تلطيخ الهيماتوكسيلين يوزين: الخصائص والاستخدامات والتقنيات - كيمياء - 2025

و الهيماتوكسيلين - يوزين هو أسلوب تلطيخ باستخدام مزيج من الهيماتوكسيلين الأصباغ ويوزين. يشكل هذا الزوج من الأصباغ ثنائيًا مثاليًا ، حيث يعمل الهيماتوكسيلين كصبغة أساسية ويوزين هو صبغة حمضية.

لا يشير تعيين الأصباغ الأساسية أو الحمضية إلى الرقم الهيدروجيني الذي تم الحصول عليه في المحلول ، ولكنه يتحدث عن النسبة السائدة من حيث الشحنات الأنيونية أو الموجبة التي تمتلكها أو عن طريق موقع مجموعة الكروموفور.

الهيماتوكسيلين - يوزين (HE) الملون الظهارة العمودية الهدبية المصدر: تود ستراوس وفلاديمير أوسيبوف

بهذا المعنى ، يعتبر الهيماتوكسيلين صبغة أساسية (كاتيونية) وبالتالي فإن له صلة بالتركيبات الحمضية ، مثل نواة الخلايا. بينما يوزين ، كونه صبغة حمضية (أنيونية) ، له صلة بالتراكيب القلوية أو الأساسية ، مثل سيتوبلازم الخلية.

لهذا السبب ، يستخدم هذا المزيج من الأصباغ على نطاق واسع لتلطيخ الأنسجة ، لأنه يسمح بتمييز النوى والسيتوبلازم بشكل واضح. تلون النوى باللون الأزرق الغامق أو الأرجواني والسيتوبلازم الوردي.

يعد تلطيخ الهيماتوكسيلين إيوزين أحد أكثر تقنيات التلوين استخدامًا في مجال علم الأنسجة وعلم الخلايا ، نظرًا لسهولة التعامل معه وانخفاض تكلفته. يتم استخدامه لتصور الخلايا والألياف العصبية السميكة ووجود بعض الكائنات الحية الدقيقة في الأنسجة ، مثل: الطفيليات والفطريات والبكتيريا وغيرها.

مميزات

الهيماتوكسيلين

الهيماتوكسيلين صبغة محايدة. ومع ذلك ، فإن المكون الذي يوفر اللون (chromophore) يقع في المركز الموجب أو الأساسي للجزيء. ومن ثم تقاربها مع الهياكل الحمضية. صيغته الكيميائية هي C ₁₆ H ₁₄ O ₆ واسمه العلمي هو 7،11b-dihydroindeno chromene-3، 4،6a، 9،10 (6 H) -pentol.

إنها تلطخ بشكل أساسي نوى الخلايا ، لأنها غنية جدًا بالأحماض النووية. يمكن أن تلطخ أيضًا شوائب السيتوبلازم ذات الأصل الفيروسي.

من أجل تلطخ الهيماتوكسيلين ، يجب أن يكون في حالة مؤكسدة ومرتبط بالمعدن. هذا الأخير سوف يعمل على تثبيت الأنسجة ، أي أنه سيكون بمثابة لاذع.

عندما يتأكسد الهيماتوكسيلين يطلق عليه الهيماتين. تتحقق الأكسدة بالتعرض للأكسجين (شيخوخة) الكاشف أو عن طريق المواد التي تساعد على الأكسدة (الأكسدة الكيميائية).

يوزين

يوزين صبغة تلطخ باللون الأحمر أو الوردي. إنه غير قابل للذوبان في الماء على الرغم من وجود نسخة قابلة للذوبان في الماء. بشكل عام ، يتم تحضير يوزين عن طريق التذويب في الكحول (95 درجة إيثانول).

إنه يلطخ السيتوبلازم ، وألياف العضلات ، والعضيات السيتوبلازمية ، والكولاجين ، لكنه لا يلوث نوى الخلية. هذا لأنه مشحون سالبًا ، لذلك فهو ذو صلة بالتركيبات الموجبة الشحنة.

هناك نوعان من يوزين "Y" و "B". يُعرف يوزين "Y" باسم يوزين أصفر. اسمها العلمي هو رباعي البروم فلوريدا uorescein والصيغة الكيميائية هي C ₂₀ H ₈ برازيلي ₄ O ₅.

