مرق اليوريا: الأساس والتحضير والاستخدامات - مادة الاحياء - 2025

و مرق اليوريا هو مستنبت السائل، وتستخدم للكشف عن وجود إنزيم اليورياز في بعض الكائنات الحية الدقيقة. اليورياز هو إنزيم جرثومي يتم إنتاجه بطريقة تأسيسية ، أي أنه يتم تصنيعه بغض النظر عما إذا كانت الركيزة التي يعمل عليها موجودة أم لا.

ترتبط وظيفة اليورياز بتحلل المركبات العضوية. ليست كل الكائنات الحية الدقيقة قادرة على تصنيع هذا الإنزيم ، وبالتالي فإن تحديده في المختبر يسمح بتحديد سلالات بكتيرية معينة وحتى التمييز بين الأنواع من نفس الجنس.

اختبار اليوريا السلبي والإيجابي. المصدر: صورة التقطها المؤلف ماجستير. مارييلسا جيل.

هناك نوعان من اختبار اليوريا: ستيوارت وكريستنسن. تختلف في التركيب والحساسية. الأول خاص لإظهار كمية كبيرة من اليورياز الذي تنتجه أنواع من جنس المتقلبة.

والثاني أكثر حساسية ويمكنه اكتشاف كميات صغيرة من اليورياز المتولدة في وقت متأخر من أجناس بكتيرية أخرى ، مثل Klebsiella و Enterobacter و Staphylococcus و Brucella و Bordetella و Bacillus و Micrococcus و Helicobacter و Mycobacterium.

يتكون مرق اليوريا من ستيوارت من اليوريا وكلوريد الصوديوم وفوسفات ثنائي البوتاسيوم وفوسفات أحادي البوتاسيوم ومستخلص الخميرة وأحمر الفينول والماء المقطر.

وفي الوقت نفسه ، يتكون أجار أو مرق اليوريا من كريستنسن من بيبتون ، وكلوريد الصوديوم ، وفوسفات أحادي البوتاسيوم ، والجلوكوز ، واليوريا ، وأحمر الفينول ، والماء المقطر ، وأجار أجار. الأخير فقط إذا كان هو الوسط الصلب.

أساس

يقوم إنزيم اليورياز بتحليل اليوريا لتكوين ثاني أكسيد الكربون والماء واثنين من جزيئات الأمونيا. تتفاعل هذه المركبات لتشكيل المنتج النهائي المسمى كربونات الأمونيوم.

مرق اليوريا من ستيوارت

مرق اليوريا من ستيوارت يتم تخزينه بدرجة حموضة تصل إلى 6.8. لذلك ، يجب أن تكون الكائنات الحية الدقيقة قادرة على تكوين كميات كبيرة من الأمونيا لتحويل الفينول إلى اللون الأحمر. يجب أن يرتفع الرقم الهيدروجيني فوق 8.

لذلك ، يعتبر مرق اليوريا من ستيوارت انتقائيًا لأنواع المتقلبة ، مما يعطي نتائج إيجابية في غضون 24 إلى 48 ساعة من الحضانة ، كما أنه غير فعال للبكتيريا التي تنتج كميات منخفضة من اليورياز أو التي تتحلل ببطء اليوريا.

وذلك لأن أنواع Proteus قادرة على استخدام اليوريا كمصدر للنيتروجين. بدلاً من ذلك ، تحتاج البكتيريا الأخرى المنتجة لليورياز إلى مصدر إضافي.

ومع ذلك ، بيريز وآخرون. قرر (2002) أن مرق اليوريا الخاص بستيوارت كان فعالًا مثل كريستنسن أجار اليوريا في تحديد اليوريا في سلالات الخميرة من أجناس المبيضات ، المستخفية ، رودوتورولا ، Trichosporon و Saccharomyces.

يدعي مؤلفو الدراسة أنهم حققوا اتفاقًا بنسبة 100 ٪ مع كل من الوسائط (ستيوارت وكريستنسن) عند الحضانة لمدة 24 و 48 ساعة ؛ باستثناء أن السلالات التي تمكنت من تحويل الوسائط إلى لون وردي-فوشيا قوي تم اعتبارها إيجابية.

