مرق إي سي: الأساس والتحضير والاستخدامات - مادة الاحياء - 2026

و EC مرق أو المرق كولاي هي انتقائية مستنبت السائل. هذا الوسيط موصى به من خلال الطرق القياسية لحساب القولونيات الكلية والبرازية ، باستخدام تقنية العدد الأكثر احتمالًا (MPN) في عينات الماء والغذاء ، حيث العامل الرئيسي المتورط هو Escherichia coli.

يتكون مرق EC من التريبتين واللاكتوز والأملاح الصفراوية وفوسفات ثنائي بوتاسيوم وفوسفات أحادي البوتاسيوم وكلوريد الصوديوم والماء. تم تصميم صيغته بشكل استراتيجي لدعم نمو القولونيات الكلية والبرازية ومنع تطور الكائنات الحية الدقيقة الأخرى المصاحبة.

تمثيل تصويري لتحضير مرق EC. المصدر: Pixabay.com

بكتيريا Escherichia coli هي بكتيريا القولون البرازية الرئيسية الموجودة باعتبارها ملوثًا في مصادر المياه والغذاء ، وهي سبب اضطرابات الجهاز الهضمي المهمة.

وتجدر الإشارة إلى أن هناك العديد من الأنماط المصلية للإشريكية القولونية. من بينها يمكن أن نذكر النزف المعوي (EHEC) ، المعوي (EIEC) ، الممرض المعوي (EPEC) ، الذيفان المعوي (ETEC) والتجميع المعوي (EAEC).

هذه الوسيلة لديها القدرة على السماح بتطويرها جميعًا ، ولكن دون أن تكون قادرة على تمييزها عن بعضها البعض. هذا يتطلب اختبارات إضافية.

الدراسة الميكروبيولوجية للماء والغذاء من خلال الرقم الأكثر احتمالا (MPN) للبحث عن القولونيات الكلية والبرازية هي بروتوكول يتكون من عدة مراحل ؛ المرحلة الافتراضية والمرحلة التأكيدية ومرحلة الإنجاز. مرق EC يستخدم في المرحلة التأكيدية.

أساس

مرق EC

يعتمد وسيط EC على توفير العناصر الغذائية اللازمة للتطور الأمثل للقولون الكلي والبرازي ، حيث يتم تضمين بكتيريا Escherichia coli.

يتم توفير هذه العناصر الغذائية عن طريق التريبتين ، كونها مصدر ممتاز للببتيدات والأحماض الأمينية. بالإضافة إلى ذلك ، يحتوي أيضًا على اللاكتوز ، وهو كربوهيدرات قابل للتخمير يوفر الطاقة ويسمح بإظهار ما إذا كانت البكتيريا تنتج الغاز.

من ناحية أخرى ، يحتوي الوسط على أملاح صفراوية توفر الصفة الانتقائية ، لأنها تمنع نمو الكائنات الدقيقة الموجبة للجرام التي قد تكون موجودة في العينة.

وبالمثل ، يعمل فوسفات ثنائي البوتاسيوم وفوسفات أحادي البوتاسيوم كنظام موازنة الأس الهيدروجيني. هذا النظام ضروري ، لأن اللاكتوز الموجود في المرق يميل إلى تحمض الوسط عندما يتم تخميره بواسطة الكائنات الحية الدقيقة ، ولكن يتم تعويض ذلك بواسطة أملاح الفوسفات.

لذلك ، فإن هذه العناصر ضرورية ، حيث يمكن أن تؤثر الحموضة غير المنضبطة على التطور السليم للكائنات الحية الدقيقة المطلوبة.

من جانبه ، يعمل كلوريد الصوديوم على استقرار الوسط تناضحيًا ، بينما الماء هو المذيب للمذابات الموجودة ويوفر الاتساق السائل للوسط.

مرق EC المعدل من Novobiocin

ابتكر Okrend and Rose مجموعة متنوعة من مرق EC ، تسمى مرق EC المعدل من novobiocin. يتكون التعديل من تقليل تركيز أملاح الصفراء وإضافة 20 مجم / ديسيلتر من نوفوبيوسين.

يفضل هذا التعديل استعادة سلالات الإشريكية القولونية النزفية المعوية (O157: H7).

هذا النمط المصلي البكتيري يسبب التهاب القولون النزفي الشديد الذي يمكن أن يؤدي إلى متلازمة انحلال الدم اليوريمي (HUS) ؛ والذي بدوره يمكن أن يؤدي إلى فشل كلوي حاد ، مع معدل وفيات مرتفع يمكن أن يصل إلى 50٪ عند كبار السن.

بسبب المراضة والوفيات التي تسببها هذه البكتيريا سنويًا بسبب استهلاك الطعام الملوث ، توصي وزارة الزراعة الأمريكية (USDA) بشدة باستخدام هذه الوسيلة.

