تفاعل XANTHOPROTEIN: الأساس المنطقي ، الإجراء ، الاستخدام - كيمياء - 2024

في رد فعل زانثوبروتين هو إجراء الكيميائية المستخدمة لتحديد وجود أو عدم وجود الأحماض الأمينية العطرية، مثل التيروسين والتريبتوفان، والتي يمكن أن تكون في شكل حر أو تشكل البروتينات القابلة للذوبان، والببتيدات أو البروتينية.

كما تم استخدامه للكشف عن المواد السامة في الدم التي تحتوي على مجموعة بنزين في تركيبها. يُعرف هذا الاختبار أيضًا باسم تفاعل بيشر xanthoprotein.

رد فعل إيجابي للبروتين xanthoprotein المصدر: مأخوذ من الفيديو:

يستخدم تفاعل البروتين xanthoprotein حامض النيتريك المركز والحرارة وقلوي معادل. إذا تحول المحلول من الأصفر إلى البرتقالي بعد تحييد التفاعل ، يعتبر الاختبار إيجابيًا. يرجع التلون الملحوظ إلى تكوين المركبات النيتروجينية المشتقة من نترجة مجموعات البنزين.

إذا كان من الضروري تحديد كمية البروتين الكلي ، فمن الضروري استخدام طرق أخرى لتحديد البروتين ، مثل Biuret.

يستخدم تفاعل البروتين xanthoprotein بشكل أساسي عند تحليل المواد التي لا يُعرف تركيبها الكيميائي. عادة ما يكون هذا التفاعل جزءًا من مجموعة من الاختبارات التي ستساعد في تحديد التركيب الكيميائي لمادة أو مستخلص معين. هذا هو السبب في استخدامه على نطاق واسع من قبل الباحثين.

من ناحية أخرى ، يتم استخدام تفاعل Becher xanthoprotein للكشف عن المواد الفينولية والإندول في الدم ، مما يجعل من الممكن التنبؤ بظهور اعتلال الكلية ، قبل زيادة المعلمات اللاحقة الأخرى.

أساس

يكتشف التفاعل أساسًا وجود مجموعة البنزين ، في كل من الأحماض الأمينية ، وكذلك في البروتينات والببتيدات. يعمل حمض النيتريك على حلقة البنزين من الأحماض الأمينية التي تمتلكها ، مكونًا مركبات نيترو الفينولية.

يحتاج التفاعل إلى حرارة ليتم إجراؤه ، بشكل عام يتم تكوين راسب يقوم بسحب الوسط ، مما يجعله حليبيًا. يمكن أن يكون الراسب أبيض أو أصفر. أخيرًا ، يتطلب خطوة قلوية تبرز اللون. لهذا الغرض ، يتم استخدام قاعدة مثل 40 ٪ هيدروكسيد الصوديوم أو الأمونيا.

سيتم تفسير التفاعل على أنه إيجابي إذا لوحظ لون أصفر قوي أثناء عملية التسخين أو برتقالي داكن عند قلونة التفاعل. الأحماض الأمينية التي يكتشفها هي بشكل أساسي التيروزين والتربتوفان.

تفاعل Xanthoprotein. المصدر:

في حالة فينيل ألانين ، على الرغم من أنه حمض أميني عطري ، إلا أنه من الصعب نواة نواة البنزين لهذا الحمض الأميني في تفاعل بسيط ، وبالتالي ، فإنه سينبعث منه تفاعل إيجابي سلبي أو ضعيف.

بشكل عام ، يمكن استكمال اختبار البروتين xanthoprotein باختبار Hopkins-Cole ، والذي يستخدم لتحديد التربتوفان على وجه التحديد. إذا كان اختبار البروتين xanthoprotein إيجابيًا وكان اختبار Hopkins-Cole سالبًا ، فإن وجود التربتوفان في هذا المحلول مستبعد ، مما يشير إلى وجود التيروزين بشكل أساسي. وبالمثل ، يمكن أيضًا استكماله برد فعل Millon للكشف عن التيروزين ، من بين أشياء أخرى.

يمكن أيضًا استخدام هذا التفاعل على عينات من الدم أو البلازما أو مصل مُحلى للألمنيوم لتشخيص التبول في الدم أو الفشل الكلوي. في هذه الحالة ، فإن المطلوب هو الكشف عن المواد السامة (الفينولية والإندول) الناتجة عن التعفن المعوي.

