وصمة غيمسا: الأساس المنطقي والمواد والتقنية والاستخدامات - مادة الاحياء - 2026

و صمة عار بالغيمزا هو نوع من التلوين العينات السريرية، على أساس مزيج من الأصباغ الحمضية والأساسية. تم استلهام إنشائه من العمل الذي قام به رومانوفسكي ، حيث أتقنه جوستاف جيمسا ، الكيميائي وعالم الجراثيم الأصل من ألمانيا ، بإضافة الجلسرين لتثبيت المركبات.

سمحت التغييرات التي تم إجراؤها على تقنية Romanowsky الأصلية بتحسين الملاحظات المجهرية إلى حد كبير ، لذلك تم اعتماد التقنية باسم صبغة Giemsa.

عينات مختلفة ملطخة بصبغة جيمسا. A. المثقبية إيفانسي في الدم المحيطي. خلايا الدم الطبيعية. C. Borrelia theileri في الدم المحيطي. د. سرطان الغدد الليمفاوية بوركيت.

نظرًا لأنها تقنية بسيطة في الأداء وعملية للغاية واقتصادية ، فهي تستخدم حاليًا على نطاق واسع في المختبر السريري لمسحات الدم وعينات النخاع العظمي وأقسام الأنسجة.

تعد تقنية تلطيخ Giemsa مفيدة جدًا للدراسات الخلوية ، لأنها تسمح بمراقبة هياكل الخلايا المحددة. هذه التقنية تلطخ السيتوبلازم ، النوى ، النوى ، الفجوات وحبيبات الخلايا ، لتكون قادرة على تمييز حتى آثار الكروماتين الدقيقة.

علاوة على ذلك ، يمكن الكشف عن تغيرات كبيرة في حجم أو شكل أو لون النواة ، حيث يمكن تصور فقدان العلاقة بين النواة والسيتوبلازم.

من ناحية أخرى ، فإنه يسمح بتحديد الخلايا غير الناضجة في نخاع العظام والدم المحيطي ، وهو مهم لتشخيص الأمراض الخطيرة مثل سرطان الدم. من الممكن أيضًا الكشف عن الطفيليات الدموية والبكتيريا الزائدة وداخل الخلايا والفطريات وغيرها.

في علم الوراثة الخلوية ، يتم استخدامه على نطاق واسع ، لأنه من الممكن دراسة الانقسام الخلوي للخلايا.

أساس تلطيخ جيمسا

تعتمد الأصباغ من نوع رومانوسكي على استخدام التباين بين الأصباغ الحمضية والقاعدية ، لتحقيق تلطيخ الهياكل الأساسية والحمضية على التوالي. كما يتضح ، هناك تقارب بين الأصباغ الحمضية لتلطيخ الهياكل الأساسية والعكس صحيح.

الصبغة الأساسية المستخدمة هي الميثيلين الأزرق ومشتقاته المؤكسدة (Azure A و Azure B) ، بينما الصبغة الحمضية هي eosin.

الهياكل الحمضية للخلايا هي الأحماض النووية ، وحبيبات الخلايا القاعدية المجزأة ، من بين أمور أخرى ، وبالتالي سوف تكون ملطخة بأزرق الميثيلين.

وبنفس المعنى ، فإن الهياكل الأساسية للخلايا هي الهيموغلوبين وبعض الحبيبات مثل تلك الموجودة في الحمضات المقسمة ، من بين أمور أخرى ؛ هذه سوف تكون ملطخة مع يوزين.

من ناحية أخرى ، نظرًا لحقيقة أن الميثيلين الأزرق والأزرق السماوي يتميزان بكونهما ملونات متغيرة اللون ، فيمكنهما توفير تدرج متغير للهياكل المختلفة وفقًا لحمل البوليانيونات التي تمتلكها.

