و مرق اللاكتوز هو وسيلة للغير - انتقائية مستنبت السائلة تستخدم في المقام الأول على ما قبل التخصيب في عزل سلالات السالمونيلا من التحليل الميكروبيولوجي إلى الأطعمة المصنعة، ومنتجات الألبان أو الماء. هذا موصى به من قبل الهيئة الدولية للمواصفات الميكروبيولوجية للأغذية (ICMPF).
تحتوي الوسيلة على هضم إنزيمي للجيلاتين وخلاصة اللحوم واللاكتوز ، وهي مواد ضرورية لنمو البكتيريا. علاوة على ذلك ، يعتبر اللاكتوز من الكربوهيدرات القابلة للتخمير ، لذلك فإن بعض القولونيات قادرة على تكسيرها بإنتاج الغاز.
مرق اللبن مع التعكر. المصدر: صورة التقطها المؤلف ماجستير. مارييلسا جيل
لهذا السبب ، مرق اللاكتوز موصى به من قبل جمعية الصحة العامة الأمريكية (APHA) للدراسة الافتراضية للبكتيريا القولونية الكلية والبرازية ، مما يؤهلها كبديل ممتاز لاستبدال مرق تربتوز كبريتات لوريل في التقنية القياسية للأرقام الأكثر احتمالا (MPN).) ، تستخدم للتحليل الميكروبيولوجي للأغذية والحليب والمياه السطحية وعينات النفايات الجوفية والترفيهية والمنزلية والصناعية.
أساس
بالنسبة للتحليل الميكروبيولوجي لبعض العينات ، فإن خطوة ما قبل التخصيب ضرورية لتكون قادرًا على استعادة كائن دقيق معين قد يكون بكميات قليلة جدًا أو في ظروف غير مواتية تنتهك أو تقلل من قابليتها للحياة.
هذه هي حالة الأطعمة المجففة والمعالجة ، التي يحتمل أن تكون ملوثة ببكتيريا Salmonellas sp. في هذه الحالات ، إذا كانت البكتيريا موجودة ، فقد عانت من سوء المعاملة الفيزيائية والكيميائية أثناء عملية إنتاج المنتج.
بهذه الطريقة تتعرض الكائنات الدقيقة لعوامل ضارة مثل الجفاف ، والتعرض للمنتجات المثبطة أو السامة ، والتداخل الناتج عن وجود بكتيريا أخرى بكميات أكبر ، من بين أمور أخرى.
بهذا المعنى ، يكون لمرق اللاكتوز تأثير إصلاحي على الهياكل التالفة للكائن الحي ، مما يؤدي إلى تعافيها وتكاثرها ، بطريقة يمكن اكتشافها.
وبالمثل ، فإن مرق اللاكتوز لديه القدرة على تخفيف المواد المثبطة التي قد تؤثر على صلاحيتها ، مما يسمح بتطورها. بالإضافة إلى ذلك ، تعتبر التركيبة الغذائية لمرق اللاكتوز إستراتيجية لدعم نمو السالمونيلا sp على الكائنات الحية الدقيقة الأخرى.
لتحديد الهوية النهائية ، يجب أن تكون ثقافية فرعية لوسائل الإعلام الثقافية الأخرى.
من ناحية أخرى ، فإن تركيبة الوسط تجعل من الممكن أيضًا اكتشاف الكائنات الحية الدقيقة التي تخمر اللاكتوز والتي تنتج الغاز.
تجهيز
لتحضير لتر من مرق اللاكتوز ، يجب وزن 13 جرامًا من الوسط المجفف وتذويبه في 1000 مل من الماء المقطر.
للمساعدة في إذابة الوسط في الماء ، يمكن تسخين المحلول قليلاً ، لكن ليس كثيرًا.
بمجرد تجانس المحلول ، يتم تحضيره على النحو التالي: إذا كان المرق سيستخدم للبحث عن القولونيات ، يتم تحضير رف من أنابيب الاختبار ، حيث يتم إدخال أنبوب تخمير دورهام رأسًا على عقب.
يعتبر أنبوب دورهام أحد التفاصيل المهمة للغاية ، لأنه سيسمح باكتشاف تكوين الغاز ، وهي بيانات ذات قيمة كبيرة في البحث عن القولونيات.
بمجرد أن تصبح الأنابيب جاهزة ، يتم صرف 10 مل من مرق اللاكتوز فيها ، وهي كمية يجب أن تكون كافية لتغطية أنبوب دورهام بالكامل.
في حالة استخدام مرق اللاكتوز كمرق للتخصيب المسبق ، فليس من الضروري وضع أنبوب تخمير دورهام. في هذه الحالة ، مطلوب كمية أكبر من الوسط (225 مل) ، والتي سيتم تقديمها في زجاجات سعة 500 مل ، وفوهة واسعة وبغطاء لولبي مقاوم للحرارة.
بعد ذلك ، يتم تعقيم الأنابيب أو القوارير عند 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.
يجب أن يظل الوسيط عند درجة حموضة نهائية تبلغ 6.9 ± 0.2 عند 25 درجة مئوية.
تحفظ المرق في الثلاجة لحين الاستخدام.
قبل الاستخدام ، يجب إحضار المرق إلى درجة حرارة الغرفة.
من ناحية أخرى ، يمكن أيضًا تحضير مرق اللاكتوز بتركيز مزدوج.
تضيف بعض المعامل اللون الأرجواني البروموكريسول إلى مرق اللاكتوز كمؤشر للأس الهيدروجيني ، لإظهار الأنابيب التي حدث فيها تخمر اللاكتوز بسبب تغير اللون. في هذه الحالة ، يأخذ المرق لونًا أرجوانيًا وإذا كان هناك تخمر يتحول إلى اللون الأصفر.