هذا التوضيح ضروري ، لأن لودر (1970) ذكر أن جميع الخمائر تقريبًا تمكنت من تحويل شطبة أجار كريستنسن اليوريا إلى اللون الوردي الباهت. هذا يرجع إلى حقيقة أنها يمكن أن تتحلل اليوريا بكميات قليلة ، وتشكيل الأمينات عن طريق نزع الكربوكسيل المؤكسد من الأحماض الأمينية على السطح. هذا لا ينبغي أن يفسر على أنه إيجابي.

كريستنسن اليوريا أجار أو مرق

مرق اليوريا أو أجار كريستنسن أقل مخزونًا ، ويمكنه اكتشاف كميات صغيرة من الأمونيا. علاوة على ذلك ، يتم إثراء هذه الوسيلة بالبيبتون والجلوكوز. تتسبب هذه المركبات في نمو الكائنات الحية الدقيقة الأخرى المنتجة لليورياز والتي لا تنمو في مرق ستيوارت.

وبالمثل ، يقدم اختبار كريستنسن لليوريا نتائج أسرع ، خاصة بالنسبة إلى Proteus ، حيث يكون قادرًا على إعطاء نتائج إيجابية قوية في 30 دقيقة فقط كحد أدنى للوقت وحتى 6 ساعات كحد أقصى.

تمكنت بقية الكائنات الحية الدقيقة المنتجة لليورياز من تغيير لون الوسط قليلاً بعد 6 ساعات ، وبقوة بعد 24 أو 48 أو 72 ساعة أو أكثر ، وحتى بعض السلالات يمكن أن تعطي تفاعلات ضعيفة بعد 5 أو 6 أيام.

تفسير كل من الوسائط (ستيوارت وكريستنسن)

يكون الوسط في الأصل أصفر برتقالي اللون وسيؤدي رد الفعل الإيجابي إلى تحويل اللون المتوسط ​​إلى الفوشيا الوردي. كثافة اللون تتناسب طرديا مع كمية الأمونيا المنتجة.

سيترك التفاعل السلبي وسط اللون الأصلي باستثناء الخمائر ، والتي قد تتحول إلى اللون الوردي الباهت على وسط أجار اليوريا من كريستنسن.

تجهيز

مرق اليوريا من ستيوارت

وزن الجرامات اللازمة حسب دلالات الشركة التجارية. يذوب في ماء مقطر معقم ويفضل. لا تستخدم الحرارة لتذوب ، لأن اليوريا حساسة للحرارة.

يستخدم الترشيح الغشائي للتعقيم. لهذا الغرض ، يتم استخدام مرشح Millipore مع مسام قطرها 0.45 µ. لا تستخدم الأوتوكلاف. بمجرد ترشيح المحلول ، يتم توزيعه في أنابيب معقمة. للحصول على نتائج موثوقة ، يجب نقلها بين 1.5 مل كحد أدنى للكمية و 3 مل كحد أقصى للكمية لكل أنبوب.

يُحفظ في الثلاجة ويُسخن قبل الاستخدام.

في حالة عدم توفر طريقة الترشيح ، يجب استخدام الوسيط على الفور للحصول على نتائج موثوقة.

طريقة أخرى لتحضير Stuart's Urea Broth هي كما يلي:

تبيع بعض المنازل التجارية الوسيط الأساسي لاختبار اليوريا ، وليس بما في ذلك اليوريا.

يتم وزن الكمية الموضحة من قبل الشركة التجارية. يذوب في الماء المقطر ويعقم في الأوتوكلاف عند 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. يُترك ليرتاح قليلًا وعندما يكون الوسط دافئًا ، أضف 100 مل من محلول اليوريا المحضر بنسبة 20٪ والمعقم بالترشيح.

يتم توزيعه في أنابيب معقمة ، كما هو موضح سابقًا.

كريستنسن اليوريا أجار أو مرق

- تحضير محلول اليوريا

يزن 29 جم من اليوريا المجففة ويذوب في 100 مل من الماء المقطر. استخدم طريقة الترشيح للتعقيم. لا تستخدم الأوتوكلاف.

-أجار قاعدة اليوريا

ذوبي 24 جم من أجار القاعدة المجفف في 950 مل من الماء المقطر. تعقيم في الأوتوكلاف عند 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. دعها ترتاح حتى تصل إلى درجة حرارة 50 درجة مئوية وأضف اليوريا المحضرة مسبقًا معقمًا.

صب 4-5 مل في أنابيب معقمة وإمالة حتى تصلب. يجب أن يكون هناك منقار طويل.

يمكن أيضًا تحضير هذا الوسط في شكل سائل.