هذه هي الطريقة التي يدير بها المزيج الاستراتيجي من الأصباغ الأساسية والحمضية تطوير مجموعة واسعة من الألوان ، وفقًا للخصائص الكيميائية الحيوية لكل بنية ، والمشي عبر درجات الأزرق الباهت والأزرق الداكن والأرجواني والأرجواني في حالة الهياكل الحمضية.

في حين أن اللون الذي يوفره eosin أكثر ثباتًا ، مما ينتج عنه ألوان بين البرتقالي المحمر والسلمون.

المواد

مواد لتحضير محلول المخزون

يتطلب تحضير محلول المخزون وزن 600 مجم من مسحوق بقع Giemsa ، بقياس 500 مل من كحول الميثيل الخالي من الأسيتون و 50 مل من الجلسرين المحايد.

كيفية تحضير محلول المخزون

ضع مسحوق Giemsa الثقيل في هاون. إذا كانت هناك كتل يجب رشها. أضف لاحقًا كمية ملحوظة من الجلسرين المقاس واخلط جيدًا. يُسكب الخليط الناتج في زجاجة كهرمان نظيفة جدًا.

يتم وضع بقية الجلسرين في الهاون. امزج مرة أخرى لتنظيف باقي الملون الذي التصق بجدران الهاون وصبه في نفس البرطمان.

الزجاجة مغطاة ووضعها في حمام مائي على درجة حرارة 55 درجة مئوية لمدة ساعتين. أثناء وجوده في حمام مائي ، رج الخليط برفق كل نصف ساعة أو نحو ذلك.

بعد ذلك ، يُسمح للخليط بالتبريد لوضع الكحول. في السابق ، يتم وضع جزء من الكحول المقاس في الهاون لإنهاء غسل الملون المتبقي ثم يضاف إلى الخليط مع باقي الكحول.

يجب ترك هذا المستحضر حتى ينضج لمدة أسبوعين على الأقل. يجب ترشيح الجزء المستخدم من محلول المخزون.

لتجنب تلوث المستحضر ، يوصى بنقل الجزء الذي سيكون قيد الاستخدام المستمر إلى زجاجة صغيرة من العنبر مع قطارة. أعد التعبئة في كل مرة ينفد فيها الكاشف

مواد لتحضير محلول العازلة

من ناحية أخرى ، يتم تحضير محلول عازل عند درجة الحموضة 7.2 على النحو التالي:

6.77 جم من فوسفات الصوديوم (لا مائي) (NaHPO ₄) ، 2.59 جم من فوسفات هيدروجين البوتاسيوم (KH ₂ PO ₄) والماء المقطر يصل وزنها إلى 1000 سم مكعب.

التحضير النهائي للملون

لتحضير محلول التلوين النهائي ، قم بقياس 2 مل من محلول المخزون المصفى واخلطه مع 6 مل من محلول المخزن المؤقت. يحرك الخليط.

الحقيقة ذات الصلة التي يجب أخذها في الاعتبار هي أن تقنيات تحضير التلوين قد تتغير اعتمادًا على المنزل التجاري.

المواد الإضافية اللازمة لأداء التلوين

بصرف النظر عن المواد الموصوفة ، يجب أن يكون لديك جسور تلوين أو قمصان بها ماء أو مخزن مؤقت للغسيل أو شرائح أو أغطية للأشياء أو ساعة توقيت للتحكم في أوقات التلوين وورق نشاف أو بعض المواد التي يمكن استخدامها للتجفيف (شاش أو قطن).

تقنية

عملية تلطيخ

1) قبل التلوين ، يجب أن تكون مسحة العينة جاهزة على شريحة نظيفة.

يمكن أن تكون العينات من الدم ، ونخاع العظام ، وأقسام الأنسجة النسيجية أو عينات عنق الرحم والمهبل. من المستحسن أن تكون الحيزات رقيقة وأن تجف لمدة ساعة أو ساعتين قبل التلوين.

