الشريحة المتوسطة: الأساس والتحضير والاستخدامات - مادة الاحياء - 2025

و المتوسطة SIM هو أجار نصف صلب والتفاضلية، والمصممة خصيصا للمساعدة في تحديد بعض أنواع البكتيريا، وخاصة المعوية. يتكون من التريبتين ، الببتون ، كبريتات الحديد ، كبريتات الأمونيوم ، ثيوسلفات الصوديوم ، والأجار.

يسمح هذا الوسيط بتنفيذ ثلاثة اختبارات مهمة: إنتاج كبريتيد الهيدروجين (H ₂ S) ، وتشكيل الإندول والحركة ، ومن هنا جاء الاختصار SIM. بسبب فائدتها الكبيرة ، لا يمكن أن تكون غائبة في مختبر علم الجراثيم.

A. وسيط بطاقة SIM التجارية B. SIM H2S (-) ، Indole (-) والحركة (+) اختبار و SIM H2S (+) ، Indole (-) ، اختبار الحركة (+). المصدر: أ. صورة التقطها المؤلف ماجستير. مارييلسا جيل ب.مفلوايزة

على عكس الوسائط الأخرى ، يجب أن تكون شبه صلبة حتى يمكن اكتشاف قدرة الحركة لبعض البكتيريا. بهذا المعنى ، يعمل هذا الاختبار بشكل جيد للغاية مع البكتيريا المعوية ، ولكن ليس في العصي غير المخمرة سالبة الجرام ، حيث يُفضل استخدام طرق أخرى ، مثل الإسقاط المعلق.

يسمح وسيط SIM بتمييز بعض الخصائص المحددة التي تميز بعض البكتيريا بالنسبة للآخرين. على سبيل المثال ، تتميز Escherichia coli بكونها H ₂ S (-) ، Indole (+) والحركة (+) ، بينما Proteus mirabilis هي H ₂ S (+) ، indole (-) ، الحركة (+).

أساس

وهي وسيلة استزراع تعتبر تفاضلية ، لأن استخدامها يميز بين الكائنات الحية الدقيقة القادرة على إنتاج كبريتيد الهيدروجين من تلك التي لا تنتج ؛ كما أنه يسلط الضوء على تلك التي تشكل الإندول من التربتوفان من تلك التي لا تشكله ، وأخيراً يميز البكتيريا المتحركة عن البكتيريا غير المتحركة.

مصدر الطاقة

مثل أي وسط استزراع ، فإنه يحتوي على عناصر توفر العناصر الغذائية اللازمة بحيث يمكن أن تتطور الكائنات الحية الدقيقة غير المطلوبة. يتم تمثيل هذه العناصر بواسطة بيبتونيس وتريبتين.

يعد تطوير الكائن الدقيق في الوسط أمرًا ضروريًا لتتمكن من ملاحظة وجود أو عدم وجود الخصائص التي يقيمها هذا الوسيط.

إنتاج كبريتيد الهيدروجين

يشير الحرف S من اختصار SIM إلى إنتاج كبريتيد الهيدروجين (H ₂ S). ستمتص البكتيريا القادرة على تكوين كبريتيد الهيدروجين الكبريت من ثيوسلفات الصوديوم.

وبمجرد أن H ₂ يتكون S -colourless بالغاز، فإنه يتفاعل مع ملح الحديد موجودة في المتوسط، وتشكيل كبريتيد الحديدية، واضحة للعيان (راسب أسود). البكتيريا التي لا تشكل H ₂ S ، اترك وسط اللون الأصلي (البيج).

يمكن أن يؤدي وجود الراسب الأسود إلى إعاقة تفسير الحركة. ومع ذلك ، فإن معظم البكتيريا المعوية المنتجة لـ H ₂ S معروفة بأنها متحركة بشكل إيجابي ، مثل السالمونيلا والبروتيوس والسيتروباكتر. علاوة على ذلك ، فإن الراسب الأسود الذي يغطي الوسط بأكمله تقريبًا يشير إلى حركة إيجابية.

