تلطيخ الكبسولة: الأساس المنطقي والتقنيات - مادة الاحياء - 2025

و كبسولة تلطيخ هي تقنية تلطيخ التفاضلية التي لديها ممتلكات بنية التوتر السكاريد المحيطة بعض البكتيريا والخمائر تسمى كبسولة. يتم استخدامه في المختبرات السريرية للمساعدة في تشخيص بعض الأمراض التي تسببها الكائنات الدقيقة المحتبسة.

يتم استخدامه أيضًا في مختبرات التدريس لإظهار هذا الهيكل المورفولوجي لطلاب وظائف العلوم الصحية ، مثل: الطب ، والتحليل الحيوي ، والتمريض ، أو التكنولوجيا الخلوية ، من بين أمور أخرى.

مسحة Klebsiella pneumoniae ملطخة بصبغة الكبسولة. طريقة الحبر الهندي مع الزعفران. المصدر: А.А.В

هناك عدة تقنيات بسيطة لإثبات وجود الكبسولة في الكائنات الحية الدقيقة التي تمتلكها ، وهي: البقعة السلبية ، وصمة عار أنتوني والمتغير الذي يجمع بين الاثنين السابقتين.

يستخدم التلوين السلبي بشكل أساسي في عينات السائل الدماغي النخاعي عند الاشتباه في وجود الخميرة المستخفية الحديثة. هذه الخميرة هي سبب شائع لالتهاب السحايا.

تستخدم هذه التقنية النيجروزين أو الحبر الهندي وتعتمد على خلق تباين بين خلفية المستحضر والكبسولة التي لا يمكن اختراقها للكائن الحي. الخلفية مظلمة والكبسولة عديمة اللون. بهذه الطريقة ، يتم الكشف عن هذا الهيكل.

فيما يتعلق بتقنية أنتوني ، يمكن القول أنها تستخدم في الغالب في المعامل التعليمية لإثبات بنية عديد السكاريد في البكتيريا مثل Klebsiella pneumoniae و Streptococcus pneumoniae و Neisseria meningitidis.

يعد استخدام هذه التقنية لأغراض التشخيص نادرًا جدًا ، نظرًا لوجود اختبارات روتينية أخرى تسمح بتحديد هذه الكائنات الدقيقة.

أساس

الكبسولة عبارة عن هيكل قوي ذو طبيعة عديد السكاريد. هذا يحمي الكائنات الدقيقة من البلعمة ، وبالتالي فهي بنية يصعب اختراقها.

هذا هو السبب في أن بقع الكبسولة تعتمد على التباين. تلطخ الملونات الجزء السفلي من المستحضر بينما تظل الكبسولة عديمة اللون.

لذلك ، من خلال هذه التقنيات ، يمكن التعرف على الكبسولة بسهولة. إذا لم يكن لدى الكائن الدقيق كبسولة ، فلن يمكن تمييزه بهذا النوع من التلوين ، لأن كل شيء سيكون ملطخًا بنفس اللون.

جميع التقنيات المستخدمة في تلوين الكبسولة لها نفس الأساس المنطقي على الرغم من استخدام الصبغات والإجراءات المختلفة.

تقنيات متساوية

وصمة عار أنتوني

تستخدم صبغة أنتوني البنفسجي الكريستالي كبقع. سيؤدي ذلك إلى تلطيخ الجسم البكتيري والخلفية باللون الأرجواني.

من ناحية أخرى ، يتم استخدام 20٪ كبريتات النحاس. يعمل هذا كحل للغسيل ، أي أنه يزيل بلورات البنفسج الزائدة من المستحضر ، مما يجعل الكبسولات صافية ولكن دون فقدان لون الجسم البكتيري أو الخلفية.

المواد

- حليب قزحي الرائحة.

- الانزلاق.

- كريستال بنفسجي 1٪.

- 20٪ كبريتات النحاس.

- مايكروسكوب بصري.

- زيت الغمر.

معالجة

تتكون هذه التقنية من:

1. زراعة الكائنات الحية الدقيقة في حليب قزحي الألوان لمدة 36 ساعة.
2. ضع قطرة من الثقافة في نهاية الشريحة وبجانبها ، ضع قطرة من الزجاج البنفسجي ، واخلطها وانشرها مع نهاية شريحة أخرى.
3. يجف في الهواء ولا يوضع في الحرارة.
4. يغسل بمحلول 20٪ كبريتات النحاس ، ويترك ليجف في الهواء.
5. مراقبة تحت المجهر بهدف الغمر. ابحث في نهايات السبريد.

من المهم عدم استخدام الحرارة لا للتثبيت أو التجفيف ، لأن ذلك يضر الكبسولة. أيضا لا تغسل بالماء.