من ناحية أخرى ، يسمى يوزين "ب" أحيانًا إرثروسين ب المزرق. اسمها العلمي هو dibromodynitro فلوريدا uorescein والصيغة C ₂₀ H ₈ برازيلي ₂ N ₂ O ₉. كلاهما متشابهان للغاية والفرق بين استخدام أحدهما أو الآخر ليس ملحوظًا حقًا. ومع ذلك ، فإن الأكثر شعبية هو يوزين "Y".

يمتلك Eosin خاصية التمييز بين الخلية الحية والخلية الميتة ، حيث إنه قادر فقط على عبور الغشاء لتلطيخ السيتوبلازم الخاص به عندما تكون الخلايا ميتة ، تاركًا السيتوبلازم في الخلية عديم اللون إذا بقي على قيد الحياة.

التطبيقات

تلطيخ الألياف العصبية

يمكن تلطيخ الألياف العصبية السميكة والتعرف عليها باستخدام الهيماتوكسيلين يوزين. ومع ذلك ، فإنه ليس مفيدًا لتلوين الألياف العصبية الرقيقة ، حيث أن تلطيخ الفضة مطلوب لتصور الأخير.

بقع الجلد النسيجية

في تلطيخ الطبقة القرنية من الجلد ، فإن الصبغة التي تعمل هي يوزين ، لأنه في هذا المستوى لا تحتوي الخلايا على نواة.

في الطبقة الحبيبية من الجلد ، يلطخ الهيماتوكسيلين حبيبات الكيراتوهيالين بشدة داخل الخلايا الحبيبية. على العكس من ذلك ، فإن الطبقة الشائكة من الجلد ملطخة بشكل ضعيف بالهيماتوكسيلين ، بينما الطبقة القاعدية أو الجرثومية ملطخة تمامًا.

يلطخ الأيوزين السيتوبلازم في جميع الخلايا ويمكن أن تختلف شدة اللون من طبقة إلى أخرى.

تلطيخ الهيماتوكسيلين إيوزين لعينات البراز

أظهر Gómez et al. ، في عام 2005 أن تلطيخ الهيماتوكسيلين إيوزين كان أكثر فاعلية في تحديد حالات داء الأميبات الناجم عن Entamoeba histolytica و Entamoeba dispar من طريقة التصور الجديدة (المحلول الملحي واللوغول) في المرضى الذين يعانون من مرض الإسهال الحاد.

كما ثبت أنه شديد الحساسية في الكشف عن كثرة الكريات الحمر (الأميبات التي ابتلعت كريات الدم الحمراء).

تلطيخ المقاطع النسيجية لتشخيص العدوى

Walwyn et al. ، في عام 2004 اقترح استخدام البقع النسيجية للكشف عن الكائنات الحية الدقيقة المسببة للعدوى.

باستخدام تلطيخ الهيماتوكسيلين إيوزين ، تمكنوا من تصور الالتهابات التي تسببها المطثيات ، أو الشعيات ، أو spirillae أو المبيضات. كما تمكنوا من ملاحظة وجود الطفيل Sarcoptes escabiei في أقسام الجلد والشوائب الفيروسية بواسطة الفيروس المضخم للخلايا والهربس في أقسام من الأنسجة المختلفة.

التقنيات

للعينات النسيجية

يمر تلطيخ القسم النسيجي بسلسلة من الخطوات. أول شيء هو الحصول على القسم النسيجي. يجب أن يكون هذا مشمعًا للحصول لاحقًا على جروح (فائقة الدقة) باستخدام مبضع. تتكون التقنية من الخطوات التالية:

1-التخلص من البرافين الزائد: لهذا يمكنك استخدام الزيلول أو Heme-D ، وتغطس لمدة 3-5 دقائق.

2- ترطيب العينة: ويتم ذلك بغمر العينة بتركيزات مختلفة من الكحول (الايثانول) بترتيب تنازلي (100 درجة ، 90 درجة ، 70 درجة). في جميع الأحوال لمدة 7 دقائق.

3-التخلص من الكحول الزائد: لذلك يتم غمره في الماء لمدة 7 دقائق.

4-تلطيخ بالهيموكسيلين: تغمر العينة لمدة 6-10 دقائق في صينية تحتوي على الهيماتوكسيلين. يعتمد وقت التعرض على حجم العينة وسمكها.

5-التخلص من الهيماتوكسيلين الزائد: يغسل بالماء لمدة 5 دقائق ثم يمر بسرعة (10-20 ثانية) عن طريق الكحول الحمضي. في وقت لاحق يتم غسله بالماء مرة أخرى لمدة 5 دقائق. ثم يتم غمره في الإيثانول عند 96 درجة لمدة دقيقة واحدة.