تشكيل الإندول

الحرف الثاني من اختصار SIM هو "I" ، والذي يمثل تكوين الإندول.

وبهذا المعنى ، فإن التريبتين ، بالإضافة إلى كونه مصدرًا للمغذيات ، يؤدي وظيفة أساسية أخرى. هذا الببتون غني بحمض أميني يسمى التربتوفان ، لذلك يمكن أن يظهر البكتيريا التي تنتج التربتوفاناز.

هذا الإنزيم مسؤول عن شق الحمض الأميني التربتوفان ، مع ما يترتب على ذلك من تكوين الإندول (مادة عديمة اللون) وحمض البيروفيك والأمونيوم.

لهذا السبب ، لإظهار رد الفعل هذا ، من الضروري إضافة مادة كاشفة (كاشف إرليخ أو كاشف كوفاك). إما أن يتفاعل مع الإندول ، مكونًا مادة حمراء على شكل حلقة ضارب إلى الحمرة على سطح الأجار. إذا ظهرت حلقة الفوشيه ، يتم تفسير اختبار الإندول على أنه إيجابي.

لن تشكل البكتيريا التي لا تمتلك هذا الإنزيم الحلقة ويتم تفسيرها على أنها اختبار إندول سلبي.

من المهم ملاحظة أن اختبار الإندول يجب أن يكون آخر ما يتم تفسيره ، لأنه بمجرد إضافة الكاشف ، يصبح الوسط غائمًا ، مما يجعل من الصعب تصور الحركة.

الحركة

أخيرًا الحرف "M" من كلمة SIM يعني الحركة. من أجل تقييم الحركة ، يكون هذا الوسط شبه صلب من الناحية الاستراتيجية ، حيث أن هذه الخاصية ضرورية لتكون قادرًا على مراقبة ما إذا كانت هناك حركة بكتيرية أم لا. البكتيريا التي تمتلك الأسواط هي تلك التي تعطي هذا الاختبار الإيجابي.

سيكون الاختبار الإيجابي واضحًا عند ملاحظة العكارة ، في اللقاح الأولي وحولها. في حين أن البكتيريا غير المتحركة تتطور فقط في مسار اللقاح الأولي.

تجهيز

بطاقة SIM متوسطة

تزن 30 جم من الوسط المجفف وتذوب في لتر من الماء المقطر. يُترك الخليط ليقف لمدة 5 دقائق ثم يُسخن حتى الغليان مع التحريك المتكرر حتى يذوب تمامًا.

وزع الخليط في أنابيب اختبار بأغطية قطنية وجهاز تعقيم على حرارة 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. قم بإزالة رف الأنبوب من الأوتوكلاف واتركه يتجمد في وضع عمودي ، بحيث يكون الوسيط على شكل كتلة.

لحفظه يحفظ في الثلاجة لحين استخدامه. يجب أن يكون للوسط المحضر درجة حموضة نهائية تبلغ 7.3 ± 0.2.

في وقت تلقيح الوسط ، يجب أن يكون في درجة حرارة الغرفة. اللون الأوسط بيج.

كاشف كوفاتش

قم بقياس 150 مل من الأميل أو الأيزو أميل أو كحول البوتيل. (استخدم أحد الثلاثة المذكورة).

قم بإذابة 10 جم من ف ديميثيل أمينوبنزالديهيد. ثم أضف ببطء 50 مل من حمض الهيدروكلوريك المركز.

يكون الكاشف الجاهز للاستخدام عديم اللون أو أصفر فاتح. يجب حفظها في زجاجة كهرمانية وتخزينها في الثلاجة. لا تستخدم إذا تحولت إلى اللون البني الداكن ؛ يشير إلى أنه تالف. يُفضل هذا الكاشف عندما يتعلق الأمر بالبكتيريا المعوية.

كاشف إرليخ

تزن 2 جم من p-dimethylaminobenzaldehyde وتذوب في 190 مل من الكحول الإيثيلي المطلق وتخلط ببطء مع 40 مل من حمض الهيدروكلوريك المركز. قم بتخزين كاشف Kovac بنفس الطريقة. يستخدم كاشف إيرليش في الغالب للبكتيريا غير المخمرة واللاهوائية.

