ميديو ميو: الأساس والتحضير والاستخدامات - مادة الاحياء - 2026

في المتوسط MIO هو اختبار الكيمياء الحيوية تستخدم للمساعدة في تحديد الأنواع من البكتيريا التي تنتمي إلى عائلة المعوية. إنه مغذي للغاية ويتكون من الجلوكوز وخلاصة الخميرة والببتون والتريبتين و L-ornithine hydrochloride و bromocresol purple و agar.

يصف معنى اختصاره (MIO) كل من المعلمات التي يمكن ملاحظتها في هذا الوسيط ؛ الحركة ، الإندول والأورنيثين. الحركة هي قدرة الكائنات الحية الدقيقة على التحرك بسبب وجود الأسواط. من أجل ملاحظة هذه الخاصية ، يجب أن يكون اتساق الوسط شبه صلب ، لذلك يحتوي المستحضر على أجار أقل.

الخطوط العريضة لتفسير النتائج في وسيط MIO. المصدر: من إعداد المؤلف ماجستير. مارييلسا جيل

يُظهر إنتاج الإندول وجود إنزيم التربتوفاناز الذي يعمل على الحمض الأميني التربتوفان ، مما يتطلب استخدام كاشف كاشف لجعل إنتاج الإندول مرئيًا.

أخيرًا ، يحدد Ornithine ما إذا كانت البكتيريا قادرة على نزع الكربوكسيل من الحمض الأميني ، أي إذا كان يحتوي على إنزيم orinithine decarboxylase.

أساس

الببتون وخلاصة الخميرة والتريبتين

تساهم هذه العناصر في القوة الغذائية لهذا الوسط. أنها بمثابة مصدر للمواد الغذائية والأحماض الأمينية الأساسية لتنمية البكتيريا.

بالإضافة إلى ذلك ، يعتبر التريبتين مصدرًا للتربتوفان لإظهار وجود إنزيم التربتوفاناز ، الذي يحلل التربتوفان عن طريق نزع الأمين المختزل ، ويطلق الإندول وحمض البيروفيك والأمونيا والطاقة.

الإندول عديم اللون ، لذلك يتم الكشف عن وجوده بإضافة خمس قطرات من كاشف Ehrlich أو Kovacs ، وكلاهما مع p-dimethylaminobenzaldehyde.

تتفاعل مجموعة الألدهيد لهذا المركب مع الإندول ، مما ينتج عنه منتج أحمر فوشيا على شكل حلقة على سطح الأجار.

يجب اعتبار أي أثر للون اختبارًا إيجابيًا. يجب قراءة الدليل على الفور ، حيث يتدهور اللون بمرور الوقت.

علاوة على ذلك ، يجب الكشف عن هذا الاختبار بعد ملاحظة نتائج الحركة ونزع الكربوكسيل من الأورنيثين.

ترجمة

اختبار إيجابي: تشكيل حلقة حمراء ضارب إلى الحمرة عند إضافة قطرات من كاشف Kovacs.

الاختبار السلبي: عدم تشكيل الحلقة.

الحركة

ستكون قدرة البكتيريا على الحركة واضحة إذا لوحظ وجود وسط غائم أو إذا كان هناك خط نمو سميك يتوسع حول التلقيح الأولي.

سيكون اختبار الحركة السلبي واضحًا من خلال ملاحظة خط رفيع من النمو ، وسيكون كل شيء حوله بدون نمو.

من المهم أن تتم قراءة الحركة قبل الكشف عن الإندول ، حيث أن إضافة غيوم الكاشف الوسيط بأكمله.

في البكتيريا المتنقلة ولكن بطيئة النمو ، من الصعب إثبات حركتها بهذه الوسيلة. في هذه الحالة ، يوصى باستخدام اختبارات أو طرق أخرى ، مثل الحركة المتوسطة أو طريقة انتظار السقوط.

الجلوكوز

الجلوكوز هو الكربوهيدرات القابلة للتخمر التي ، بالإضافة إلى توفير الطاقة ، تحمض البيئة ، وهو شرط ضروري لحدوث نزع الكربوكسيل من الحمض الأميني الأورنيثين.

