- أساس
- تجهيز
- مرق ثيوجليكولات مع مؤشر
- مرق ثيوجليكولات مع مؤشر غني بالهيمين وفيتامين ك
- مرق ثيوجليكولات مع كربونات الكالسيوم
- مرق ثيوجليكولات بدون مؤشر
- استعمال
- سؤال وجواب
- التوصيات
- المراجع
و مرق الثيوغليكولات هو وسيلة التخصيب الاتساق السوائل. وهي معروفة بالاختصار FTM لاختصارها في English Fluid Thioglycollate Medium. تم إنشاؤه بواسطة Brewer وتم تعديله في عام 1944 بواسطة Vera ، الذي أضاف إليه الكازين الببتون.
يحتوي هذا الوسيط على قدرة منخفضة على الأكسدة ، وبالتالي لا ينصح به لتطوير البكتيريا الهوائية الصارمة ، ولكنه مثالي لاستعادة البكتيريا الهوائية الاختيارية ، والبكتيريا اللاهوائية الصارمة والمتساهلة.
مرق ثيوجليكولات بدون مؤشر. يظهر إفرازات مهبلية. المصدر: Bobjgalindo
الأداء العالي الذي لوحظ مع هذه الوسيلة في عزل واستعادة مجموعة واسعة من الكائنات الحية الدقيقة ، جعلها مقبولة من قبل دستور الأدوية الأمريكي (USP) ، من قبل الرابطة الرسمية للكيميائيين الزراعيين (AOAC) ودستور الأدوية الأوروبي (EP).
توصي هذه المنظمات باختبار التحكم في العقم للمنتجات الصيدلانية ولإثراء أنواع مختلفة من العينات.
يتكون كادو ثيوجليكولات من مستخلص الخميرة ، وهضم البنكرياس من الكازين ، وسكر العنب اللامائي ، وسيستين ، وكلوريد الصوديوم ، وثيوجليكولات الصوديوم ، وريسازورين ، وأجار بكميات صغيرة.
هناك عدة إصدارات من هذه الوسيلة ، من بينها: مرق ثيوجليكولات مع مؤشر ، مرق ثيوجليكولات بدون مؤشر ، مرق ثيوجليكولات بمؤشر غني بالهيمين وفيتامين ك 1 ، ومرق ثيوجليكولات مع كربونات الكالسيوم.
والجدير بالذكر أن متغير مرق ثيوجليكولات المخصب بالهيمين وفيتامين K يعمل على تعزيز نمو اللاهوائية سريعة التحمل ، ومرق الثيوجليكولات المحتوي على كربونات الكالسيوم مفيد لمواجهة الأحماض المنتجة أثناء النمو الميكروبي.
أساس
يعتبر مرق الثيوجليكولات وسيلة إثراء غير انتقائية لأنه يسمح بنمو معظم البكتيريا غير الحساسة. يتم توفير المتطلبات الغذائية من خلاصة الخميرة وهضم البنكرياس والجلوكوز.
من ناحية أخرى ، هذه الوسيلة ، على الرغم من كونها مرق ، تحتوي على كمية صغيرة من الآجار. هذا يعني أن لديه قدرة منخفضة على تقليل الأكسدة ، نظرًا لأنه يبطئ دخول الأكسجين ، بحيث يتناقص الأكسجين كلما تعمق في الأنبوب.
هذا هو السبب في أن هذه الوسيلة مثالية لتطوير البكتيريا الهوائية الاختيارية ، الميكروية والبكتيريا اللاهوائية الصارمة ، الأخيرة 2 دون الحاجة إلى الحضانة في ظل هذه الظروف. نفس الوسيلة تنظم كمية الأكسجين داخل الوسط ، حيث تكون غائبة في قاع الأنبوب وبكمية كافية على السطح.
وبالمثل ، فإن الثيوجليكولات و L- سيستين يعملان كعوامل اختزال ، مما يساعد على منع تراكم المواد التي تضر بالتطور البكتيري ، مثل البيروكسيد. بالإضافة إلى ذلك ، تحتوي هذه المركبات على مجموعات سلفهيدريل (-SH-) ، التي تعمل على تحييد التأثيرات المثبطة لمشتقات الزئبق ، والزرنيخ ، من بين معادن ثقيلة أخرى.
