ثقافة الدم: ما الغرض منها ، الأساس المنطقي ، الإجراء ، النتائج - مادة الاحياء - 2025

في ثقافة الدم هو اختبار الجرثومية التي تسعى للكشف عن وجود الكائنات الحية الدقيقة في الدم. الدم هو سائل معقم بطبيعته ، وبالتالي يجب حفظه في ظروف فسيولوجية ، لذا فإن وجود البكتيريا أو الفطريات في الدم يكون دائمًا مرضيًا.

عندما توجد البكتيريا أو الفطريات في الدم ، ولكن التكاثر لا يتجاوز القضاء على الكائنات الحية الدقيقة بواسطة جهاز المناعة ، فإنه يسمى تجرثم الدم (للبكتيريا) أو الفطريات (للفطريات) ؛ ولكن إذا زاد عدد الكائنات الحية الدقيقة بشكل لا يمكن السيطرة عليه ، يطلق عليه تسمم الدم.

زجاجات زرع الدم (الصفراء: الهوائية للأطفال ، والأخضر: الهوائية للبالغين ، والأحمر: اللاهوائية للبالغين). المصدر: صورة التقطها المؤلف MSc Marielsa Gil.

تشكل تجرثم الدم وفطريات الدم وتسمم الدم خطرًا على حياة المريض وبالتالي يجب معالجته على الفور. لهذا السبب ، عندما يكون هناك اشتباه في وجود عدوى في الدم ، يطلب الأطباء دراسة مزرعة الدم.

يسمح هذا التحليل البكتريولوجي بمعرفة ما إذا كانت هناك عدوى في الدم أم لا وما هي الكائنات الحية الدقيقة المعنية. بالإضافة إلى ذلك ، إذا كانت النتيجة إيجابية ، يتم إجراء اختبار الحساسية لمعرفة أي مضاد حيوي أو مضاد للفطريات يمكن استخدامه في العلاج.

من ناحية أخرى ، إذا كانت ثقافة الدم سلبية بعد 24 ساعة من الحضانة ، فلا يجب التخلص منها حتى تصبح سلبية لمدة 240 ساعة. هذا يضمن عدم وجود كائنات دقيقة بطيئة النمو.

لكي تكون ثقافة الدم موثوقة ، يجب اعتماد تدابير معقمة شديدة عند أخذ العينة ، ولزيادة موثوقية وحساسية الاختبار ، يجب أخذ عينتين على الأقل أثناء أو بالقرب من ذروة الحمى.

لما هذا؟

الدم سائل معقم وعندما توجد فيه الكائنات الحية الدقيقة يكون مرضي 100٪. يمثل هذا الموقف صورة سريرية دقيقة للغاية تهدد حياة المريض.

ثقافة الدم هي اختبار بكتيريولوجي مهم يكتشف وجود الكائنات الحية الدقيقة في مجرى الدم.

يمكن أن تصل الكائنات الحية الدقيقة إلى الدم بطرق مختلفة ، والتي يمكن أن تكون عدوى خارج الأوعية الدموية مثل: الالتهاب الرئوي ، والتهابات داخل البطن ، والتهاب الحويضة والكلية ، والتهابات الجلد الخطيرة ، والأنسجة الرخوة أو التهاب المفاصل ، من بين أمور أخرى.

أو يمكن أن يكون أيضًا عن طريق الوريد ، على سبيل المثال ، تلوث القسطرة الوريدية أو الشرايين ، والتهاب الشغاف ، وإدمان المخدرات عن طريق الوريد ، وإعطاء الأدوية أو المحاليل الملوثة ، إلخ.

يعد اكتشاف العامل المسبب للإنتان وعلاجه في الوقت المناسب أمرًا ضروريًا لضمان بقاء المريض.

