و أجار EMB هو انتقائية والمتوسطة التفاضلية المستخدمة لعزل الصلبة ثقافة سلبية الغرام العصيات، وخاصة المعوية وغيرها من البكتيريا سلبية الغرام المتساهلة. ومن المعروف أيضًا بالاختصار EAM ، والذي يرمز إلى اللون الأزرق eosin-methylene.
تم إنشاء هذا الوسط بواسطة Holt-Harris and Teague في عام 1916. يحتوي على الببتون واللاكتوز والسكروز وفوسفات ثنائي البوتاسيوم والأجار ويوزين والميثيلين الأزرق والماء. إنه مشابه جدًا لـ MacConkey Agar ، خاصة عند استخدام Levine المعدل EMB Agar ، والذي لا يحتوي على السكروز.
اللمعان المعدني للإشريكية القولونية على أجار EMB المصدر: كارمن مورينو غونزاليس ، من ويكيميديا كومنز
في الواقع ، يقرر كل مختبر ما إذا كان سيعمل مع أحدهما أو الآخر ، نظرًا لأنهما يؤديان نفس الوظيفة ، على الرغم من اختلافهما من الناحية الكيميائية الحيوية.
حتى أن لها نفس عيب أجار MacConkey الكلاسيكي من حيث إنتاج الحشود بواسطة جنس Proteus. لذلك ، لتجنب هذه الظاهرة ، يمكن زيادة تركيز أجار بنسبة تصل إلى 5٪.
أساس
انتقائي
يعتبر أجار EMB انتقائيًا ببراعة لأنه يحتوي على أصباغ الأنيلين (إيوزين وميثيلين أزرق) ، والتي تعمل كمثبطات ، وتمنع نمو معظم البكتيريا موجبة الجرام وبعض قضبان سالبة الجرام شديدة الحساسية.
ومع ذلك ، فإن هذا الأجار له عيب يتمثل في أن بعض البكتيريا موجبة الجرام يمكن أن تقاوم وجود المواد المثبطة وتنمو كمستعمرات صغيرة عديمة اللون ، مثل Enterococcus faecalis وبعض المكورات العنقودية.
يمكن أيضًا أن تنمو بعض الخمائر ، مثل مركب Candida albicans ، والذي سيعطي مستعمرات وردية صغيرة جدًا. يمكن أن تتطور Chlamydospores من هذه الخميرة إذا كانت العينة بذر عميق.
التفاضليه
من ناحية أخرى ، يعتبر أجار EMB أيضًا وسيطًا تفاضليًا ، نظرًا لأن هذه الأصباغ معًا (eosin و methylene blue) لها خاصية تكوين راسب عند درجة الحموضة الحمضية ، وبالتالي فهي تعمل كمؤشرات على إنتاجها.
وهكذا ، تنتج بكتيريا تخمير اللاكتوز أو السكروز الضعيفة مستعمرات أرجوانية في غضون 24 إلى 48 ساعة. على سبيل المثال ، أجناس Klebsiella و Enterobacter و Serratia.
تلك البكتيريا التي تخمر اللاكتوز بقوة ، مثل Escherichia coli أو السكروز ، مثل Yersinia enterocolitica أو Proteus penneri ، تشكل راسبًا أسود مخضرًا ، مما يعطي مظهرًا معدنيًا مميزًا في هذه الأنواع.
وتجدر الإشارة إلى أنه إذا تم استخدام وسط ليفين EMB (بدون سكروز) ، فإن Yersinia enterocolitica و Proteus penneri سينتجان مستعمرات صافية.
البكتيريا التي لا تخمر اللاكتوز أو السكروز تتغذى من خلال وجود البيبتون ، التي توفر الأحماض الأمينية والنيتروجين الضروريين لنمو البكتيريا ، وتنتج مستعمرات صافية. على سبيل المثال ، جنس Salmonella و Shigella ، من بين آخرين.
وبالمثل ، من المهم أن نلاحظ أن جنس Acinetobacter يمكن أن يقدم مستعمرات اللافندر الأزرق ، على الرغم من أنه ليس مخمرًا للاكتوز أو سكروز ، ولكنه يمتلك خاصية تثبيت الميثيلين الأزرق على جدار الخلية. يمكن أن يحدث هذا أيضًا مع البكتيريا المؤكسدة الأخرى.
تجهيز
الوسط الأصلي المجفف لونه بيج فاتح.
لتحضير وسط الاستزراع هذا ، يجب وزن 36 جرامًا من الوسط المجفف وتعليقه في دورق يحتوي على لتر واحد من الماء المقطر.
بعد ترك الخليط يرتاح لمدة 5 دقائق ، خذ القارورة إلى مصدر حرارة واخلط بقوة وباستمرار حتى يغلي ويذوب تمامًا.
بعد ذلك ، يجب تعقيم وسط الاستزراع المذاب بالفعل باستخدام الأوتوكلاف عند 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.
في نهاية الوقت ، يتم إزالته من الأوتوكلاف ويترك للوقوف لفترة وجيزة. بعد ذلك ، لا يزال دافئًا (45-50 درجة مئوية) ، يتم تقديم 15-20 مل من أجار في كل طبق بتري معقم. يجب أن يكون الوسط أزرق عباد الشمس.