تحتوي هذه المواد على مجموعة البنزين وبالتالي تعطي تفاعلًا إيجابيًا للبروتين xanthoprotein ، على الرغم من أن المادة المتفاعلة ليست حمض أميني ولا بروتين.

معالجة

- تفاعل Xanthoprotein للكشف عن الأحماض الأمينية ذات المجموعات العطرية

ضع 1 مل من عينة الاختبار في أنبوب اختبار نظيف وجاف.

- يضاف 0.5 مل من حامض النيتريك المركز.

- احضري الخليط في حمام مائي على حرارة 70 درجة مئوية لمدة دقيقتين. تحضير الحمام المائي مسبقًا على درجة الحرارة المذكورة.

- عند إزالة الأنبوب من الحمام المائي ، من الممكن ملاحظة أن المحلول قد تحول إلى حليبي واتخذ لونًا أبيض مائلًا للصفرة.

- يبرد المحلول بإسقاط الماء البارد على قاعدة الأنبوب.

- يتم تحضير المستحضر قلويًا عن طريق إضافة (قطرة بقطرة) ببطء محلول هيدروكسيد الصوديوم بنسبة 40٪ حتى يتغير اللون.

- إذا كان الاختبار إيجابيًا ، فستتكون حلقة برتقالية داكنة على واجهة السوائل.

- إذا كان رد الفعل سلبيًا ، فلن يكون هناك تكوين للون.

- تفاعل Xanthoprotein للكشف عن وجود المواد الفينولية والإندولية في الدم

- ضعي 5 سم مكعب من 20٪ حمض ثلاثي كلورو أسيتيك على 5 سم مكعب من الدم الوريدي أو البلازما أو المصل ، وهذا الأخير هو الأكثر استخدامًا. تخلط جيدا وتصفية.

- يؤخذ 2 مل من المرشح ويخلط مع 0.5 مل من حامض النيتريك. ثم يتم تسخينه حتى الغليان ، لهذا يتم وضع الأنبوب مباشرة فوق اللهب الأخف لمدة 30 ثانية. يبرد بالماء ويضاف 1.5 من 33٪ كلوريد الصوديوم.

يتم تفسيره على النحو التالي:

- النتيجة السلبية: لون مصفر.

-نتائج إيجابية (+) ليمون أصفر.

- (++) ذهبي أصفر.

- (+++) أصفر غامق إلى بني

يمكن أيضًا تفسيره باستخدام مقياس Autenrieth اللوني المرجعي ، والذي يتكون من تركيزات مختلفة من ثنائي كرومات البوتاسيوم. يتم تحضير هذا في 10 من 10 تخفيفات من محلول مخزون 0.03874٪. كل أنبوب يمثل نسبة مئوية.

جداول التفسير

هناك مقياسان للتفسير يسمى القديم والحديث. القيم العادية هي:

الجدول القديم: بين 75 إلى 85٪

طاولة حديثة: بين 15 إلى 25٪

إذا كان لون أنبوب الاختبار في منتصف أنبوبين قياسيين ، يتم عمل متوسط ​​بين القياسين.

يتم تحضير المحلول القياسي ثنائي كرومات البوتاسيوم على النحو التالي: يتم قياس 7.9 مل من 10 N ثنائي كرومات البوتاسيوم وتصنيعه حتى 100 مل في دورق حجمي. يتم اتباع التخفيفات كما هو موضح في جدول Autenrieth اللوني.

الجدول اللوني Autenrieth. المصدر: Vásquez A.Xanthoprotein reaction. المجلة الطبية الاسبانية. 1949 ؛ 35 (5): 326-327. متوفر في: Elsevier

استعمال

يعد استخدام تفاعل البروتين xanthoprotein جزءًا من مجموعة من الاختبارات الكيميائية الحيوية التي تساعد على معرفة التركيب الكيميائي لبعض المواد غير المعروفة. يساهم هذا الاختبار في التحليل الكيميائي في الكشف عن البروتينات التي تحتوي على مجموعات بنزين في بنيتها.

يستخدم هذا التفاعل على نطاق واسع من قبل الباحثين في دراسات مختلفة للمواد ذات الأهمية.