6- تلطيخ مع يوزين: لهذا يتم غمر العينة لمدة 5 دقائق في علبة اليوزين.

7- تجفيف العينة: لذلك يتم تمريرها من خلال صواني الكحول (الايثانول) مرة أخرى ولكن هذه المرة بترتيب تصاعدي. (70 درجة ، 90 درجة ، 100 درجة). (لمدة 5 ثوانٍ ، 5 ثوانٍ ، دقيقة واحدة على التوالي).

8-توضيح العينة: لهذا يتم تعريضها لمادة الزيلول لمدة 5-10 دقائق وتجفيفها للختم الدائم بالبلسم الكندي أو أي مادة أخرى مماثلة.

لعينات البراز تبحث عنه

يتم عمل مسحة على شريحة مع كرسي المريض وتثبيتها بنسبة 80٪ كحول لمدة 5 دقائق. تُغمر الورقة في الهيماتوكسيلين لمدة 5 دقائق وتُغسل بالماء على الفور.

بعد ذلك ، يتم غمرها بسرعة في الكحول الحمضي ثم في ماء الأمونيا. يغسل بالماء. يتم تلوينه لمدة 5 دقائق في يوزين. يتم تجفيف العينة كما هو موضح في الفن السابق وتشطف أخيرًا بالزيلين.

تحضير الكواشف

- الهيماتوكسيلين

في لتر واحد من الماء المقطر يذاب 50 جرام من البوتاسيوم أو كبريتات الألومنيوم الأمونيوم. عندما يذوب تمامًا ، أضف 1 جرام من الهيماتوكسيلين المتبلور. عند الذوبان التام ، يضاف 1 جم من حامض الستريك مع 50 جم من هيدرات الكلورال و 0.2 جم من يودات الصوديوم.

يُغلى الخليط لمدة 5 دقائق ، ثم يُترك ليبرد ويُصفى لإزالة أي جزيئات صلبة متبقية. يمكن استخدام الكاشف المحضر بهذه الطريقة على الفور.

- يوزين

يمكن تحضيره بقاعدة كحولية أو بقاعدة مائية.

يوزين كحولي

في 100 مل من الإيثانول عند 95 درجة يذوب 0.5 جرام من يوزين "Y". ثم أضف بضع قطرات من حمض الخليك الجليدي.

2٪ يوزين مائي

في 1250 مل من الماء المقطر يذوب 25 جرام من يوزين قابل للذوبان في الماء "Y". ثم أضف بضع قطرات من حمض الخليك الجليدي.

كحول حامض

قم بقياس 0.5 مل من حمض الهيدروكلوريك المركز واصنع ما يصل إلى 100 مل من الكحول المطلق.

مياه الأمونيا

قم بقياس 0.5 مل من الأمونيا المركزة وصنع ما يصل إلى 100 مل من الماء المقطر.

المراجع

1. نافاريتي ، جي. أنسجة الجلد. Rev Fac Med UNAM 2003 ؛ 46 (4): 130-133. متاح في: medigraphic.com
2. Gómez-Rivera N، Molina A، García M، Castillo J، Castillo J، García R، Fonseca I، Valenzuela O.
3. تحديد Entamoeba histolytica / E. ديسبار بتقنية الأميبا الطازجة مقابل تلطيخها بالهيماتوكسيلين يوزين في الإسهال الحاد. ريف ميكس بيدياتر 2005 ؛ 72 (3) ؛ 109-112. متاح في: medigraphic.com
4. Walwyn V، Iglesias M، Almarales M، Acosta N، Mera A، Cabrejas M. فائدة التقنيات النسيجية لتشخيص العدوى في العينات التشريحية. القس شبل ميد ميل ، 2004 ؛ 33 (2). متاح على: scielo.sld
5. كواشف PanReac AppliChem ITW. صبغة الهيماتوكسيلين إيوزين. 2017 ، إسبانيا. متاح على: itwreagents.com
6. يوزين. ويكيبيديا، الموسوعة الحرة. 7 نوفمبر 2018، 08:18 UTC. 4 أغسطس 2019، 22:13 en.wikipedia.org
7. "الهيماتوكسيلين". ويكيبيديا، الموسوعة الحرة. 3 مايو 2019، 11:23 UTC. 4 أغسطس 2019 ، 22:48 wikipedia.org