مرق الصويا التربكازين: الأساس والتحضير والاستخدامات - مادة الاحياء - 2026

و تريبتون الصويا مرق هو مستنبت السائل، وذات قيمة غذائية عالية، غير الانتقائية. نظرًا لتعدد استخداماته ، فهو أحد أكثر وسائط الثقافة السائلة استخدامًا في مختبر علم الأحياء الدقيقة.

يُعرف أيضًا باسم مرق الصويا المربى أو الكازين الصويا المهضوم ، واختصاره TSB لاختصاره باللغة الإنجليزية Tryptic Soy Broth أو CST لاختصاره باللغة الإسبانية. تتنوع استخداماته بشكل كبير بسبب تركيبته. وهو يتألف من تريبتين ، ببتون الصويا ، كلوريد الصوديوم ، فوسفات ثنائي البوتاسيوم ، والجلوكوز.

مرق فول الصويا التربتيكازين المصنوع من سلالة Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 حيث لوحظ إنتاج الصباغ. المصدر: صورة التقطها المؤلف ماجستير. مارييلسا جيل.

إنه قادر على تكاثر البكتيريا المسببة للأمراض المهمة سريريًا ، بما في ذلك البكتيريا اللاهوائية التي تتطلب متطلبات غذائية. يمكن أن تتطور أيضًا بعض الفطريات الانتهازية والملوثة في هذه البيئة.

نظرًا لقوتها الغذائية العالية ، فهي تتمتع بحساسية عالية للكشف عن التلوث الجرثومي ، ولهذا السبب تم اختيارها من قبل خدمة فحص صحة الحيوان والنبات التابعة لوزارة الزراعة الأمريكية للتحليل الميكروبيولوجي للقاحات.

وبالمثل ، فإن مرق فول الصويا التربتيكازين يلبي متطلبات مختلف دساتير الأدوية (EP الأوروبية ، اليابانية JP و USP الأمريكية الشمالية) للدراسة الميكروبيولوجية للمنتجات على المستوى الصناعي ، مثل مستحضرات التجميل والمواد الغذائية.

من ناحية أخرى ، تجدر الإشارة إلى أنه على الرغم من فائدتها الكبيرة ، إلا أن هذه الوسيلة غير مكلفة نسبيًا ، مما يجعلها في متناول معظم مختبرات الأحياء الدقيقة. كما أنه سهل التحضير.

أساس

يوفر له التريبتين والببتون والجلوكوز الخصائص الغذائية الأساسية لجعله وسيلة مثالية للنمو الميكروبي السريع.

في حوالي 6 إلى 8 ساعات من الحضانة ، يمكن بالفعل رؤية النمو في معظم الكائنات الحية الدقيقة. ومع ذلك ، هناك سلالات بطيئة النمو يمكن أن تستغرق أيامًا لتنمو.

يعمل كلوريد الصوديوم وفوسفات ثنائي البوتاسيوم كموازن تناضحي ومنظم للأس الهيدروجيني على التوالي. يتضح وجود النمو من خلال ظهور العكارة في الوسط ؛ إذا لم يكن هناك نمو ، يظل الوسط شفافًا.

بسبب لونها الفاتح ، من الممكن ملاحظة إنتاج الأصباغ ، مثل تلك الموضحة في الصورة في بداية المقالة ، والتي تتوافق مع الصبغة التي تنتجها Pseudomonas aeruginosa.

تجهيز

- مرق تريبتيساين الصويا

لتحضير مرق الصويا التريبتيكي ، يجب وزن 30 جم من الوسط التجاري المجفف على مقياس رقمي. ثم يذاب في لتر من الماء المقطر الموجود في دورق.

يُترك الخليط ليرتاح لمدة 5 دقائق ثم يُنقل إلى مصدر حرارة للمساعدة في إذابة الوسط. يجب تقليبها بشكل متكرر أثناء الغليان لمدة دقيقة واحدة.

