و مرق المالونات هو مستنبت السائل المستخدمة لاختبار تشخيصي (المالونات)، وتستخدم لتمييز بعض أجناس من عائلة المعوية. تم إنشاؤه بواسطة Leifson في عام 1933 وتم تعديله لاحقًا بواسطة Ewing ، الذي أضاف كمية صغيرة من مستخلص الدكستروز والخميرة إلى الصيغة الأصلية.
يتكون الوسط حاليًا من مستخلص الخميرة وكبريتات الأمونيوم وفوسفات ثنائي البوتاسيوم وفوسفات أحادي البوتاسيوم وكلوريد الصوديوم ومالونات الصوديوم وسكر العنب وأزرق بروموثيمول. يتم تضمين هذا الاختبار بشكل عام في بطارية التعريف البيوكيميائية لبكتيريا Enterobacteriaceae ، مما يساعد على التمييز بين أجناس وأنواع معينة.
التمثيل البياني لاختبار malonate. أ. اختبار سلبي ، ب (تحمض) اختبار سلبي ، ج (تحمض) اختبار إيجابي. المصدر: أنابيب ملونة publicdomainpictures.net
يعتمد اختبار malonate بشكل أساسي على قدرة بعض الكائنات الحية الدقيقة على استخدام مالونات الصوديوم كمصدر وحيد للكربون وكبريتات الأمونيوم كمصدر للنيتروجين.
عادة ما يكون اختبار malonate إيجابيًا في بعض أنواع Enterobacter و Klebsiella و Citrobacter genera. في حين أن معظم الأنواع من أجناس Escherichia و Salmonella و Shigella و Edwardsiella و Yersinia و Serratia و Morganella و Proteus و Providencia تعطي رد فعل سلبي.
أساس
يتكون اختبار malonate من إظهار تلك البكتيريا القادرة على استخدام مالونات الصوديوم كمصدر وحيد للكربون وكبريتات الأمونيوم كمصدر للنيتروجين.
معظم بكتيريا Enterobacteriaceae التي لا تستخدم malonate قادرة على النمو في هذا الوسط ، حيث تأخذ مستخلص الدكستروز والخميرة كمغذيات.
في هذه الحالة ، فإن أي محاولة لقلونة عن طريق استخدام البيبتون سوف يتم إبطالها من خلال إنتاج الأحماض الناتجة عن تخمير الدكستروز. وبالمثل ، يعمل فوسفات ثنائي البوتاسيوم وأحادي البوتاسيوم كمخزن ، مما يحافظ على درجة الحموضة عند 6.7.
لهذا السبب ، عندما يكون الاختبار سالبًا ، يظل المرق بنفس اللون الأصلي (الأخضر). في حالات نادرة ، قد يصبح الوسط حامضيًا بسبب تخمر الدكستروز ؛ بدون استخدام البيبتون ومؤشر الأس الهيدروجيني ، فإنه سيحول لون الوسط نحو اللون الأصفر. لكي يحدث هذا ، يجب أن ينخفض الرقم الهيدروجيني إلى 6.
ومع ذلك ، عندما يكون هذا الاختبار إيجابيًا ، يُقال أن الكائنات الحية الدقيقة تستخدم المالونات وكبريتات الأمونيوم كمصادر للكربون والنيتروجين على التوالي ، دون الاستفادة من المكونات الأخرى.
في هذه الحالة ، يصبح الوسط قلويًا بسبب إطلاق الصوديوم وما يترتب على ذلك من تكوين هيدروكسيد الصوديوم. بهذا المعنى ، فإن مؤشر الأس الهيدروجيني (أزرق البروموثيمول) يحول لون الوسط من الأخضر إلى الأزرق عندما يكون الرقم الهيدروجيني مساويًا أو أكبر من 7.6. يمكن أن يكون اللون الأزرق فاتحًا أو شديدًا (أزرق بروسي).
أخيرًا ، يحافظ كلوريد الصوديوم على الأسمولية للوسط والماء هو المخفف لجميع المكونات.
ترجمة
مرق نفس اللون (أخضر) - اختبار سلبي
مرق أصفر: اختبار سلبي
مرق فاتح أو أزرق غامق: الاختبار إيجابي
هناك نوع آخر يسمى مرق فينيل ألانين مالونات ، ويسمى أيضًا وسط شو وكلارك. في هذه الحالة ، يمكن تحليل اختبارين ، استخدام المالونات كمصدر للكربون وإنتاج حمض البيروفيك من فينيل ألانين.
تجهيز
مرق مالونات
يتم وزن عدد الجرامات المحدد في إدراج الشركة التجارية المختارة (قد يختلف من واحد إلى آخر). يتم تعليق الجرام الموزونة في لتر واحد من الماء المقطر. سخني قليلا حتى يذوب تماما. قم بتوزيع 3 مل من الوسط في أنبوب اختبار 13/100 بأغطية قطنية.
تعقيم في الأوتوكلاف عند 121 درجة مئوية لمدة 15 إلى 20 دقيقة.
تبرد قبل الاستخدام. إذا كنت لن تستخدم على الفور ، قم بتخزينها في الثلاجة حتى الاستخدام. اجلب المرق إلى درجة حرارة الغرفة قبل التلقيح.
يجب أن يكون الأس الهيدروجيني للوسط 6.7 ± 0.2. لون الوسيط المحضر أخضر زجاجة.
