرفة ما إذا كانت الخلايا موزعة جيدًا هي عن طريق مقارنة عدد كل مربع كبير ، لا ينبغي أن يختلف عدد الخلايا التي يحسبها كل مربع بشكل كبير من واحد إلى الآخر.

- إذا كان عدد خلايا الدم البيضاء أعلى من 50000 مم ^{3 ، فمن} المستحسن تكرار العد ، مما يؤدي إلى تخفيف أكبر.

-إذا قمت بتغيير التخفيف ، يجب إعادة حساب عامل الضرب ، لأن هذا يؤثر على الصيغة.

المراجع

1. Cardona-Maya W ، Berdugo J ، Cadavid A. مقارنة تركيز الحيوانات المنوية باستخدام غرفة Makler وغرفة Neubauer. أكتاس أورول إسب 200 ؛ 32 (4): 443-445. متوفر في: scielo.
2. غرفة نويباور. (2018 ، 27 مارس). ويكيبيديا، الموسوعة الحرة. تاريخ الاستشارة: 04:10 ، 23 يونيو 2019 من es.wikipedia.org
3. Meneses A ، Rojas L ، Sifontes S. تطبيق طريقة عد بديلة في غرفة Neubauer لتحديد تركيز Trichomonas vaginalis. القس شبل ميد تروب 2001 ؛ 53 (3): 180-8. متاح على: researchgate.net
4. Gómez-Pérez Roald E. تحليل مخطط الحيوانات المنوية. القس فنزويلا. إندوكرينول. متعب. 2007 ؛ 5 (2): 19-20. متوفر في: ve.scielo
5. دليل عملي لأمراض الدم لكلية التحليل الحيوي بجامعة كارابوبو. فنزويلا 1998