أجار الدم: الأساس المنطقي والاستخدامات والتحضير - مادة الاحياء - 2025

و أجار الدم هو مستنبت الصلبة إثراء التفاضلية ولكن غير الانتقائية. يتم استخدامه لاستعادة ونمو مجموعة كبيرة ومتنوعة من الكائنات الحية الدقيقة من العينات السريرية أو الثقافات الفرعية.

يجب تضمين أجار الدم الكلاسيكي في بذر معظم العينات السريرية الواردة في المختبر ؛ باستثناء عينات البراز حيث لا تكون مفيدة ، ما لم يتم تحضيرها مع بعض التعديلات.

لوحة أجار الدم

يتكون وسط الاستزراع هذا أساسًا من قاعدة أجار مخصب و 5٪ دم. يمكن أن تختلف قاعدة الأجار وفقًا للاحتياجات ، ولكنها ستتألف أساسًا من البيبتون والأحماض الأمينية والفيتامينات ومستخلصات اللحوم وكلوريد الصوديوم والأجار وغيرها.

أما بالنسبة للدم ، فعادة ما يلزم الاتصال بالحوض للحصول على الدم من الحيوانات ، مثل الأغنام أو الأرانب أو الخيول. ومع ذلك ، هذا ليس ممكنًا دائمًا ويستخدم دم الإنسان أحيانًا.

يمكن تحضير وسط أجار الدم في المختبر أو يمكن شراؤه جاهزًا من شركات متخصصة. يعد تحضير هذه الوسيلة من أكثر الوسائل حساسية ، وأي إهمال في تحضيرها سيؤدي إلى تلوث دفعة.

هذا هو السبب في أنه يجب اتخاذ جميع الاحتياطات الممكنة وفي النهاية يجب إجراء مراقبة الجودة عن طريق الحضانة عند 37 درجة مئوية 1 لوحة لكل 100 يتم تحضيرها.

أساس

المكورات العنقودية الذهبية المستزرعة على أجار الدم. ناثان ريدينج على فليكر ناثان ر. على تويتر ، عبر ويكيميديا ​​كومنز لقد سبق ذكر أن أجار الدم يتميز بكونه وسيطًا غنيًا وتفاضليًا وغير انتقائي. يتم شرح أساس كل من هذه الخصائص أدناه.

أجار الدم هو وسيط غني لأنه يحتوي على 5-10٪ دم على قاعدة أجار كمادة مضافة رئيسية. يحتوي كلا المركبين على العديد من العناصر الغذائية وهذه الخاصية تسمح لمعظم البكتيريا القابلة للزراعة بالنمو فيه.

هذا النمو يحدث بدون قيود. لهذا السبب فهو غير انتقائي. ومع ذلك ، إذا تمت إضافة مركبات إلى هذه الوسيلة التي تمنع نمو بعض الكائنات الحية الدقيقة وتحبذ نمو البعض الآخر ، فإنها تصبح انتقائية. هذا هو الحال إذا تم إضافة أنواع معينة من المضادات الحيوية أو مضادات الفطريات.

وبالمثل ، يعتبر أجار الدم وسيطًا تفاضليًا ، لأنه يسمح بتمييز 3 أنواع من البكتيريا: بيتا للدم الانحلالي ، وانحلالي لألفا ، وانحلالي جاما.

حالات انحلال الدم بيتا هي تلك التي لديها القدرة على تحلل أو تكسير خلايا الدم الحمراء تمامًا ، وتشكيل هالة واضحة حول المستعمرات ، وبالتالي فإنها تنتج انحلال الدم بيتا أو بيتا وتسمى الكائنات الحية الدقيقة بانحلالي الدم.

من أمثلة البكتيريا الانحلالية للبيتا هي Streptococcus pyogenes و Streptococcus agalactiae.

ألفا هيموليتيك هي تلك التي تنفذ انحلال الدم الجزئي ، حيث يتأكسد الهيموغلوبين إلى ميثيموغلوبين ، مما يولد لونًا أخضر حول المستعمرات. تُعرف هذه الظاهرة باسم انحلال الدم α أو α وتصنف البكتيريا على أنها α - الحالة للدم.

من أمثلة البكتيريا الحالة للدم هي العقدية الرئوية والمكورات العقدية من مجموعة viridans.