التطبيقات

يستخدم وسط SIM بشكل كبير في مختبرات علم الجراثيم. وتتمثل ميزته في أنه يمكن ملاحظة ثلاث خصائص أساسية في نفس الأنبوب في التعرف على البكتيريا المعوية.

زرعت

الطريقة الصحيحة لزرع هذه الوسيلة هي استخدام الإبرة ، والتي يتم بواسطتها أخذ جزء من المستعمرة النقية المراد دراسته وإدخاله عموديًا في وسط الوسط. يجب إجراء اندفاع واحد. يجب ألا يصل الثقب إلى قاع الأنبوب ، فالشيء الصحيح أن يغطي ثلثي العمق فقط.

لا ينصح بتكرار اللقاح ، لأن هذا يمكن أن يؤدي إلى تفسيرات خاطئة للحركة الإيجابية. يتم تحضين الوسط الملقح هوائياً عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة.

وبمجرد أن انتهى الوقت، لوحظ وجود أو عدم وجود إنتاج H ₂ S وقراءة الحركة. أخيرًا ، تم الكشف عن الإندول ، بإضافة 3 إلى 4 قطرات من كاشف إيرليش أو كوفاك ، واخلطه برفق وتفسيره.

المصدر: Koneman E، Allen S، Janda W، Schreckenberger P، Winn W. (2004). التشخيص الميكروبيولوجي. 5th إد. التحرير Panamericana SA Argentina.

سؤال وجواب

كعنصر تحكم في التعقيم ، يتم تحضين أنبوب أو أنبوبين دون تلقيح في فرن عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة. من المتوقع أنه بعد هذا الوقت لا يوجد نمو أو تغيير في اللون.

كمراقبة الجودة ، يمكن استخدام سلالات معتمدة معروفة ، مثل: Escherichia coli ATCC 25922 ، Enterobacter aerogenes ATCC 13048 ، Klebsiella pneumoniae ATCC 13883 ، Salmonella typhimurium ATCC 14028 ، Shigella sonnei ATCC 29930 ، Proteus vulgaris ATCC 13315.

النتائج المتوقعة هي: Escherichia coli H ₂ S سالبة ، وحركة إندولية وإيجابية ، و Enterobacter aerogenes حركية إيجابية فقط ، و Salmonella typhimurium H ₂ S ، وحركة إيجابية ، مع إندول سلبي. المتقلبة الشائعة كلها إيجابية ، في حين أن Klebsiella pneumoniae و Shigella كلها سلبية.

محددات

- بعض سلالات Morganella morganii ، من بين سلالات أخرى ، يمكن أن تنتج صبغة بنية في هذا الوسط بسبب إنتاج الميلانين ، ولا ينبغي الخلط بين ذلك وبين راسب كبريتيد الحديدوز. في المهنيين عديمي الخبرة ، يمكن أن يؤدي هذا الموقف إلى نتائج إيجابية خاطئة في تفسير اختبار H ₂ S.

- البكتيريا الهوائية الصارمة ستنمو فقط على سطح الأنبوب ، مما يجعل من الصعب تفسير حركتها.

المراجع

1. مختبرات BD. BBL SIM متوسطة. 2008. متاح في: bd.com
2. مختبرات نيوجين. بطاقة SIM متوسطة. متوفر في: foodafety
3. ديفكو فرانسيسكو سوريا ملغيزو. بطاقة SIM متوسطة. 2009 متاح على:
4. مختبر Brizuela-Lab. بطاقة SIM متوسطة. متاح على:.brizuela-lab.com
5. مختبرات بريتانيا. بطاقة SIM متوسطة. 2015 متاح في: studyres.es/doc
6. Koneman E ، Allen S ، Janda W ، Schreckenberger P ، Winn W. (2004). التشخيص الميكروبيولوجي. 5th إد. التحرير Panamericana SA Argentina.