- أساس
- تجهيز
- - مرق تراثيونيت
- محلول اليود اليود
- وسط أساسي لمرق رباعي
- - مرق ثلاثي تراثيونيت مع أخضر زاهي
- ساطع باللون الأخضر
- استعمال
- سؤال وجواب
- التوصيات
- المراجع
و التتراثيونات مرق أو المرق TT هي مستنبت السائل انتقائية لإثراء واستعادة سلالات جنس السالمونيلا. تم إنشاؤه بواسطة Müeller وتم تعديله لاحقًا بواسطة Kauffmann ، ولهذا السبب يوجد من يسمونه مرق Müeller-Kauffmann.
احتوى الوسط الأصلي على بيبتون البروتين وكربونات الكالسيوم وثيوسلفات الصوديوم. أضاف Kauffmann أملاح الصفراء إليه وخلق طريقة أخرى ذات لون أخضر ساطع. تمنع هذه المواد نمو القولونيات ، تاركة الوسط خاليًا من البكتيريا المسببة للأمراض ، في هذه الحالة السالمونيلا.
إضافة محلول اليود اليود إلى مرق التيتراثيونات. المصدر: مانويل ألماجرو ريفاس
كان التعديل ناجحًا للغاية لأنه زاد بشكل كبير من حساسية الوسيط. لهذا السبب ، من المفيد حاليًا البحث عن السالمونيلا في أي نوع من العينات ، ولكن بشكل خاص عن البراز الصلب أو السائل والطعام.
يتكون تحضيرها من مرحلتين ؛ الوسيط التجاري هو قاعدة لتحضير مرق رباعي ، وبعد ذلك ، بحيث يمكن تكوين رباعي الراثيونات ، يضاف محلول اليود المعالج باليود لإكمال الوسط.
توصي جمعية الصحة العامة الأمريكية (APHA) باستخدام مرق Tetrathionate المكمّل باللون الأخضر الفاتح لإثراء عينات السالمونيلا ، لأنه أكثر انتقائية من Tetrathionate Broth و Selenite Broth.
بشكل عام ، يعتبر مرق التيتراثيونات مثاليًا عند الاشتباه في وجود بكتيريا من جنس السالمونيلا بكميات صغيرة أو عند إساءة استخدامها عن طريق التعرض لمواد مثبطة أو من خلال العمليات الصناعية التي تقلل من صلاحيتها.
أساس
تتوافق البيبتون الموجودة مع هضم البنكرياس للكازين والهضم الهضمي للأنسجة الحيوانية. هذه توفر مصدر الكربون والنيتروجين والمغذيات العامة لنمو البكتيريا.
من جانبه ، يتفاعل ثيوسلفات الصوديوم مع المحلول المعالج باليود لتكوين رباعي تراثيونات. هذا يمنع نمو القولونيات ويفضل تطوير البكتيريا التي تحتوي على إنزيم رباعي تراثيونيت ريدوكتاز ، من بينها جنس السالمونيلا ، ولكن أيضًا المتقلبة.
تعمل أملاح الصفراء أيضًا كمواد مثبطة لمعظم البكتيريا موجبة الجرام وبعض البكتيريا سالبة الجرام (القولونيات).
تمتص كربونات الكالسيوم المواد السامة الناتجة عن تحلل التيتراثيونات التي تشكل حامض الكبريتيك. وبهذا المعنى ، فإن كربونات الكالسيوم تعادل الحموضة ، مما يحافظ على استقرار درجة الحموضة في الوسط.
في حالة الطريقة الخضراء الزاهية ، تزيد هذه المادة من القوة الانتقائية لمرق رباعي تراثيونات عن طريق تثبيط الكائنات الحية الدقيقة غير جنس السالمونيلا.
تجهيز
- مرق تراثيونيت
محلول اليود اليود
لوزن:
- 6 غرامات من اليود.
- 5 غرام يوديد البوتاسيوم.
يذوب يوديد البوتاسيوم في حوالي 5 مل من الماء المقطر المعقم ، ثم يضاف اليود شيئًا فشيئًا أثناء تسخين الخليط. بعد أن يذوب تمامًا ، قم بعمل ما يصل إلى العلامة بالماء المقطر المعقم حتى الوصول إلى الحجم النهائي 20 مل.
وسط أساسي لمرق رباعي
يزن 46 جرام من الوسط المجفف ويعلق في 1 لتر من الماء المقطر المعقم. تخلط وتسخن حتى تذوب تمامًا ، يمكن أن تغلي لبضع دقائق فقط. لا تستخدم الأوتوكلاف. يُسمح لقاعدة الوسط أن تبرد إلى حوالي 45 درجة مئوية وفي ذلك الوقت يضاف 20 مل من المحلول المعالج باليود.
بعد إضافة المحلول المعالج باليود إلى الوسط ، يجب استخدامه على الفور. إذا كنت لا ترغب في استخدام الخليط بأكمله ، فتابع ما يلي:
يتم توزيع 10 مل من الوسط الأساسي في أنابيب ، ويتم إضافة 0.2 مل من المحلول المعالج باليود فقط إلى تلك التي يتم تلقيحها بالعينات.
لا يزال من الممكن تخزين تلك التي لن يتم استخدامها في الثلاجة ، ولكن نظرًا لأن الوسيلة غير معقمة ، فإن الطريقة المثالية هي تحضير الكمية المطلوبة بالضبط.