2) ضع كل الأوراق التي يجب تلوينها على جسر التلوين. أنت تعمل دائمًا بنفس الترتيب ويتم تحديد كل ورقة بشكل جيد.

3) ضع بضع قطرات من كحول الميثيل 100٪ (ميثانول) على اللطاخة واتركها تعمل لمدة 3 إلى 5 دقائق لإصلاح العينة وتجفيفها.

4) تخلص من الميثانول الموجود على الورقة واتركه يجف في الهواء.

5) بمجرد أن يجف ، ضع محلول التلوين النهائي بقطارة حتى يتم تغطية الورقة بأكملها. اتركيه للعمل لمدة 15 دقيقة. يوصي بعض المؤلفين بمدة تصل إلى 25 دقيقة. هذا يعتمد على بيت الأعمال.

6) قم بتصفية البقعة وغسل اللطاخة بالماء المقطر أو بمحلول عازل 7.2.

7) على ورق نشاف ، اترك الأوراق تجف في الهواء الطلق ، مرتبة عموديًا بمساعدة دعامة.

8) نظف الجزء الخلفي من الشريحة بمسحة كحول أو مسحة قطنية لإزالة أي آثار للبقع.

خدمات

تُستخدم تقنية تلطيخ Giemsa في مجالات مختلفة ، بما في ذلك: أمراض الدم وعلم الفطريات وعلم الجراثيم وعلم الطفيليات وعلم الخلايا وعلم الوراثة الخلوية.

أمراض الدم

وهو الاستخدام الأكثر شيوعًا لهذه البقعة. مع ذلك ، يمكن التعرف على كل خلية موجودة في نخاع العظام أو عينات الدم المحيطي. بالإضافة إلى تقدير عدد كل سلسلة ، القدرة على اكتشاف زيادة عدد الكريات البيضاء أو قلة الكريات البيض ، قلة الصفيحات ، إلخ.

نظرًا لأنه حساس في تحديد الخلايا غير الناضجة ، فهو مناسب لتشخيص اللوكيميا الحادة أو المزمنة. من الممكن أيضًا إجراء تشخيص لفقر الدم ، مثل فقر الدم المنجلي ، فقر الدم المنجلي ، من بين أمور أخرى.

علم الفطريات

في هذا المجال ، يعد استخدامه شائعًا للبحث عن Histoplasma capsulatum (فطر ثنائي الشكل داخل الخلايا) في عينات الأنسجة.

علم الجراثيم

في مسحات الدم الملطخة بعلاج Giemsa ، يمكن الكشف عن Borrelias sp في المرضى الذين يعانون من مرض يسمى الحمى المتكررة. تكثر اللولبيات بين كريات الدم الحمراء ، في العينات المأخوذة في ذروة الحمى.

من الممكن أيضًا تصور البكتيريا داخل الخلايا مثل Rickettsia sp و Chlamydia trachomatis في الخلايا المصابة.

علم الطفيليات

في مجال علم الطفيليات ، أتاح تلوين Giemsa إمكانية تشخيص الأمراض الطفيلية مثل الملاريا ومرض شاغاس وداء الليشمانيات.

في أول طفيلين ، يمكن رؤية الطفيليات Plasmodium sp و Trypanosoma cruzi على التوالي في الدم المحيطي للمرضى المصابين ، ويمكن العثور عليها في مراحل مختلفة اعتمادًا على المرحلة التي يكون فيها المرض.

لتحسين البحث عن الطفيليات في الدم ، يوصى باستخدام صبغة Giemsa الممزوجة بصبغة May-Grünwald.

وبالمثل ، يمكن تشخيص داء الليشمانيات الجلدي من خلال تقييم عينات خزعة الجلد المصبوغة بجلد غيمسا حيث يوجد الطفيل.

علم الخلية

يستخدم تلوين Giemsa أيضًا في الدراسة الخلوية لعينات باطن عنق الرحم ، على الرغم من أنه ليس الأسلوب الأكثر استخدامًا لهذا الغرض.