بهذا المعنى ، يجب على الطبيب أن يشير إلى تحقيق ثقافة الدم عندما يلاحظ العلامات والأعراض التي تثير الاشتباه في تسمم الدم ، مثل: الحمى (أكثر من 38 درجة مئوية) دون تركيز معدي واضح أو ، على العكس من ذلك ، انخفاض حرارة الجسم (<دي 36 درجة مئوية).

قد تكون العلامات الأخرى: قشعريرة ، زيادة عدد خلايا الدم البيضاء (> 10000 خلية / مم ³) أو انخفاض كبير في الخلايا متعددة الأشكال (<1000 PMN / مم ³). وكذلك تدهور حالة الأعضاء المتعددة أو فقدانها للحيوية فجأة ، من بين علامات التحذير الأخرى.

يمكن أن يكون تجرثم الدم ثابتًا أو عابرًا أو متقطعًا. هذا مهم عند أخذ عينة ، لأنه من الضروري أخذها عندما يكون هناك احتمال أكبر للعثور على الكائنات الحية الدقيقة المنتشرة.

لذلك يوصى بأخذ عينتين على الأقل في أماكن مختلفة. بالإضافة إلى ذلك ، فإن الوضع المثالي هو أن يتم أخذ العينة في ذروة حمى أو عندما يعاني المريض من ارتعاش أو انخفاض شديد في درجة حرارة الجسم أو تعرق أو عدم انتظام دقات القلب.

ومع ذلك ، لكي تكون مزرعة الدم أداة مفيدة حقًا ، يجب أخذ العينة بحذر شديد. يمكن أن يؤدي التلاعب السيئ أو التعقيم السيئ في لحظة أخذ العينة إلى إبطال الاختبار والحصول على نتائج إيجابية خاطئة.

أساس

تتكون الدراسة من أخذ عينتين أو ثلاث عينات دم معقمة ووضعها في زجاجات خاصة.

تسمى الأجهزة الخاصة لزراعة عينات الدم زجاجات زرع الدم. يتم تصنيفها إلى:

حسب عمر المريض

-استخدام الأطفال

-للبالغين.

حسب نوع الكائن الدقيق

- قوارير للكائنات الدقيقة الهوائية (البكتيريا الهوائية والبكتيريا الاختيارية والفطريات).

- زجاجات استنبات الدم للكائنات الدقيقة اللاهوائية (البكتيريا اللاهوائية الصارمة).

يحتوي بعضها على وسط استزراع سائل وبعضها يحتوي على وسط استزراع صلب وسائل في نفس الوقت. توجد أيضًا مع جزيئات الكربون المنشط.

معالجة

توصيات لأخذ العينات

- يتم أخذ العينة من قبل موظفين مدربين تدريباً عالياً في مجال علم الأحياء الدقيقة.

- التعقيم أو التنظيف الشامل لموقع جمع العينات هو بلا شك أهم خطوة.

- كما هو الحال مع جميع العينات ، يجب على العاملين الصحيين الامتثال الكامل لتدابير السلامة البيولوجية أثناء العملية (استخدام القفازات ، والعباءات ، والنظارات ، وغيرها).

- الحرص على توفر جميع الأدوات اللازمة لأخذ العينات.

- لصق القوارير بالاسم الكامل للمريض والتاريخ ورقم السجل الطبي ووقت جمع العينة ورقم تسلسل المختبر.

- الطريقة المثلى هي أخذ العينة قبل أن يبدأ المريض العلاج بمضادات الميكروبات. يشار فقط في حالة الاشتباه في عدم عمل العلاج الجاري. في هذه الحالة ، يجب أخذ العينة قبل تغيير الدواء ، وذلك باستخدام زجاجات زرع الدم مع مثبطات المضادات الحيوية (جزيئات الكربون المنشط).

- يجب أخذ عينتين على الأقل في مواقع تشريحية مختلفة ، مثل الذراع اليمنى والذراع الأيسر. في حالة التهاب الشغاف المشتبه به ، يوصى بإجراء 3 عينات. سيتم تضمين زجاجتين في كل عينة (واحدة للتأثيرات الهوائية والأخرى لمرض اللاهوائية).