بعد التقديم ، تُترك الأطباق مكشوفة قليلاً حتى يبرد الأجار قليلاً. ثم يتم تغطيتها وتركها لتصلب تمامًا. بعد ذلك ، يتم ترتيبها في حاملات أطباق مقلوبة وتخزينها في الثلاجة (8 درجات مئوية) حتى الاستخدام.
يُفضل أن يتم تنفيذ هذا الإجراء في غطاء تدفق رقائقي أو أمام موقد بنسن لتجنب التلوث.
من المهم أن تضع في اعتبارك أن كل بيت تجاري سيشير إلى المقدار الذي يجب وزنه لإعداد وسط الثقافة.
يجب أن يكون الرقم الهيدروجيني النهائي للوسيط 7.2 ± 0.2
التطبيقات
تُستخدم هذه الوسيلة لزرع البول والبراز أو أي نوع من العينات السريرية ، خاصةً إذا كان هناك شك في وجود عصيات سالبة الجرام غير سريعة الحساسية ، مثل العصيات التي تنتمي إلى عائلة Enterobacteriaceae ، والتي تنمو جيدًا على هذا الوسط.
تتميز البكتيريا الممرضة للأمعاء من أجناس الشيغيلا والسالمونيلا بمستعمراتها عديمة اللون أو الكهرمانية قليلاً.
كما تنمو عصيات أخرى لا تحتوي على اللاكتوز مثل Aeromonas و Pseudomonas و Acinetobacter وغيرها.
وبالمثل ، فإن هذه الوسيلة مفيدة جدًا في التحليل الميكروبيولوجي للغذاء والماء ، حيث إنها مثالية لمرحلة التأكيد الكاملة لتحديد القولونيات ، أي لتأكيد وجود الإشريكية القولونية من مرق EC العكر ، من من أكثر تقنيات الأرقام احتمالية (MPN).
سؤال وجواب
للتحقق من أن وسط الاستزراع الطازج يعمل بشكل جيد ، يمكن زرع سلالات التحكم لمراقبة خصائص المستعمرات والتحقق من أنها تعطي كما هو متوقع.
لهذا الغرض ، يمكن استخدام سلالات ATCC أو سلالات محددة جيدًا من E. coli و Enterobacter aerogenes و Klebsiella sp و Salmonella typhimurium و Shigella flexneri و Pseudomonas aeruginosa وبعض البكتيريا موجبة الجرام ، مثل S. aureus.
من المتوقع أن تولد الإشريكية القولونية مستعمرات متطورة باللونين الأزرق والأسود مع بريق معدني أخضر. بينما ، يجب أن تعطي Enterobacter aerogenes و Klebsiella sp مستعمرات مخاطية سوداء مزرقة متطورة.
من ناحية أخرى ، يجب أن تطور Salmonella typhimurium و Shigella flexneri مستعمرات كبيرة ، عديمة اللون أو ذات لون كهرماني خفيف.
أخيرًا ، ينمو جنس Pseudomonas aeruginosa كمستعمرات عديمة اللون ذات حجم غير منتظم ، في حين أن البكتيريا موجبة الجرام يجب أن تُثبط تمامًا أو تنمو قليلًا مع مستعمرات صغيرة جدًا.
افكار اخيرة
يؤدي التعقيم أحيانًا إلى تقليل لون الميثيلين الأزرق ، مما يؤدي إلى ظهور لون برتقالي متوسط. من أجل أن يتأكسد الميثيلين الأزرق ويستعيد اللون الأرجواني ، يجب خلطه بلطف حتى يتم استعادة اللون.
أيضًا ، بعد التعقيم ، قد تترسب الصبغة ، لذا يجب خلطها جيدًا قبل تقديم أطباق بتري.
المراجع
- كاماتشو أ ، جيلز إم ، أورتيغون أ ، بالاو إم ، سيرانو ب ، فيلاسكيز أو. 2009. تقنيات التحليل الميكروبيولوجي للأغذية. الطبعة الثانية. كلية الكيمياء UNAM. المكسيك.
- Carranza C، León R، Falcón N، Neumann A، Kromm C. توصيف وتوزيع سلالات الإشريكية القولونية المعزولة من دجاج التسمين من مزارع الدواجن في بيرو. القس التحقيق دكتور بيطري. بيرو 2012 23 (2): 209-219. متاح على: scielo.org.
- مختبرات كوندا سا يوزين وميثيلين بلو أجار. 2010. متاح في: condalab.com
- مختبرات بريتانيا. Levine EMB (مع Eosin و Methylene Blue) 2011 ، متاح في: britanialab.com
- مختبرات BD. BD EMB Agar (Eosin Methylene Blue Agar) ، معدل. 2013 متاح في: bd.com
- Koneman E ، Allen S ، Janda W ، Schreckenberger P ، Winn W. (2004). التشخيص الميكروبيولوجي. (الطبعة الخامسة). الأرجنتين ، الافتتاحية Panamericana SA
- Forbes B، Sahm D، Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 إد. الأرجنتين. التحرير Panamericana SA