ولكن في حالات ندرة الموارد ، يمكن استخدامه ، مع وجود وظائف مماثلة لتلك التي توفرها تقنية بابانيكولاو وبتكلفة أقل. ومع ذلك ، فإنه يتطلب خبرة من جانب الفاحص.

علم الوراثة الخلوية

من السمات ذات الصلة لتلوين Giemsa قدرته على الارتباط بقوة بمناطق الحمض النووي الغنية بالأدينين والثايمين. هذا يسمح بتصور الحمض النووي أثناء الانقسام الخلوي ، في حالات مختلفة من التكثيف.

هذه الدراسات ضرورية للكشف عن الانحرافات اللونية مثل الازدواجية أو الحذف أو الانتقال من مناطق مختلفة من الكروموسومات.

بحث يوضح فعالية صبغة جيمسا

قارن Cannova et al (2016) 3 تقنيات تلطيخ لتشخيص داء الليشمانيات الجلدي.

لهذا الغرض ، استخدموا عينات تم الحصول عليها من حيوان تجريبي (Mesocrisetus auratus) تم تلقيحه تجريبيًا بمرض الليشمانيات.

أظهر المؤلفون أن بقعة جيمسا كانت أفضل من صبغة Pap-mart® و Gaffney. لذلك ، اعتبروا أن بقعة جيمسا مثالية لتشخيص داء الليشمانيات الجلدي.

ترجع النتائج الممتازة التي حصل عليها المؤلفون إلى حقيقة أن مزيج الأصباغ التي يتكون منها خليط Giemsa يقدم الظروف اللازمة لخلق تباين مناسب ، مما يسمح بتمييز هياكل amastigotes بوضوح ، داخل وخارج الخلية.

التقنيات الأخرى (Pap-mart® و Gaffney) فعلت ذلك أيضًا ، ولكن بطريقة أضعف وبالتالي يصعب تصورها. هذا هو السبب في أن صبغة جيمسا موصى بها للتشخيص الطفيلي لداء الليشمانيات.

وبالمثل ، قامت دراسة قام بها Ramírez وآخرون (1994) بتقييم صلاحية بقع Giemsa و Lendrum في مسحات الملتحمة لتحديد المتدثرة الحثرية.

قرر المؤلفون أن بقع Giemsa و Ledrum لها خصوصية متساوية ، ولكن وجد أن Giemsa أكثر حساسية.

وهذا ما يفسر سبب كون صبغة جيمسا هي الأكثر استخدامًا حاليًا لتشخيص عدوى المتدثرة ، خاصةً إذا كانت الموارد قليلة.

المصدر: PanReac Applichem ITW Reagents. وصمة عار جيمسا. الإصدار 2: JMBJUL17 CEIVD10ES. كاستيلار ديل فاليس ، إسبانيا.

توصيات لتلوين جيد

يجب عدم تسريع عملية تجفيف الأوراق. يجب توقع قدر معقول من الوقت لتجفيفه في الهواء الطلق. حوالي ساعتين.

اللون مباشرة بعد ساعتين للحصول على أفضل النتائج.

لكي يتم إصلاح اللطاخات والتلطيخ بشكل أفضل ، يجب توزيع العينة على الشريحة بحيث تبقى طبقة رقيقة وموحدة.

عينة الدم المفضلة هي عينة الدم الشعرية ، حيث يتم إجراء اللطاخة مباشرة من قطرة دم وبالتالي لا تحتوي العينة على أي إضافات ، مما يساعد على الحفاظ على الهياكل الخلوية.

ومع ذلك ، إذا تم استخدام الدم الوريدي ، فيجب استخدام EDTA كمضاد للتخثر وليس الهيبارين ، لأن الهيبارين عادة ما يشوه الخلايا.

الأخطاء الشائعة في تلطيخ جيمسا

في ممارسة هذا التلوين يمكن ارتكاب أخطاء. يتضح من التغييرات المفاجئة في نغمات الهياكل.