عينة الكمية

تختلف كمية العينة وفقًا لعمر المريض ، ولكن يجب دائمًا الحفاظ على النسبة 1: 5 إلى 1:10 فيما يتعلق بتخفيف مرق الدم / الثقافة.

في الأطفال حديثي الولادة ، كمية العينة الموصى بها هي 1 مل من الدم لكل قارورة. يتم استخدام زجاجة الأطفال.

في حالة الرضع الذين تتراوح أعمارهم بين شهر وسنة ، يمكن زيادتها إلى 1.5 مل من الدم لكل زجاجة. يتم استخدام زجاجة الأطفال.

في الأطفال الذين تزيد أعمارهم عن سنتين ، تكون كمية العينة المناسبة 2.5 مل من الدم لكل قارورة. يتم استخدام زجاجة الأطفال.

منذ فترة المراهقة ، يمكن زيادته إلى حجم دم يتراوح بين 5-10 مل لكل زجاجة. يتم استخدام زجاجة الكبار.

أخيرًا ، في مرحلة البلوغ ، الكمية الضرورية هي 8-10 مل لكل زجاجة. يتم استخدام زجاجة الكبار.

أخذ العينات

- يمكن أن تكون عينة الدم وريدية أو شريانية. ومع ذلك ، لا يتم أخذ الدم الشرياني إلا عندما يكون أخذ العينات الوريدي مستحيلاً.

- لا ينصح بأخذ عينة من قسطرة وريدية مركزية إلا إذا:

1. من المستحيل أخذ العينة محيطيًا (وريديًا أو شريانيًا).
2. المرضى المعرضون لخطر النزيف.
3. عندما يشتبه الطبيب في تجرثم الدم بسبب تلوث القسطرة الوريدية المركزية.
4. عندما تظهر الحمى مرة أخرى بعد توقف الحمى لمدة 4 إلى 5 أيام ، بغض النظر عما إذا كان المريض يخضع للعلاج بمضادات الميكروبات أم لا.

عقم قبل أخذ العينات

- اختيار المواقع التشريحية لأخذ العينات. بشكل عام ، يتم اختيار الأوردة ذات العيار الأفضل (الوريد البازيلي أو الرأسي).

- وفقًا لمراكز السيطرة على الأمراض (CDC) في أتلانتا (الولايات المتحدة الأمريكية) ، يجب على المشغل غسل أيديهم بـ 2٪ كلورهيكسيدين أو 10٪ بوفيدون يود قبل أخذ العينات ، بالإضافة إلى ارتداء القفازات.

-Palpate وتحديد موقع الوريد لاستخدامه.

- نظف منطقة البزل بطريقة دائرية ، مع إجراء حركات من المركز إلى الخارج باستخدام صابون كلورهيكسيدين أو صابون مطهر. شطف بمحلول ملحي معقم.

بعد ذلك ، ضع مطهرًا واتركه يعمل. مثال جلوكونات الكلورهيكسيدين 0.5٪ لمدة دقيقة واحدة أو بوفيدون اليود 10٪ لمدة دقيقتين. بالنسبة لهذا الأخير ، اسأل أولاً عما إذا كان المريض يعاني من حساسية تجاه اليود. إذا كنت تعاني من الحساسية ، يمكنك استبدال 70٪ كحول.

استخراج العينة

- وضع العاصبة لتفاقم تدفق الدم وتنبت الوريد.

- لا تلمس مكان الثقب بإصبعك مرة أخرى. إذا كان هذا ضروريًا للغاية ، فيجب غسل الإصبع بنفس طريقة غسل منطقة الثقب.

- أدخل إبرة الحقن أو فروة الرأس في الوريد واستخرج الكمية اللازمة من الدم.