مرق فينيل ألانين مالونات
تزن 11 جم من الوسط المجفف وتذوب في 1 لتر من الماء المقطر. ما تبقى من التحضير هو نفسه كما هو موضح سابقًا.
يمكن أيضًا تحضيره بإضافة 2 جم / لتر من فينيل ألانين إلى وسط مرق malonate قبل تعقيمه.
استعمال
يتم استخدامه كجزء من مجموعة الاختبارات البيوكيميائية التي يتم تجميعها لتحديد البكتيريا من عائلة Enterobacteriaceae.
يساعد على التمييز بين:
- جنس Klebsiella و Enterobacter (+) من جنس Escherichia و Serratia (-).
- أنواع Salmonella enterica ssp arizonae و Salmonella enterica ssp salame و Salmonella enterica ssp diarizonae (+) ، من الأنواع Salmonella enterica ssp enterica (-).
- من جنس Klebsiella بشكل عام (+) من جنس Actinobacillus (-)
- من حين لآخر يمكن أن يساعد في التمييز بين الأجناس وأنواع البكتيريا التي لا تنتمي إلى عائلة Enterobacteriaceae ، مثل بين العصيات غير المخمرة سلبية الجرام Alcaligenes faecalis (+) و Acinetobacter sp (-).
المصدر: Koneman E، Allen S، Janda W، Schreckenberger P، Winn W. (2004). التشخيص الميكروبيولوجي. 5th إد. التحرير Panamericana SA Argentina.
معالجة
تحت ولاعة ، يتم أخذ جزء من كولونيا نقية ، باستخدام مقبض بلاتيني معقم ومبرد بشكل صحيح. يتم إذابة العينة المأخوذة (اللقاح الخفيف) في مرق malonate. احتضان مع غطاء فضفاض في الهوائية عند 35 درجة مئوية ± 0.2 لمدة 24 إلى 48 ساعة.
يمكن أيضًا تلقيح مرق Malonate من 18-24 ساعة في مرق الصويا trypticase في هذه الحالة ، يتم أخذ 0.01 مل بواسطة ماصة معقمة ويتم تلقيح مرق malonate. احتضان مع غطاء فضفاض في الهوائية عند 35 درجة مئوية ± 0.2 لمدة 24 إلى 48 ساعة.
في نهاية الوقت ، يتم تفسير النتائج. يجب اعتبار أي أثر للون الأزرق بعد 48 ساعة من الحضانة إيجابيًا. لا ينبغي تفسير الاختبار على أنه سلبي إلا بعد مرور 48 ساعة من فترة الحضانة.
في حالة استخدام متغير مرق فينيل ألانين malonate ، يتم تفسير malonate أولاً ثم يتم إضافة 5 قطرات من 1N HCl و 3-5 قطرات من 8 ٪ كلوريد الحديديك. يتم تفسير اللون الأخضر الداكن على أنه اختبار إيجابي للفينيل ألانين. من ناحية أخرى ، إذا تحول الوسط إلى اللون الأزرق الباهت ، يكون الاختبار سالبًا للفينيل ألانين.
سؤال وجواب
لأداء التحكم في عقم الوسط ، يجب تحضين مرق واحد أو اثنين عند 35 درجة مئوية ± 0.2 لمدة 24 ساعة من الحضانة. بعد هذا الوقت يجب ألا يكون هناك غيوم أو تغير في اللون.
لمراقبة الجودة ، يمكن استخدام سلالات معروفة أو معتمدة ، مثل: Enterobacter aerogenes ATCC 13048 و Klebsiella pneumoniae ATCC 33945 و Salmonella enterica ssp arizonae ATCC 13314 و Escherichia coli ATCC 25922.
النتائج المتوقعة هي:
- تعطي البكتيريا المعوية الهوائية و Klebsiella pneumoniae و Salmonella enterica ssp arizonae تفاعلًا إيجابيًا (لون أزرق متوسط).
- بالنسبة للإشريكية القولونية ، يجب أن تكون النتيجة سلبية ، أي أنه من المتوقع ألا يكون هناك تغيير في اللون (أخضر) أو أن يتحول إلى اللون الأصفر بسبب تخمر الجلوكوز.
محددات
لا تستخدم المرق الذي يظهر التعكر أو الترسبات أو تغير اللون أو أي علامة على التدهور.
المراجع
- Pedraza J، Sanandres N، Varela Z، Aguirre E، Camacho J. العزلة الميكروبيولوجية ل Salmonella spp. والأدوات الجزيئية للكشف عنها. الصحة Uninorte. بارانكويلا (العقيد) 2014 ؛ 30 (1): 73-94. متاح على: scielo.org.co
- BBL. مرق مالونات ، تعديل إوينغ. 2007. متاح في: bd.com
- مختبرات سينا. مرق مالوناتو. متاح في: cientificasenna.com
- RenyLab. مرق مالوناتو. 2013 متاح في: es.renylab.ind.br
- التشخيص المبيولوجي. مرق مالوناتو. متاح على: mbiolog.com
- Koneman E ، Allen S ، Janda W ، Schreckenberger P ، Winn W. (2004). التشخيص الميكروبيولوجي. 5th إد. التحرير Panamericana SA Argentina.
- مختبرات كوندا بروناديسا. مرق فينيل ألانين مالونات. متاح في: condalab.com