تلوين أزرق للغاية

قد يكون راجعا إلى:

• مسحات سميكة جدا
• تجاوز وقت تلطيخ
• اغسل بشكل غير كاف.
• استخدام الكواشف أعلى بكثير من درجة الحموضة المحايدة (القلوية).

في ظل هذه الظروف ، يتم تشويه ألوان الهياكل التالية ، بحيث تظهر كريات الدم الحمراء باللون الأخضر بدلاً من تلطيخ السلمون الوردي ، وتتحول حبيبات الحمضات التي يجب تلطيخها باللون الأحمر إلى اللون الأزرق أو الرمادي وهكذا سيكون هناك الانحراف في النغمات المعتادة.

التلوين الوردي المفرط

قد يكون راجعا إلى:

• وقت تلطيخ غير كافٍ.
• الغسيل المطول أو المفرط.
• تجفيف سيء.
• استخدام الكواشف شديدة الحموضة.

في هذه الحالة بالذات ، لن تكون الهياكل التي تلطخ عادة باللون الأزرق مرئية تقريبًا ، في حين أن الهياكل التي تلطخ باللون الوردي سيكون لها درجات ألوان مبالغ فيها بشكل كبير.

مثال: ستتحول خلايا الدم الحمراء إلى اللون الأحمر الفاتح أو البرتقالي الساطع ، وسيظهر الكروماتين النووي باللون الوردي الباهت ، وستتحول حبيبات الحمضات إلى اللون الأحمر الفاتح.

وجود رواسب في اللطاخة

يمكن أن تكون الأسباب:

• استخدم أغشية متسخة أو مغسولة جيدًا.
• لا تدع المسحة تجف جيدًا.
• ترك محلول التثبيت لفترة طويلة.
• غسل غير كاف في نهاية التلطيخ.
• ترشيح غير كافٍ أو عدم ترشيح الملون المستخدم.

وجود القطع الأثرية المورفولوجية

قد تظهر القطع الأثرية المورفولوجية في مسحات ، مما يجعل من الصعب تصور وتفسير الهياكل الموجودة. هذا يرجع إلى:

• نوع مضاد التخثر المستخدم ، مثل الهيبارين.
• استخدام أغشية متسخة أو فاسدة أو دهنية.

وضع التخزين

بعد التحضير ، يجب حفظ الصبغة في درجة حرارة الغرفة (15-25 درجة مئوية) ، لمنع الصبغة من الترسب. يجب تخزينه في حاوية كهرمانية مغلقة بإحكام.

المراجع

1. Cannova D و Brito E و Simons M. تقييم تقنيات التلوين لتشخيص داء الليشمانيات الجلدي. سالوس. 2016 ؛ 20 (2): 24-29.
2. PanReac Applichem ITW الكواشف. وصمة عار جيمسا. الإصدار 2: JMBJUL17 CEIVD10ES. كاستيلار ديل فاليس ، إسبانيا.
3. إجراءات تلطيخ كلارك G. (1981) ، 4thed. وليامز وويلكينز.
4. الكيمياء السريرية التطبيقية. صبغة جيمسا للتشخيص في المختبر. الموزع: cromakit.es
5. Ramírez I و Mejía M و García de la Riva J و Hermes F و Grazioso C. صلاحية بقع Giemsa و Lendrum في مسحات الملتحمة للتعرف على الكلاميديا ​​الحثرية. بول سانيت بنام. 1994 ؛ 116 (3): 212-216.
6. Casas-Rincón G. علم الفطريات العام. 1994. الطبعة الثانية جامعة فنزويلا المركزية ، إصدارات المكتبات. فنزويلا كراكاس.
7. "وصمة غيمسا". ويكيبيديا، الموسوعة الحرة. 1 سبتمبر 2017، 01:02 UTC. 6 ديسمبر 2018 ، es.wikipedia.org.