- لا تضع القطن أو الشاش على الإبرة عند إزالتها إذا لم تكن معقمة.

-إزالة الختم الأمني ​​من الزجاجات بعناية شديدة ودون لمس الغطاء. يوصي بعض المؤلفين بإجراء تطهير للغطاء قبل تلقيح العينة.

- وزع الكمية المناسبة من الدم في القوارير. إذا تم أخذ العينة بواسطة حاقن ، يتم سكب الكمية اللازمة أولاً في الدورق اللاهوائي ثم في الدورق الهوائي. إذا تم أخذ فروة الرأس (الفراشة) يتم سكبه في الاتجاه المعاكس.

- امزج زجاجة مزرعة الدم بلطف بالقلب.

- قم بتغيير القفازات وكرر الخطوات السابقة لأخذ العينة الثانية.

-إذا كانت العينة الثانية مأخوذة من موقع مختلف فيمكن إجراؤها على الفور ، أما إذا كانت من نفس الموقع فيجب الانتظار 30 إلى 90 دقيقة بين عينة وأخرى.

- يجب أخذ العينة إلى المختبر في أسرع وقت ممكن ، وإذا تعذر ذلك فيجب تركها في درجة حرارة الغرفة لمدة تصل إلى 18 ساعة.

حضاره

بمجرد دخول المختبر ، يتم تحضين القوارير عند 37 درجة مئوية تحت ظروف كل دورق ، أي في الهوائية واللاهوائية على التوالي.

وفقًا للطريقة اليدوية ، يجب أن يبدأ الرنين بعد 24 ساعة من الحضانة ثم الرنين بين الحين والآخر. يتم تنفيذ الحلقات على النحو التالي: أولاً يتم تطهير غطاء الزجاجة وإدخال إبرة حاقن معقم. يستخرج السائل من القارورة ويزرع على أجار الدم وأجار الشوكولاتة.

إذا كان هناك نمو ، يتم إجراء الجرام ، والثقافات الفرعية في وسط معين ، والاختبارات البيوكيميائية والمضادات الحيوية.

في الطرق الآلية ، يصدر جهاز Bact / Alert إنذارًا عندما يكتشف أن القارورة موجبة. بنفس الطريقة ، يجب النقر عليه على أجار الدم وأجار الشوكولاتة.

هناك طريقة أخرى تكتسب أرضية وهي تحليل القارورة بعد 6 ساعات من الحضانة من خلال قياس الطيف الكتلي. ساعدت هذه الطريقة في زيادة الحساسية وسرعة التشخيص.

النتائج

طالما أن زجاجة مزرعة الدم سلبية ، يمكن تقديم تقارير أولية وسيطة للطبيب المعالج. ويشير التقرير إلى أنها سلبية في الساعات التي احتضنتها. على سبيل المثال ، إذا ظل سالبًا حتى اليوم الرابع ، فسيتم الإبلاغ عنه على النحو التالي:

النتيجة الأولية: ثقافة سلبية عند 96 ساعة من الحضانة.

ملحوظة: تستمر الدراسة لمدة 240 ساعة.

إذا كانت مزرعة الدم إيجابية ، يتم إبلاغ الطبيب المعالج على الفور وإرسال تقرير بجرام المستعمرة على الأقل. مثال:

النتيجة الأولية: في الثقافة الإيجابية عند 48 ساعة من الحضانة ، لوحظ وجود عصيات سالبة الجرام وأكسيداز سالب. تحديد الهوية واختبار الحساسية قيد التنفيذ.

توجه هذه المعلومات الطبيب المعالج لبدء العلاج التجريبي تجاه الكائنات الحية الدقيقة المحتملة ، أثناء انتظار النتيجة النهائية للمختبر.

عند الانتهاء من الدراسة البكتريولوجية ، أي ، تم تحديد الكائن الدقيق وتوافر المضاد الحيوي ، يجب إرسال التقرير النهائي في أسرع وقت ممكن.