من جانبه ، يعتبر ريسازورين مؤشرًا على تقليل الأكسيد. تكون هذه المادة عديمة اللون عند اختزالها وتكون زهرية عند الأكسدة. هناك متغيرات مرق ثيوجليكولات مؤشر وغير مؤشر. يعتمد استخدامه على نوع العينة وتفضيل المختبر.
وفي الوقت نفسه ، يحافظ كلوريد الصوديوم على التوازن التناضحي لمرق ثيوجليكولاتي ، كما أن استخدام الجلوكوز في شكل لا مائي يمنع الرطوبة الزائدة في الوسط المجفف.
تجهيز
مرق ثيوجليكولات مع مؤشر
يزن 29.75 جم من الوسط المجفف ويذوب في 1 لتر من الماء المقطر. يُسمح للخليط بالوقوف لمدة 5 دقائق تقريبًا. يحضر إلى مصدر الحرارة ويقلب باستمرار حتى يذوب تمامًا.
صب الوسيط في أنابيب الاختبار والأوتوكلاف عند 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. اتركيه ليبرد قبل الاستخدام. تحقق من نشرة البيت التجاري لحفظه. يوصي البعض بالتخزين في درجة حرارة الغرفة في مكان مظلم ، والبعض الآخر في الثلاجة محمية من الضوء.
الرقم الهيدروجيني للوسط المحضر هو 7.1 ± 0.2.
لون الوسط المجفف بيج فاتح والوسط المحضر كهرماني فاتح مع بعض البريق.
مرق ثيوجليكولات مع مؤشر غني بالهيمين وفيتامين ك
هناك وسائط تجارية تحتوي بالفعل على الهيمين وفيتامين ك 1 ، خاصة لزراعة اللاهوائية.
إذا لم يكن لديك الوسط المخصب اللاهوائي ، يمكنك تحضير مرق الثيوجليكولات الأساسي. لهذا الغرض ، يضاف 10 ملغ من هيدروكلوريد الهيمين و 1 ملغ من فيتامين ك 1 لكل لتر من الوسط. ومع ذلك ، إذا تمت إضافة الدم أو المصل إلى مرق الثيوجليكولات ، فإن إضافة الهيمين أو فيتامين ك ليست ضرورية.
مرق ثيوجليكولات مع كربونات الكالسيوم
يأتي تجاريًا ويتم إعداده باتباع التعليمات الواردة في الملحق.
مرق ثيوجليكولات بدون مؤشر
يحتوي هذا على نفس تركيبة الثيوجليكولات الأساسية ، لكنه لا يحتوي على ريسازورين.
تزن 30 جم من الوسط المجفف وتذوب في لتر من الماء المقطر. ما تبقى من المستحضر هو نفسه الموصوف في مرق الثيوجليكولات مع المؤشر.
استعمال
مرق ثيوجليكولات مفيد لإثراء العينات السريرية ، خاصة تلك الموجودة في المواقع المعقمة. كما أنه مفيد للعينات غير السريرية ، مثل مستحضرات التجميل والأدوية وما إلى ذلك.
لتلقيح العينات السائلة (مثل CSF ، السائل الزليلي ، من بين أمور أخرى) ، يتم أولاً طرد العينات ثم يتم أخذ قطرتين من الرواسب ووضعها في مرق الثيوجليكولات. احتضان عند 35 درجة مئوية لمدة 24 ساعة. إذا لم يكن هناك نمو (عكارة) في هذا الوقت ، فسيتم تحضينه لمدة أقصاها 7 أيام.
إذا تم أخذ العينة بمسحة ، يتم تلقيح وسط الاستنبات أولاً في أطباق ، وفي النهاية يتم إدخال المسحة في المرق ، ويتم تقسيم الجزء البارز وتغطية الأنبوب ، وترك المسحة بالداخل. احتضان عند 35 درجة مئوية لمدة 24 ساعة ، 7 أيام كحد أقصى.
بالنسبة للعينات الصلبة ، قم بالتجانس في محلول ملحي فسيولوجي (SSF) ثم تلقيح مرق ثيوجليكولات بقطرتين من المعلق.