التطبيقات
في مختبرات الأحياء الدقيقة ، يستخدم مرق اللاكتوز على نطاق واسع لأنه وسيلة غير مكلفة نسبيًا تقدم نتائج موثوقة وسريعة (24-48 ساعة).
يمكن استخدامه لتحليل القولونيات الكلية والبرازية في الطعام والماء أو كمرق التخصيب المسبق للسالمونيلا.
التخصيب المسبق
التخصيب المسبق هو خطوة قبل تخصيب العينة ، مما يحسن بشكل كبير من استعادة بكتيريا جنس السالمونيلا في الأطعمة المصنعة.
للقيام بذلك ، يتم بذر عينة الطعام الصلب (25 جرامًا) أو السائل (25 مل) في 225 مل من مرق اللاكتوز ، وتحتضن لمدة 24 إلى 48 ساعة. بعد ذلك ، سيتم تربيته في وسط مخصب مثل مرق السيستين السيلانيت أو مرق رباعي. ثم انتقل إلى وسائط XLD و SS الانتقائية.
تحليل القولون الكلي والبرازي
إنها وسيلة ممتازة كمؤشر على التلوث البرازي.
لهذا السبب ، يعتبر مرق اللاكتوز مثاليًا للمرحلة الافتراضية لدراسة القولون بطريقة الرقم الأكثر احتمالًا.
بالنسبة للعينات التي يشتبه في وجود كمية كبيرة من القولونيات فيها ، سيتم تلقيح كمية أصغر منها (1 مل) ، بينما بالنسبة للعينات التي يشتبه في وجود كمية أقل من القولونيات ، سيتم تلقيح حجم أكبر من العينات (10 مل).
للتحليل ، يتم عمل 10-1 ، 10-2 ، 10 -3 تخفيف ، وتشكيل بطارية من 3-5 أنابيب لكل تركيز مستخدم.
من كل تخفيف ، يتم زرع نفس الحجم في مرق اللاكتوز.
يتم تحضين الأنابيب لمدة 24 ساعة. يتم تحضين المرق السلبي لمدة 24 ساعة أخرى.
يتم تفسير النتائج من خلال ملاحظة خاصيتين: الأولى هي وجود أو عدم وجود التعكر ، وبما أن هذا الوسط لا يحتوي على مؤشر الأس الهيدروجيني ، فلن يكون هناك تغيير في اللون.
والثاني هو إنتاج الغاز أم لا. يتضح الغاز بسهولة في أنبوب دورهام من خلال ظهور فقاعات هواء واحدة أو أكثر بداخله.
تعتبر إيجابية إذا لوحظت كلتا الخاصيتين ، أي التعكر مع إنتاج الغاز. يجب إعادة بذر الأنابيب الإيجابية في وسط تأكيد (2٪ مرق أصفر لامع ومرق EC).
مراقبة جودة الوسيط
- عند تحضير الوسط ، من المهم ألا تنسى وضع أنابيب دورهامز إذا كان الغرض منها دراسة القولونيات.
- لا تسخن الوسط قبل التعقيم.
- يوزع في أنابيب الاختبار قبل التعقيم وليس بعده.
- لا تستخدم إذا كان الوسيط أقدم من 3 أشهر.
- لا تستخدمه إذا لاحظت أي تغيير في الخصائص المعتادة للوسيط.
- عند تحضير دفعة من مرق اللاكتوز ، اختبر جودتها عن طريق زرع سلالات معروفة مثل Escherichia coli و Enterobacter aerogenes و Citrobacter freundii و Klebsiella pneumoniae. إنها تنمو بشكل جيد للغاية ، مع إنتاج الغاز (تحكم إيجابي).
- يمكن أن تشمل أيضًا Pseudomonas aeruginosa أو Salmonella typhimurium أو Enterococcus faecalis ، والتي تنمو بشكل جيد ولكن بدون إنتاج الغاز (التحكم السلبي).
- وتجدر الإشارة إلى أن اللون الأصلي للوسط المجفف هو البيج وأن لون الوسط المحضر فاتح جدًا وأصفر شفاف. إذا لوحظ تغيير في اللون أو المظهر ، فقد يتدهور.
المراجع
- Acevedo R ، Severiche C ، Castillo M. البيولوجيا البيئية وعلم الأحياء الدقيقة. (2013) الطبعة الأولى. جامعة كارتاجيناس ، كولومبيا.
- كاماتشو أ ، جايلز إم ، أورتيغون أ ، بالاو إم ، سيرانو ب وفيلاسكيز أو. (2009). تقنيات التحليل الميكروبيولوجي للأغذية. الطبعة الثانية. كلية الكيمياء UNAM. المكسيك.
- مختبرات كوندا بروناديسا. 2017. مرق اللاكتوز مزدوج التركيز (فارم الأوروبي).
- Fernández-Rendón C، Barrera-Escorcia G. مقارنة بين تقنيات استخراج البكتيريا القولونية من رواسب بحيرة Xochimilco ، المكسيك. القس أرجنت. ميكروبيول. 2013 ؛ 45 (3): 180-184. متاح على: scielo.org.
- Sotomayor F و Villagra V و Cristaldo G و Silva L و Ibáñez L. تحديد الجودة الميكروبيولوجية لمياه الآبار الارتوازية في مقاطعات وسط وكورديليرا وإدارات بلدية العاصمة. التحقيق الفوري. علم. الصحة 2013 ؛ 11 (1): 5-14. متاح من: scielo.iics.