يجب أن يحدث تخمر الجلوكوز دائمًا ، بدءًا من المبدأ القائل بأن جميع البكتيريا التي تنتمي إلى عائلة Enterobacteriaceae تخمر الجلوكوز.

L- الأورنيثين

في حالة إنتاج البكتيريا لإنزيم ornithine decarboxylase ، فقد يعمل هذا بمجرد تحمض الوسط عن طريق تخمر الجلوكوز.

يعمل إنزيم ornithine decarboxylase على مجموعة الكربوكسيل من الأحماض الأمينية وينتج أمينًا يسمى بوتريسين الذي يجعل الوسط قلويًا مرة أخرى.

يجب قراءة هذا الاختبار بعد 24 ساعة من الحضانة ، لأنك إذا حاولت القراءة قبل أن تتمكن من تفسير الاختبار بشكل خاطئ.

يجب أن نتذكر أن أول رد فعل يحدث هو تخمر الجلوكوز ، لذلك يتحول الوسط إلى اللون الأصفر في المرحلة الأولية (أول 10 إلى 12 ساعة). إذا حدث نزع الكربوكسيل الأورنيثين لاحقًا ، فسوف يتحول الوسط إلى اللون الأرجواني.

من المهم تفسير اختبار إزالة الكربوكسيل من الأورنيثين قبل الكشف عن إندول ، حيث أن إضافة كاشف كوفاكس يغير لون الوسط.

ترجمة

اختبار سلبي: متوسط ​​ذو لون أصفر أو بخلفية صفراء.

الاختبار الإيجابي: متوسط ​​أرجواني تمامًا.

مؤشر PH

في هذه الحالة ، يتم استخدام البروموكريسول الأرجواني ؛ الشخص المسؤول عن الكشف عندما يكون هناك تغيير في درجة الحموضة في الوسط. عند التحميض ، يتحول المؤشر إلى اللون الأصفر ، وعند القلوية ، يتحول إلى اللون الأرجواني.

تقنية البذر والتطوير

لزرع وسط MIO ، يتم استخدام حلقة أو إبرة مستقيمة ومعها يتم جمع جزء من المستعمرة المراد دراستها.

يتم إجراء ثقب عميق في منتصف MIO ​​في خط مستقيم. لا يُنصح بإجراء ثقب مزدوج ، لأنه يمكن أن يعطي صورة خاطئة للحركة إذا لم يتم تنفيذ الثقوب في نفس المكان.

احتضان لمدة 24 إلى 48 ساعة عند 37 درجة مئوية في الهوائية. انظر إلى النتائج بهذا الترتيب: الحركة ، نزع الكربوكسيل من الأورنيثين وأخيراً كشف الإندول.

يُنصح بإزالة 2 مل من الوسط بطريقة معقمة ، ونقلها إلى أنبوب معقم وإجراء اختبار إندول هناك ، بحيث إذا كانت سلبية ، يمكن تحضين بقية الأنبوب الأصلي لمدة 24 ساعة أخرى ، للكشف عن الإندول مرة أخرى.

يتم تطوير الإندول على النحو التالي: يتم إضافة 3 إلى 5 قطرات من كاشف Kovacs إلى وسط MIO ويتم تقليبها بقوة. ويلاحظ ظهور حلقة ضارب إلى الحمرة أم لا.

تجهيز

متوسط ​​MIO

تزن 31 جم من وسط MIO وتذوب في لتر واحد من الماء المقطر.

سخني المزيج حتى يغلي لمدة دقيقة ، ورجيه بشكل متكرر حتى يذوب الأجار تمامًا. قم بتوزيع 4 مل من الوسط في أنبوب اختبار 13/100 بأغطية قطنية.

تعقيم في الأوتوكلاف عند 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. أخرجه من الأوتوكلاف واتركه مستقيماً في الرف ، بحيث يتم تشكيل كتلة شبه صلبة.