أخيرًا ، هناك ما يسمى بالبكتيريا غاما الحالة للدم أو غير الانحلالية. تنمو هذه على أجار دون إحداث تغييرات عليه ، وهو تأثير يُعرف باسم γ -hemolysis ، وتكون الكائنات الحية الدقيقة γ - الحالة للدم.

مثال على بكتيريا انحلال الدم بيتا: بعض سلالات المجموعة D Streptococcus (Streptococcus bovis و Enterococcus faecalis).

التطبيقات

يعد وسط زراعة أجار الدم أحد أكثر الوسائط استخدامًا في مختبر الأحياء الدقيقة.

من بين الكائنات الحية الدقيقة القادرة على النمو في وسط أجار الدم: البكتيريا الهوائية الصارمة ، الاختيارية ، الميكروية ، اللاهوائية ، البكتيريا موجبة الجرام أو سالبة الجرام ، البكتيريا سريعة النمو أو بطيئة النمو.

تنمو أيضًا بعض البكتيريا التي تتطلب احتياجات غذائية أو سريعة التحمل ، وكذلك الفطريات والخمائر. وبالمثل ، من المفيد الاستزراع الفرعي أو إعادة تنشيط السلالات الضعيفة جدًا من الناحية الأيضية.

ومع ذلك ، فإن اختيار فصيلة الدم والأجار الأساسي سيختلف اعتمادًا على الكائن الدقيق المحتمل المشتبه في تعافيه والاستخدام الذي سيتم استخدام اللوحة (ثقافة أو مضاد حيوي).

اختيار فصيلة الدم

يمكن أن يكون الدم من لحم الضأن أو الأرانب أو الحصان أو الإنسان.

والأكثر استحساناً هو دم الحمل ، مع بعض الاستثناءات. على سبيل المثال ، لعزل أنواع المستدمية ، حيث الدم الموصى به هو دم الحصان أو الأرانب ، لأن دم الحمل يحتوي على إنزيمات تثبط العامل الخامس.

أقل ما يوصى به هو الإنسان ، لكنه الأكثر استخدامًا ، ربما لأنه أسهل في الحصول عليه.

يجب نزع ألياف الدم والحصول عليه بدون أي نوع من المواد المضافة ومن الحيوانات السليمة. لاستخدام الدم البشري ، يجب مراعاة عدة عوامل:

إذا جاء الدم من أفراد أصيبوا بعدوى بكتيرية ، فسيكون لديهم أجسام مضادة محددة. في ظل هذه الظروف ، من المحتمل أن يتم منع نمو بعض البكتيريا.

إذا تم الحصول عليه من بنك الدم ، فإنه يحتوي على سترات وقد لا تنمو بكتيريا معينة في وجوده. من ناحية أخرى ، إذا كان الدم يأتي من المرضى الذين يتناولون المضادات الحيوية ، يمكن أن يثبط نمو البكتيريا الحساسة.

وإذا كان الدم من شخص مصاب بالسكري ، فإن الجلوكوز الزائد يتعارض مع التطور السليم لأنماط انحلال الدم.

اختيار نوع قاعدة أجار

يمكن أن يكون أجار القاعدة المستخدم في تحضير أجار الدم واسعًا جدًا. من بينها: أجار المغذيات ، أجار ضخ قلب الدماغ ، أجار الصويا التربتيكس ، أجار مولر هينتون ، أجار ثاير مارتن ، أجار كولومبيا ، أجار بروسيلا ، أجار كامبيلوباكتر ، إلخ.

استخدامات أجار الدم حسب الوسط الأساسي المستخدم في تحضيره

الآجار المغذي

هذه القاعدة هي الأقل استخدامًا ، لأنها ستنمو بشكل أساسي بكتيريا غير متطلبة ، مثل العصيات المعوية ، Pseudomonas sp ، S. aureus ، Bacillus sp ، من بين أمور أخرى. لا ينصح بعزل Streptococcus.

آجار ضخ قلب الدماغ (BHI)

وهي واحدة من أكثر الأنواع استخدامًا كقاعدة لآجار الدم ، لأنها تحتوي على العناصر الغذائية الضرورية لنمو معظم البكتيريا ، بما في ذلك Streptococcus sp والبكتيريا الأخرى التي تطلبها. على الرغم من أنه ليس من المناسب ملاحظة أنماط انحلال الدم.