بمجرد حلها ، يتم توزيعها في أنابيب بالحجم المناسب حسب الحاجة. يمكن استخدام الأنابيب ذات المقابس القطنية أو ذات أغطية الباكليت. بعد ذلك ، يتم تعقيم الأنابيب بالوسيط في الأوتوكلاف عند 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.

يجب أن يظل الأس الهيدروجيني للوسط عند 7.3 ± 0.2

وتجدر الإشارة إلى أن لون وسط الاستزراع المجفف هو بيج فاتح ويجب تخزينه في درجة حرارة تتراوح بين 10 إلى 35 درجة مئوية ، في مكان جاف. بينما المرق المحضر يكون لونه كهرماني فاتح ويجب تخزينه في الثلاجة (من 2 إلى 8 درجات مئوية).

- أنواع مختلفة من مرق الصويا التربتكازين

يمكن تحضير مرق الصويا التريبتيكازين المعدل عن طريق إضافة أملاح الصفراء والنوفوبيوسين لجعله انتقائيًا لعزل الإشريكية القولونية. خيار آخر لنفس الغرض هو تحضير مرق الصويا تريبتيسيز المضاف إليه فانكومايسين ، سيفيكسيم والتيلوريت (2.5 ميكروغرام / مل).

من ناحية أخرى ، يمكن إضافة المزيد من الجلوكوز (0.25٪) إلى مرق الصويا عندما يكون الهدف هو تحفيز تكوين الأغشية الحيوية.

استعمال

وهي مغذية بما يكفي للسماح بنمو البكتيريا الحساسة أو شديدة الحساسية مثل Streptococcus pneumoniae و Streptococcus sp و Brucella sp ، دون الحاجة إلى إضافة الدم أو المصل.

وبالمثل ، يمكن أن تتطور بعض الفطريات في هذا المرق ، مثل Candida albicans Complex و Aspergillus sp و Histoplasma capsulatum.

علاوة على ذلك ، تعتبر هذه الوسيلة في ظل الظروف اللاهوائية مثالية لاستعادة البكتيريا التي تنتمي إلى جنس المطثية ، وكذلك البكتيريا اللاهوائية غير المبوغة ذات الأهمية السريرية.

إذا تمت إضافة 6.5٪ من كلوريد الصوديوم ، فيمكن استخدامه لنمو المكورات المعوية والمكورات العقدية الأخرى من المجموعة د.

على مستوى البحث ، كان مفيدًا جدًا في البروتوكولات المختلفة ، لا سيما في دراسة البيوفيلم أو البكتيريا المكونة للغشاء الحيوي. كما أنها تستخدم لتحضير 0.5٪ ماك فارلاند المعلق البكتيري الضروري لأداء المضاد الحيوي بطريقة كيربي وباور.

في هذه الحالة ، يتم أخذ 3 إلى 5 مستعمرات ذات مظهر مشابه واستحلابها في 4-5 مل من مرق الصويا التربكازين. ثم يتم تحضينها لمدة 2 إلى 6 ساعات عند 35-37 درجة مئوية وتعديلها بعد ذلك إلى التركيز المطلوب باستخدام محلول ملحي معقم. يجب عدم استخدام مرق الصويا التربتيكازين من 18 إلى 24 ساعة من الحضانة.

زرعت

يمكن بذر العينة مباشرة أو يمكن زرع مستعمرات نقية مأخوذة من وسط انتقائي. يجب أن يكون اللقاح صغيرًا حتى لا يغمى على الوسط قبل الحضانة.

عادة ما يتم تحضينها عند 37 درجة مئوية في الهوائية لمدة 24 ساعة ، ولكن قد تختلف هذه الظروف اعتمادًا على الكائن الدقيق المطلوب. يمكن أيضًا تحضينها تحت ظروف لاهوائية عند 37 درجة مئوية لعدة أيام إذا لزم الأمر. على سبيل المثال ، يمكن احتضان الكائنات الدقيقة سريعة النمو أو سريعة النمو لمدة تصل إلى 7 أيام.