يمكن استخدامه أحيانًا كوسيلة نقل للعينات التي يشتبه في وجود اللاهوائية الصارمة فيها أو كمرق إثراء احتياطي.
يتم استخدام متغير مرق الثيوجليكولات مع كربونات الكالسيوم للحفاظ على سلالات التحكم لفترة أطول ، لأنه يتمتع بالقدرة على تحييد الأحماض الناتجة عن استخدام الجلوكوز ؛ هذه الأحماض سامة لبكتيريا معينة.
سوف يلاحظ النمو في مرق الثيوجليكولات بواسطة تعكر الوسط. يوصى بإجراء صبغة جرام وثقافة فرعية لاحقًا في وسط غير انتقائي وانتقائي ، اعتمادًا على نوع العينة والكائنات الحية الدقيقة المشتبه بها.
سؤال وجواب
للتحكم في العقم ، يوصى باحتضان مرق واحد أو اثنين بدون تلقيح. والنتيجة المتوقعة هي مرق صافٍ بدون تغيير في اللون ، على الرغم من أنه من الطبيعي رؤية لون وردي خفيف على سطح الأنبوب.
لمراقبة الجودة ، يجب تلقيح ما بين 10-100 CFU من سلالات التحكم المعتمدة ، مثل Staphylococcus aureus ATCC 6538 ، و Micrococcus luteus ATCC 9341 ، و Bacillus subtilis ATCC 6633 ، و Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 ، و Clostridium sporogenes ATCC 19404 ، و Clostridium 11437 باكتيرويدس فولجاتوس ATCC 8482.
احتضان عند 30-35 درجة مئوية في الهوائية لمدة 24 ساعة بحد أقصى 3 أيام ، لأن هذه الكائنات الدقيقة تنمو بسرعة.
من المتوقع حدوث تطور جيد في جميع الحالات ، باستثناء Micrococcus luteus و Bacillus subtilis ، حيث قد يكون هناك تطور معتدل.
لمراقبة جودة مرق ثيوجليكولات المخصب بالهيمين وفيتامين ك 1 ، يمكن استخدام سلالات التحكم Bacteroides vulgatus ATCC 8482 و Clostridium perfringens ATCC 13124 و Bacteroides fragilis ATCC 25285 ، والنتيجة المتوقعة هي نمو مرض.
التوصيات
- من حين لآخر يمكن ملاحظة أن سطح مرق الثيوجليكولات مع المؤشر يتحول إلى اللون الوردي ؛ هذا بسبب أكسدة الوسط. إذا كان اللون الوردي يغطي 30٪ أو أكثر من إجمالي المرق ، فيمكن تسخينه في حمام مائي لمدة 5 دقائق ، ثم تبريده مرة أخرى واستخدامه.
سيؤدي ذلك إلى إزالة الأكسجين الممتص ، وإعادة الوسط إلى لونه الأصلي. يمكن القيام بهذا الإجراء مرة واحدة فقط.
- لتحسين نمو البكتيريا الهوائية ، احضنها مع غطاء رخو قليلاً. ومع ذلك ، فمن الأفضل استخدام مرق ضخ قلب الدماغ أو مرق فول الصويا تريبتيسيز لهذا الغرض من أجل التطوير السليم للأيروبس الصارم.
- يجب تجنب تجمد الوسط أو السخونة الزائدة ، لأن كلا الحالتين تلحق الضرر بالوسط.
- يضر الضوء المباشر بوسط الاستزراع ، يجب تخزينه محميًا من الضوء
المراجع
- مختبرات بريتانيا. Thioglycollate USP مع مؤشر. 2015 متاح في: labBritania.com.
- مختبرات خيوس ساس. 2019. مرق ثيوجليكولات. متاح على: quios.com.co
- مختبرات BD Fluid Thioglycollate Medium (FTM). 2003 متاح على: bd.com/Europe
- وسائط BBL المحضرة في أنابيب لزراعة الكائنات الحية الدقيقة اللاهوائية. وسائط Thioglycollate. 2013 متاح في: bd.com
- Forbes B، Sahm D، Weissfeld A. (2009). بيلي وسكوت التشخيص الميكروبيولوجي. 12 إد. التحرير Panamericana SA Argentina.