يستخدم دم الضأن بشكل عام مع هذه القاعدة.

يمكن أيضًا تحضير متغيرات أجار الدم ، حيث يتم إضافة مركبات أخرى لعزل بعض الكائنات الحية الدقيقة. على سبيل المثال ، يمكن استخدام Brain Heart Infusion Agar مع دم الأرانب والسيستين والجلوكوز لعزل Francisella tularensis.

بينما ، مع تيلوريت السيستين ، يكون مفيدًا لعزل الوتدية diphteriae. يمكن استخدام دم الإنسان أو دم الحمل.

مع أول انحلال دم بيتا سيُنظر إليه على أنه هالة ضيقة ، بينما في الثانية ستكون الهالة أوسع بكثير.

وبالمثل ، تُستخدم هذه القاعدة ، جنبًا إلى جنب مع الباسيتراسين ونشا الذرة ودم الحصان ومكملات التخصيب الأخرى (IsoVitaleX) ، لعزل جنس المستدمية sp من عينات الجهاز التنفسي.

أيضًا ، إذا تمت إضافة مزيج من المضادات الحيوية الكلورامفينيكول - الجنتاميسين أو البنسلين - الستربتومايسين مع دم الحصان ، فهو مثالي لعزل الفطريات المسببة للأمراض ، حتى مع وجود محصول أعلى من أجار سابورو الجلوكوز. وهي مفيدة بشكل خاص في عزل النوسجة الكبسولية.

أجار الصويا Trypticase

هذه القاعدة هي الأكثر موصى بها من أجل مراقبة أفضل لنمط انحلال الدم ولإجراء اختبارات تشخيصية مثل أصناف البصريات والباسيتراسين. إنه أجار الدم الكلاسيكي الذي يتم استخدامه بشكل روتيني.

مع هذه القاعدة ، يمكنك أيضًا تحضير أجار الدم الخاص لبكتيريا Corynebacterium diphteriae ، مع سيستين تيلوريت ودم الحمل .

وبالمثل ، فإن الجمع بين هذا الأجار ودم الضأن ، بالإضافة إلى كاناميسين فانكومايسين مثالي لنمو اللاهوائية ، وخاصة Bacteroides sp.

مولر هينتون أجار

تُستخدم هذه القاعدة المكملة بالدم لإجراء المضاد الحيوي للكائنات الدقيقة الحساسة ، مثل Streptococcus sp.

كما أنه مفيد لعزل البكتيريا مثل Legionella pneumophila.

ثاير مارتن أجار

هذا الوسط مثالي كقاعدة لآجار الدم عند الاشتباه في وجود جنس النيسرية ، وخاصة النيسرية السحائية ، لأن النيسرية السحائية لا تنمو على أجار الدم.

كما أنها تستخدم لاختبار القابلية للإصابة بـ Neisseria meningitidis.

كولومبيا أجار

هذه القاعدة ممتازة لبذر عينات خزعة المعدة لجرثومة الملوية البوابية.

يتم تحضير الوسط بإضافة 7٪ من دم الضأن منزوع الليفتين بالمضادات الحيوية (فانكومايسين ، تريميثوبريم ، أمفوتريسين ب وسيفسولودين) للحد من نمو أنواع أخرى من البكتيريا التي قد تكون موجودة.

هذه القاعدة نفسها المكملة بدم الإنسان أو دم الحمل وحمض الناليديكسيك والكوليستين مفيدة لعزل Gardnerella vaginalis. كما أنه مثالي لتقييم قابلية مضادات الميكروبات للمضادات الحيوية من نفس الكائن الدقيق.

بالإضافة إلى ذلك ، يتم استخدامه لتحضير أجار الدم لزراعة اللاهوائية ، وإضافة أمينوغليكوزيدات وفانكومايسين.

تسمح هذه القاعدة بالمراقبة المناسبة لأنماط انحلال الدم.

بروسيلا أجار

هذه الوسيلة المستخدمة كقاعدة لآجار الدم مع إضافة فيتامين ك مثالية لزراعة البكتيريا اللاهوائية. في هذه الحالة يوصى باستخدام دم الحمل.