يحفظ فى الثلاجة 2-8 درجة مئوية. اتركه يسخن قبل نثر السلالة البكتيرية.

لون الوسط المجفف هو البيج ولون الوسط المحضر أرجواني براق قليلاً.

الرقم الهيدروجيني النهائي للوسط المحضر هو 6.5 ± 0.2

يتحول الوسط إلى اللون الأصفر عند درجة الحموضة الحمضية ويتحول إلى اللون الأرجواني عند درجة الحموضة القلوية.

Kovacs Reagent (مطور اختبار Indole)

يتم تحضير هذا الكاشف على النحو التالي:

يتم قياس 150 مل من كحول الأميل أو الأيزو أميل أو البوتيل (أي من الثلاثة). في ذلك يتم إذابة 10 غرام من p-dimethylaminobenzaldehyde. بعد ذلك يضاف 50 مل من حمض الهيدروكلوريك المركز ببطء.

الكاشف المحضر عديم اللون أو أصفر فاتح. يجب حفظها في زجاجة كهرمانية وحفظها في الثلاجة. يظهر اللون البني الغامق تدهورها.

كما يمكن أيضًا استبدال كاشف Kovacs بكاشف Ehrlich. يُفضل أن تكشف الأخيرة ، كونها أكثر حساسية ، عن الإندول في البكتيريا التي تنتجها بكميات دقيقة ، كما هو الحال في بعض العصي غير المخمرة سالبة الجرام وبعض اللاهوائية.

استعمال

هذا الوسط اختبار يكمل مجموعة من الاختبارات البيوكيميائية لتحديد البكتيريا التي تنتمي إلى عائلة Enterobacteriaceae.

تعمل بيانات إزالة الكربوكسيل من الأورنيثين على التفريق بين الشيغيلا سوني ، والتي تكون نتائجها إيجابية ، عن الشيغيلة بويدي ، والشيغيلة المرنة ، والبكتريا الزحارية ، والتي كانت نتيجة اختبارها سلبية.

كما أنه يميز جنس Klebsiella ، الذي تكون نتائج الاختبارات سالبة ، عن جنس Enterobacter ، حيث تكون نتيجة اختبار معظم أنواعه إيجابية.

المصدر: Koneman E، Allen S، Janda W، Schreckenberger P، Winn W. (2004). التشخيص الميكروبيولوجي. 5th إد. التحرير Panamericana SA Argentina.

سؤال وجواب

في كل مرة يتم فيها تحضير دفعة من وسيط MIO ، يمكن إجراء اختبار تحكم. لهذا ، يتم استخدام السلالات المعروفة أو المعتمدة لمراقبة سلوك الوسيط.

السلالات التي يمكن استخدامها هي Escherichia coli و Morganella morganii و Klebsiella pneumoniae و Enterobacter aerogenes و Proteus mirabilis.

النتائج المتوقعة هي E. coli و M. morganii. دان م: + ، أنا: + و س: +.

Klebsiella pneumoniae كلها سلبية (M: - ، I: - ، O:-). تعطي المتقلبات الرائعة والمتقلبة الهوائية المعوية M: + I: - و O: +.

المراجع

1. ماك فادن ج. (2003). الاختبارات البيوكيميائية لتحديد البكتيريا ذات الأهمية السريرية. الطبعة الثالثة. افتتاحية بان أميريكانا. بوينس ايرس. الأرجنتين.
2. Forbes B، Sahm D، Weissfeld A. (2009). بيلي وسكوت التشخيص الميكروبيولوجي. 12 إد. التحرير Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E ، Allen S ، Janda W ، Schreckenberger P ، Winn W. (2004). التشخيص الميكروبيولوجي. 5th إد. التحرير Panamericana SA Argentina.
4. مختبرات بريتانيا. MIO Medio 2015 متاح على: britanialab.com
5. مختبرات BD. BBL Motility Indole Ornithine (MIO) متوسط. 2007. متاح في: bd.com
6. مختبرات Valtek. متوسط ​​حركة MIO ، إندول ، أورنيثين. 2010 متاح على: andinamedica.com