تجهيز

مرق EC

تزن 37.4 جم من الوسط المجفف وتذوب في 1 لتر من الماء المقطر. يجب ترك الخليط لمدة 5 دقائق. بعد ذلك ، في مصدر الحرارة ، يتم الانتهاء من الذوبان عن طريق التقليب المتكرر.

بمجرد إذابته ، يتم توزيعه في أنابيب اختبار مسبقة التكييف بداخلها أنبوب دورهام. تعقيم في الأوتوكلاف عند 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.

يجب أن يكون الأس الهيدروجيني للوسط 6.9 ± 0.2. لون الوسط المجفف بيج والوسط المحضر كهرماني فاتح.

تحفظ المرق في الثلاجة لحين الاستخدام. في وقت الاستخدام ، يجب أن يكون المرق في درجة حرارة الغرفة.

من ناحية أخرى ، يمكن أيضًا تحضير مرق EC بتركيز مزدوج.

مرق EC المعدل من Novobiocin

تزن 36.7 جم من الوسط المجفف وتذوب في 1 لتر من الماء. ما تبقى من التحضير هو نفسه كما هو موضح أعلاه.

استعمال

تحليل القولون الكلي والبرازي

يعتبر مرق EC مثاليًا للمرحلة التأكيدية لدراسة القولونيات بطريقة NMP ، سواء في عينات المياه ، وكذلك في المنتجات الصيدلانية والمواد الغذائية.

يجب إعادة زرع مرق اللاكتوز العكر والمنتج للغاز والذي تم الحصول عليه في المرحلة الافتراضية في 2 ٪ مرق أخضر زاهي ومرق EC.

بالنسبة للبكتيريا القولونية الكلية ، يتم تحضين مرق EC بشكل هوائي لمدة 24 إلى 48 ساعة عند 37 درجة مئوية ، وبالنسبة للقولون القولوني البرازي ، يتم تحضينها هوائيًا لمدة 24 إلى 48 ساعة عند 44 درجة مئوية.

في كلتا الحالتين يتم تفسيره على النحو التالي: تعتبر أنابيب العكارة مع إنتاج الغاز موجبة. إذا لم يتم إنتاج الغاز خلال 24 ساعة ، تستمر الحضانة لمدة تصل إلى 48 ساعة.

ينتقل مرق EC الإيجابي إلى مرحلة التأكيد الكاملة ، والتي تتكون من إعادة البذر على وسائط انتقائية مثل Mac Conkey agar أو EMB agar أو Endo agar.

إذا كان المرق المستخدم عبارة عن EC معدّل بـ novobiocin ، يوصى بإعادة زرع الأنابيب الإيجابية على أجار Mac Conkey مع السوربيتول.

سؤال وجواب

يجب مراقبة جودة كل دفعة من الوسائط المعدة. أولاً ، يجب تقييم عقم الوسيط. بهذا المعنى ، يتم تحضين مرق واحد أو اثنين بدون تلقيح في الهواء لمدة 24 ساعة عند 37 درجة مئوية. النتيجة المتوقعة هي مرق شفاف ، بدون عكارة أو تغير في اللون.

ثانيًا ، يجب تقييم نمو السلالات المعروفة ، لذلك يمكن استخدام البكتيريا التالية: Escherichia coli ، ATCC 8739 ، Escherichia coli ATCC 25922 ، Salmonella typhimurium ATCC 14028.

في جميع الحالات ، من المتوقع حدوث تطور جرثومي مرض ، مع ملاحظة مرق غائم مع إنتاج غاز للإشريكية القولونية وعدم وجود غاز للسالمونيلا.

السلالات الأخرى التي يمكن تضمينها في السيطرة هي: Staphylococcus aureus ATCC 25923 ، Enterococcus faecalis ATCC 29212. يجب منع هذه السلالات تمامًا.

التوصيات

-وضع أنابيب دورهام ضروري لدراسة القولونيات.

- توزع الوسيلة في أنابيب الاختبار قبل التعقيم وليس بعدها.

- لا تستخدم إذا كان الوسيط أقدم من 3 أشهر.

- لا تستخدم إذا لوحظ أي تغيير في الخصائص المعتادة للوسيط.

المراجع

1. مختبرات بريتانيا. متوسط ​​EC. 2015 متاح على: britanialab.com
2. الإشريكية القولونية النزفية المعوية. مركز الأمن الغذائي والصحة العامة. 2010 متوفر على: cfsph.iastate.edu
3. شركة نيوجين. وسط EC. متاح على: foodafety.neogen.com
4. نيوجين. نوفوبيوسين متوسط ​​EC المعدل. متاح على: foodafety.neogen.com
5. Jure M، Condorí S، Leotta G، Chinen I، Miliwebsky E، Allori C، Aulet O، de Castillo M. الكشف عن وعزل وتوصيف الإشريكية القولونية التي تنتج سم الشيغا من اللحم المفروم الطازج من الجزارين في مقاطعة كونسبسيون من توكومان. ميكروبيول القس Arg ؛ 2010 ، 42 (4): 284-287. متاح على: www.scielo.org.