بهذا المعنى ، استخدم فاسكيز خورخي ومعاونوه هذه التفاعلات وغيرها للتحقيق في محتوى البروتين في السوائل المستخرجة من محار المنغروف (Crassostrea rhizophorae).

وبالمثل ، استخدم روجاس وآخرون (2009) سلسلة من الاختبارات ، بما في ذلك تفاعل البروتين الزانثوبروتيني ، لتحليل ببتيدات الجليكوما في رواسب مصل الريكوتا.

من ناحية أخرى ، تم تعديل تفاعل Becher xanthoprotein بواسطة Volhard لاستخدامه لأغراض أخرى. في هذه الحالة ، للكشف عن المواد الفينولية والإندول التي يمكن أن ترتفع قبل ذلك بكثير (أسابيع أو أشهر) قبل زيادة مستويات اليوريا والنيتروجين المتبقي في الدم.

تتكون هذه النفايات السامة من تعفن الطعام المعوي.

تتراكم هذه المواد في الدم عندما لا يتم التخلص منها بشكل صحيح ، وبالتالي ، يمكن أن يتنبأ اختبار البروتين xanthoprotein الإيجابي بالبدء المبكر للفشل الكلوي الصحيح أو حالة التبول في الدم.

اعتمادًا على شدة اللون ، يمكنك تحديد مدى تقدمه. في هذه الحالة يكون الاختبار كميًا.

يعطي هذا الاختبار في الأشخاص الأصحاء لونًا أصفر طفيفًا ، يتوافق مع المستويات الطبيعية من التربتوفان والتيروزين التي قد تكون في الدم.

بينما ، في مرضى الكلى ، يكون تفاعل البروتين الزانثوبروتيني إيجابيًا بشدة بسبب وجود المواد التالية: الفينول ، الإندول ، باراكريسول ، الأوكسي أسيد العطري ، من بين أمور أخرى.

الاحتياطات

يجب إجراء هذا الاختبار من قبل محترفين مدربين. يجب مراعاة جميع لوائح السلامة الحيوية ، حيث أن الكواشف المستخدمة هي أحماض وقواعد أكالة.

إذا سقطت بضع قطرات من حمض النيتريك عن طريق الصدفة على الجلد أو الأظافر ، فسوف تتحول إلى اللون الأصفر ، لأن كلا الهيكلين يحتويان على بروتينات. بالإضافة إلى ذلك ، فإنه يسبب حروقًا شديدة على الجلد والأغشية المخاطية.

في حالة حدوث ملامسة للجلد ، يجب أن يكون البروتوكول الذي يجب اتباعه هو غسل المنطقة فورًا بالماء والصابون لمدة 20 دقيقة تقريبًا.

إذا تناثرت في العين ، يجب غسلها بكمية كبيرة من الماء العذب ، محاولًا إبقاء العينين مفتوحتين.

المراجع

1. "تفاعل البروتين Xanthoprotein" ويكيبيديا ، الموسوعة الحرة. 2 سبتمبر 2019، 17:49 UTC. 21 أكتوبر 2019 ، 20:31 wikipedia.org/
2. Vásquez-Jorge Y، Guerra-Molina L، Quintana-Tamayo J، Ramírez-Arzuaga J، Fernando-Ballesteros R، Vásquez-Jorge Y. التوصيف الفيزيائي الكيميائي ومحتوى البروتين لمستخلصات السوائل من محار المنغروف (Crassostrea rhizophorae). القس كوبانا دي كويميكا ، 2014 ؛ 26 (1): 66-74. متوفر في Redalyc.
3. Rojas E ، Valbuena E ، Torres G ، García A ، Piñero M ، Galindo L. عزل وأداء GMP عن طريق ترسيب مصل اللبن مع حمض ثلاثي كلورو أسيتيك. سيينت. (ماراكايبو) 2009 ؛ 19 (3): 295-302. متاح في: ve.scielo.
4. تفاعل Vásquez A. Xanthoprotein. المجلة الطبية الاسبانية. 1949 ؛ 35 (5): 326-327. متوفر في: Elsevier
5. Gálvez I، Gárate O. ردود فعل Becher و Andrewes في جراحة المسالك البولية. خدمة جراحة المسالك البولية في المستشفى الاسباني. المجلة الأرجنتينية لجراحة المسالك البولية 395-404