لون الوسط قبل إضافة محلول اليود أبيض حليبي مع ترسب أبيض وبعد الإضافة يكون بني مع ترسب كثيف. الراسب المرصود طبيعي ويتوافق مع كربونات الكالسيوم التي لا تذوب. الرقم الهيدروجيني النهائي للوسط هو 8.4 ± 0.2.
- مرق ثلاثي تراثيونيت مع أخضر زاهي
لتحضير مرق التيتراثيونات الخضراء الزاهية ، يتم تنفيذ جميع الخطوات الموضحة أعلاه ، ولكن بالإضافة إلى ذلك ، سيتم إضافة 10 مل من المحلول الأخضر اللامع المحضر عند 0.1٪ إلى الخليط.
ساطع باللون الأخضر
يتم تحضير هذا الحل على النحو التالي:
تزن 0.1 جرام من اللون الأخضر الفاتح وتعلق في 100 مل من الماء المقطر. يسخن حتى الغليان لتحقيق الذوبان التام. تخزينها في زجاجة العنبر.
استعمال
بالنسبة لعينات البراز (زراعة البراز) يكون البروتوكول كما يلي:
تلقيح 1 جم من البراز الصلب أو 1 مل من البراز السائل في أنبوب يحتوي على 10 مل من مرق رباعي الإيثيلين الجاهز للاستخدام. رج بقوة واحتضانه الهوائية عند 43 درجة مئوية لمدة 6-24 ساعة.
بعد ذلك ، خذ قسامة من 10 إلى 20 ميكرولتر من المرق والثقافة الفرعية في وسط انتقائي للسالمونيلا ، مثل أجار SS ، أجار XLD ، أجار أخضر زاهي ، أجار Hektoen المعوي ، من بين أمور أخرى.
بالتوازي مع ذلك ، يجب تلقيح الأوساط الانتقائية للسالمونيلا بالعينة المباشرة (البراز) دون تخصيب. بالنسبة لعينات مسحة المستقيم ، قم بتفريغ المادة المجمعة في الأنبوب واستمر على النحو الموصوف أعلاه.
بالنسبة لعينات الطعام ، قم بوزن 10 جرام من الطعام الصلب أو 10 مل من الطعام السائل وقم بتلقيح زجاجة بـ 100 مل من مرق رباعي الأثيونات الجاهز للاستخدام. استمر بنفس الطريقة الموضحة أعلاه ولكن احتضان عند 37 درجة مئوية.
كما يتضح ، فإن العلاقة بين العينة والمرق ستكون دائمًا 1:10.
سؤال وجواب
يمكن استخدام سلالات التحكم المعروفة لاختبار وسط المزرعة. الأكثر استخدامًا هي السلالات المعتمدة من ATCC.
السلالات التي سيتم استخدامها هي Salmonella typhimurium ATCC 14028 و Salmonella abony DSM 4224 و Salmonella enteritidis ATCC 13076 و Escherichia coli ATCC 25922 و Enterococcus faecalis ATCC 19433 و Staphylococcus aureus ATCC 25923.
من المتوقع نمو ممتاز لسلالات السالمونيلا ، بينما قد يكون للإشريكية القولونية نمو ضعيف أو منتظم ، ويتم تثبيط السلالات الموجبة لصبغة جرام (المكورات المعوية والمكورات العنقودية) جزئيًا أو كليًا.
التوصيات
- بما أن هذا الوسط لا يثبط نمو المتقلبة ، فإن بعض المعامل تستخدم 40 ملجم / لتر من نوفوبيوسين لمنع تطور هذه السلالة الميكروبية. يجب إضافة المضاد الحيوي قبل محلول اليود.
- بعد تحضير الوسط بما في ذلك محلول اليود يجب ألا يستغرق التلقيح أكثر من ساعتين.
- عند توزيع الوسط في الأنابيب ، يجب أن يكون الخليط متجانسًا باستمرار لإعادة تعليق المادة المترسبة المتكونة.
- في العينات الأقل تلوثًا ، يتم تحضين مرق التيتراثيونات عند 35-37 درجة مئوية ، وفي العينات شديدة التلوث ، يوصى بالحضانة عند 43 درجة مئوية.
المراجع
- مختبر كوندا بروناديسا. 2010. قاعدة مرق التيتراثيونات حسب Müeller-Kauffmann. متوفر في:
- مختبرات BD. 2003. قاعدة مرق التيتراثيونات. متوفر في:
- مختبرات بريتانيا. 2015. مرق قاعدة التيترانات. متوفر في:
- بي بي ال ميديا. 2005. محضرة في أنابيب لتربية أنواع السالمونيلا.
- Forbes B، Sahm D، Weissfeld A. (2009). بيلي وسكوت التشخيص الميكروبيولوجي. 12 إد. التحرير Panamericana SA Argentina.
- Flores-Abuxapqui J، Puc-Franco M، Heredia-Navarrete M، Vivas-Rosel M، Franco-Monsreal J. مقارنة بين وسائط ثقافة سيلينيت الصوديوم ورباعي تراثيونات الصوديوم ، كلاهما محتضن عند 37 درجة مئوية و 42 درجة مئوية من أجل عزل Salmonella spp من براز ناقلات المرض. ريف بيوميد 2003 ؛ 14 (4): 215-220