التطبيقات

يعتبر اختبار اليوريا فعالًا للغاية في التمييز بين جنس المتقلبة والأجناس الأخرى في العائلة المعوية ، نظرًا للتفاعل السريع الذي يوفره المتقلبة.

باستخدام تركيبة كريستنسن ، يساعد الاختبار في التفريق بين الأنواع من نفس الجنس. على سبيل المثال ، S. haemolyticus و S. warneri سلبي تخثر الدم وبيتا الانحلالي Staphylococcus ، لكنهما يختلفان في أن S.

من ناحية أخرى ، نجح ماكنولتي في استخدام مرق اليوريا 2٪ من كريستنسن لدراسة وجود بكتيريا هيليكوباكتر بيلوري في عينات الخزعة المأخوذة من الغشاء المخاطي في المعدة (المنطقة الغارية).

يتضح وجود الحلزونية البوابية من خلال اختبار اليوريا الإيجابي. المدة الزمنية لملاحظة النتائج تتناسب طرديًا مع كمية الكائنات الحية الدقيقة الموجودة.

كما يتضح ، إنها طريقة بسيطة لتشخيص جرثومة الملوية البوابية في خزعات المعدة.

أخيرًا ، هذا الاختبار مفيد أيضًا في التمييز بين الأنواع من الأجناس Brucella و Bordetella و Bacillus و Micrococcus و Mycobacteria.

بذر اختبار اليوريا

تتطلب كلتا الطريقتين لقاحًا جرثوميًا قويًا لتحسين النتائج. يفضل أن تؤخذ المستعمرات البكتيرية من أجار الدم والخمائر من أجار سابورو ، مع استثناءات قليلة. يتم استحلاب اللقاح في الوسط السائل.

بالنسبة لمرق ستيوارت لليوريا ، احضنها عند 37 درجة مئوية لمدة 24 إلى 48 ساعة ، مع العلم أنك تبحث فقط عن سلالات المتقلبة عندما تكون السلالة عبارة عن بكتيريا. بالنسبة للخمائر ، يمكن تحضينها عند 37 درجة مئوية أو في درجة حرارة الغرفة لمدة 24 إلى 48 ساعة من الحضانة.

في حالة مرق اليوريا من كريستنسن ، يتم تحضينها عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة. إذا كان الاختبار سلبيًا ، فيمكن احتضانه لمدة تصل إلى 6 أيام. إذا كان الاختبار إيجابيًا قبل 6 ساعات ، فهذا يشير إلى أنها سلالة من جنس Proteus.

في حالة أجار اليوريا من كريستنسن ، يتم تلقيح شطبة أجار بقوة ، دون ثقب. يتم تحضين المرق وتفسيره بنفس الطريقة.

سؤال وجواب

يمكن استخدام سلالات التحكم مثل Proteus mirabilis ATCC 43071 و Klebsiella pneumoniae ATCC 7006003 و Escherichia coli ATCC 25922 و Salmonella typhimurium لاختبار الوسط. يجب أن يعطي الأول والثاني نتائج إيجابية وآخر نتيجتين سلبيتين.

المصدر: Koneman E، Allen S، Janda W، Schreckenberger P، Winn W. (2004). التشخيص الميكروبيولوجي. 5th إد. التحرير Panamericana SA Argentina.

المراجع

1. بيريز سي ، جويتيا ك. ، ماتا إس ، هارتونج سي ، كوليلا إم ، رييس إتش وآخرون. استخدام مرق اليوريا من ستيوارت لاختبار اليورياز ، كاختبار في تشخيص الخميرة. القس س. فين. ميكروبيول. 2002 ؛ 22 (2): 136-140. متاح على: Scielo.org.
2. ماك فادن ج. (2003). الاختبارات البيوكيميائية لتحديد البكتيريا ذات الأهمية السريرية. الطبعة الثالثة. افتتاحية بان أميريكانا. بوينس ايرس. الأرجنتين.
3. Forbes B، Sahm D، Weissfeld A. (2009). بيلي وسكوت التشخيص الميكروبيولوجي. 12 إد. التحرير Panamericana SA Argentina.
4. Koneman E ، Allen S ، Janda W ، Schreckenberger P ، Winn W. (2004). التشخيص الميكروبيولوجي. 5th إد. التحرير Panamericana SA Argentina.
5. مختبرات بريتانيا. كريستنسن ميديوم (قاعدة اليوريا أجار) 2015 متاح في: britanialab.com