في التحليل الميكروبيولوجي للمواد الصيدلانية - مثل اللقاحات - تكون البروتوكولات أكثر صرامة. في هذه الحالات ، لا يتم التخلص من المرق الذي لا ينمو حتى يصل إلى 14 يومًا من الحضانة المستمرة.

سؤال وجواب

من كل دفعة محضرة ، يجب تحضين أنبوب أو أنبوبين غير محصنين لإثبات عقمهما. يجب أن يبقى دون تغيير.

يمكن أيضًا زرع سلالات معروفة لتقييم سلوكهم. من بين السلالات التي يمكن استخدامها:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604، Candida albicans ATCC 10231، Bacillus subtilis ATCC 6633، Staphylococcus aureus ATCC 6538 or 25923، Escherichia coli ATCC 8739، Streptococcus pyogenes ATCC 19615، Streptococcus pneumoniae ATCC28CC 905.

في جميع الحالات ، يجب أن يكون النمو مرضيًا في ظل ظروف الجو ودرجة الحرارة المناسبة لكل كائن حي دقيق.

محددات

- يتسبب تخمر الجلوكوز في انخفاض درجة حموضة الوسط نتيجة إنتاج الأحماض. قد يكون هذا غير مواتٍ لبقاء بعض الكائنات الحية الدقيقة الحساسة للحموضة.

- لا ينصح به لصيانة السلالات ، لأنه بالإضافة إلى الحموضة ، تستنفد البكتيريا العناصر الغذائية بعد أيام قليلة مع ما يترتب على ذلك من تراكم المواد السامة التي تجعل البيئة غير مضيافة.

- يجب أن تعمل على العناية بكافة بروتوكولات التعقيم ، حيث أن المرقة تتلوث بسهولة.

- بعد تحضير مرق فول الصويا التربتيكازين ، يجب ألا تحاول نقل المرق إلى أنبوب معقم آخر ، لأن هذا النوع من المناورة شديد التعرض للتلوث.

المراجع

1. Cona E. شروط لدراسة حساسية جيدة عن طريق اختبار انتشار أجار. القس تشيل. إنفكتول. 2002 ؛ 19 (2): 77-81. متاح على: scielo.org
2. مختبر بريتانيا. مرق الصويا تريبتين. 2015 متاح على: britanialab.com
3. مختبر MCD. مرق الصويا التربتيكازين. متاح في: electronic-systems.com
4. مختبر نيوجين. مرق الصويا بالثلاثي. متاح على: foodafety.neogen.com
5. Forbes B، Sahm D، Weissfeld A. (2009). بيلي وسكوت التشخيص الميكروبيولوجي. 12 إد. التحرير Panamericana SA Argentina.
6. Rojas T، Vásquez Y، Reyes D، Martínez C، Medina L. تقييم تقنية الفصل المناعي المغناطيسي لاستعادة Escherichia coli O157: H7 في كريمات الحليب. آلان. 2006 ؛ 56 (3): 257-264. متاح على: scielo.org.ve
7. Gil M، Merchán K، Quevedo G، Sánchez A، Nicita G، Rojas T، Sánchez J، Finol M. تشكيل بيوفيلم في عزلات Staphylococcus aureus وفقًا لقابلية مضادات الميكروبات والأصل السريري. فيتاي. 2015 ؛ 62 (1): 1-8. متاح في: saber.ucv.ve
8. Narváez-Bravo C، Carruyo-Núñez G، Moreno M، Rodas-González A، Hoet A، Wittum T. عزل Escherichia coli O157: H7 في عينات براز الأبقار مزدوجة الغرض من بلدية ميراندا ، ولاية زوليا ، فنزويلا. القس سيينت. (ماراكايبو) ، 2007 ؛ 17 (3): 239-245. متاح على: scielo.org