أجار كامبيلوباكتر

أجار العطيفة المضاف إليه 5٪ من دم الأغنام و 5 مضادات حيوية (سيفالوثين ، أمفوتيريسين ب ، تريميثوبريم ، بوليميكسين ب وفانكومايسين) ، هو الوسيط المستخدم لعزل العطيفة الصائمية في عينات البراز.

تجهيز

يجلب كل منزل تجاري التعليمات لإعداد لتر من وسط الثقافة على ظهر الحاوية. يمكن إجراء الحسابات المقابلة لإعداد المبلغ المطلوب ، اعتمادًا على أجار القاعدة المحدد.

تزن وتذوب

أجار القاعدة مجفّف (مسحوق) ، لذلك يجب إذابته في ماء مقطر معدّل إلى الرقم الهيدروجيني 7.3.

يتم وزن الكمية المحددة بواسطة أجار القاعدة المختار وتذويبها بالكمية المقابلة من الماء في دورق ، ثم يتم تسخينها على حرارة معتدلة وخلطها بحركات دوارة حتى يذوب المسحوق بالكامل.

طهر

بمجرد إذابته ، قم بتعقيمه في الأوتوكلاف عند 121 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة.

تجمع الدم

عند مغادرة الأوتوكلاف ، يُسمح للقارورة بالتبريد حتى تتراوح درجة الحرارة بين 40 إلى 50 درجة مئوية ؛ إنها درجة حرارة يدعمها جلد الإنسان وفي نفس الوقت لم يتصلب الآجار بعد.

للقيام بذلك ، يتم لمس القارورة باليد وإذا كانت الحرارة مقبولة ، فهذه هي درجة الحرارة المثالية لإضافة الكمية المقابلة من الدم منزوع الليف (50 مل لكل لتر من الآجار). تخلط بلطف لتتجانس.

يعد مرور تراكم الدم أمرًا بالغ الأهمية ، لأنه إذا تم إجراؤه عندما يكون الوسط شديد السخونة ، فسوف تتفكك خلايا الدم الحمراء ولن يتم استخدام الوسيط لمراقبة انحلال الدم.

إذا تمت إضافته باردة جدًا ، فسوف تتكتل ولن يكون سطح الوسط أملسًا للسماح بالتسجيل المناسب.

تصب في أطباق بتري

قدمه في أطباق بتري المعقمة فور تجانس الدم. يُسكب حوالي 20 مل في كل طبق بتري. يتم هذا الإجراء في غطاء التدفق الصفحي أو بالقرب من الموقد.

عند تقديم أجار الدم في أطباق بتري ، يجب ألا تبقى فقاعات هواء على سطح اللوحة. إذا حدث هذا ، يتم تمرير شعلة موقد بنسن بسرعة فوق اللوحة للقضاء عليها.

يُسمح للألواح بالتصلب وتخزينها في الثلاجة (2-8 درجة مئوية) مقلوبة حتى الاستخدام. قبل استخدام ألواح أجار الدم ، يجب أن يتم تلطيفها (السماح لها بالوصول إلى درجة حرارة الغرفة) لتكون قادرة على البذر.

تستمر اللوحات المحضرة لمدة أسبوع تقريبًا.

المراجع

1. Bayona M. الظروف الميكروبيولوجية لتربية هيليكوباكتر بيلوري. القس كول جاسترونتيرول 2013 ؛ 28 (2): 94-99
2. García P، Paredes F، Fernández del Barrio M. (1994). علم الأحياء الدقيقة السريرية العملي. جامعة قادس الطبعة الثانية. خدمة منشورات UCA.
3. "أجار الدم". ويكيبيديا، الموسوعة الحرة. 10 ديسمبر 2018، 14:55 بالتوقيت العالمي المنسق. 27 ديسمبر 2018، 01:49 en.wikipedia.org.
4. Forbes B، Sahm D، Weissfeld A. (2009). بيلي وسكوت التشخيص الميكروبيولوجي. 12 إد. الأرجنتين. التحرير Panamericana SA
5. CEDIVET مختبر التشخيص البيطري. غواتيمالا. متاح في: trensa.com.
6. Koneman E ، Allen S ، Janda W ، Schreckenberger P ، Winn W. (2004). التشخيص الميكروبيولوجي. (الطبعة الخامسة). الأرجنتين ، الافتتاحية Panamericana SA