يجب توخي الحذر بشكل خاص إذا كان الكائن الدقيق المستهدف هو Neisseria gonorrhoeae أو Neisseria meningitidis ، حيث يتم تثبيط هذه البكتيريا في وجود تركيزات عالية من polyanethosulfonate الصوديوم (SPS).

هذا هو السبب في أن هذا المركب يجب ألا يتجاوز 0.025٪ في زجاجات زرع الدم.

من ناحية أخرى ، إذا تم أخذ عينة مزرعة الدم أولاً في أنابيب Vacutainer ، فإن هذه الأنابيب تحتوي على تركيزات SPS السامة للمكورات السحائية والمكورات البنية ، لذلك يجب نقل الدم في غضون ساعة واحدة إلى نظام زراعة المرق.

كيف تتحقق مما إذا كانت مزرعة الدم إيجابية أم ملوثة

تعتبر مزرعة الدم ملوثة عندما يكون هناك نمو في قنينة دم واحدة فقط من المجموع المأخوذ. ويزداد الشك في التلوث إذا كانت الكائنات الحية الدقيقة المعزولة عبارة عن ميكروبيوتا جلدية اعتيادية: على سبيل المثال: Staphylococcus coagulase negative و Propionibacterium spp وغيرها.

ومع ذلك ، في المرضى الذين يعانون من نقص المناعة ، لا ينبغي إهمال أي كائن حي دقيق ، ولكن في هذه الحالة يجب أن تظهر الكائنات الحية الدقيقة في عدة عينات.

من ناحية أخرى ، إذا كانت الحساسية للمضادات الحيوية من نفس الكائن الدقيق المعزول في عينتين مختلفتين هي نفسها ، فإن العدوى حقيقية.

السمة الأخرى هي الحمل البكتيري ، حيث تنمو ثقافات الدم الملوثة في وقت متأخر ، في حين أن العدوى الحقيقية في المرضى غير المعالجين تكون إيجابية بشكل عام في 14 ساعة من الحضانة عندما تكون الكائنات الحية الدقيقة غير مزعجة.

من ناحية أخرى ، في المرضى الذين عولجوا بمضادات الميكروبات ، قد يستغرق الكائن الدقيق المعني وقتًا لينمو لأن الحمل منخفض جدًا.

قد يشير ظهور أكثر من كائن حي دقيق إلى وجود تلوث ، ولكن إذا تكررت النتيجة نفسها في عدة طلقات من مواقع مختلفة ، فإنها تكون حقيقية.

المراجع

1. "ثقافة الدم". ويكيبيديا، الموسوعة الحرة. 3 Jul 2019، 17:28 UTC. 14 يوليو 2019، 19:05 en.wikipedia.org
2. Hervé B. التقنيات الحديثة في التشخيص الميكروبيولوجي: الأتمتة وبعض التطبيقات في تحديد الميكروبات ودراسة الحساسية. القس ميد. العد. 2015 ؛ 26 (6) 753-763. متاح على: reader.elsevier.com
3. Villarroel P. الفصل 20: الإنتان وخطر الإصابة بأمراض القلب والأوعية الدموية. صحة القلب والأوعية الدموية. ص 187 - 194. متاح على: fbbva.es
4. سانشيز آر ، رينكون ب ، كورتيس سي ، فرنانديز إي ، بينيا إس ، هيراس إي إم ثقافات الدم: ماذا قالوا لك وماذا تفعل؟ مرض الكرة الأرضية. 2012 ؛ 11 (26): 146-163. متاح على: scielo.isc
5. Pardinas-Llergo M، Alarcón-Sotelo A، Ramírez-Angulo C، Rodríguez-Weber F، Díaz-Greene E. احتمالية النجاح في الحصول على ثقافة دم إيجابية. ميد. انترنا مكس. 2017 ؛ 33 (1): 28-40. متاح على: scielo.org