ترجمة

حليب قزحي الألوان هو وسيلة استزراع ممتازة لأنه يوفر العناصر الغذائية اللازمة للكائن الحي لتطوير كبسولة بارزة.

من ناحية أخرى ، سيشكل الحليب المتقزح قاعًا سميكًا ومضغوطًا يتلون باللون الأرجواني جنبًا إلى جنب مع الجسم البكتيري ، لكن الكبسولة التي تحيط بالكائنات الحية الدقيقة ستظل عديمة اللون. لذلك ، لوحظ وجود هالة واضحة حول الجسم البكتيري.

تمثيل رسومي على الملاحظة المجهرية لمسحة Klebsiella pneumoniae الملطخة بصبغة أنتوني. المصدر: بقلم المؤلف ماجستير. مارييلسا جيل.

مميزات

إنها تقنية بسيطة لأداء. لا يتطلب الإصلاح.

أيضًا ، تجدر الإشارة إلى أنه يمكن استخدام وسائط الاستنبات الأخرى ، ولكن يفضل وسط الحليب لأنه يتمتع بميزة توفير كبسولات أكثر بروزًا.

سلبيات

إنها تقنية تتطلب عمالة أكثر بقليل من التلوين السلبي ، ويتطلب تصورها انتظار التحضير حتى يجف تمامًا.

- تلطيخ سلبي

المواد

- الشرائح.

- وسط الثقافة مع الكائنات الحية الدقيقة.

- حبر صيني أو نيجروزين.

- مايكروسكوب بصري.

- محلول ملحي فسيولوجي.

معالجة

ضع قطرة من المحلول الملحي الفسيولوجي على ساترة وحل جزء صغير من الثقافة الميكروبية. من المهم ألا يكون التحضير سميكًا جدًا. ثم ضع قطرة من الحبر الصيني أو النيجروزين واخلط.

ثم توضع ورقة ساترة فوق المستحضر دون تفيض السائل. لوحظ تحت المجهر بالتركيز أولاً على هدف 10x ثم الانتقال إلى 40X.

يمكن أيضًا استخدام هذه التقنية في عينات السائل الدماغي الشوكي مباشرة. أي ، بدلاً من وضع قطرة من الثقافة الميكروبية ، يتم وضع قطرة من السائل النخاعي.

مميزات

إنها طريقة بسيطة للأداء وفي نفس الوقت اقتصادية. لا يتطلب تثبيت أو تجفيف المستحضر.

سلبيات

العيب هو أنه يجب ملاحظته تحت المجهر قبل أن يجف المستحضر ، لأنه إذا حدث هذا فإن الكائنات الحية الدقيقة سوف تتقلص ، مما يجعل التخيل صعبًا.

من ناحية أخرى ، يمكن أن تحدث إيجابيات خاطئة إذا كان المحلل قليل الخبرة ، حيث غالبًا ما يتم الخلط بين الكريات البيض والخمائر.

يجب اعتبار ملاحظة كبسولات الخميرة بالحبر الصيني أو تقنية نيجروزين كتشخيص افتراضي للمكورات المستخفية الحديثة حتى يتم إثباتها مع المزرعة.

هذا بسبب وجود أنواع أخرى من الخمائر التي يمكن أن تكون سببًا لالتهاب السحايا وليس فقط المستخفيات المستخفية الحديثة ، مثل تلك التي تنتمي إلى جنس المبيضات والروديوتورولا ، بالإضافة إلى أنواع أخرى من المستخفيات.

ترجمة

إذا كانت هناك كائنات دقيقة في كبسولات ، فستلاحظ خلفية داكنة ، مع أجسام شفافة تطفو في السائل ، مما يبرز وجود الكبسولة.

كبسولة Cryptococcus neoformans ملطخة بالحبر الصيني. المصدر: Photo Credit: Content Provider (s): CDC / Dr. لينور هاي

- تقنية الحبر الهندي

يمكن إجراء هذه التقنية أيضًا باستخدام النيجروزين. إنه مزيج من التقنيات التي تم شرحها مسبقًا. تستخدم هذه التقنية الحبر البنفسجي الكريستالي والحبر الهندي أو النيجروزين.

يتحول الجسم البكتيري إلى اللون الأرجواني من اللون البنفسجي البلوري لأنه مشحون سالبًا ، بينما يلون النيجروزين قاع اللطاخة. إذا كانت البكتيريا تحتوي على كبسولة ، فستظهر على شكل هالة شفافة حول الكائن الدقيق.

يمكن استبدال اللون البنفسجي الكريستالي بأي من هذه الألوان: الزعفران أو الفوشسين الأساسي أو الأزرق الميثيلين.

المواد

- زجاج بنفسجي.

- حبر نيجروزين أو هندي.

- الشرائح.

- مجهر.

معالجة

- زراعة الكائنات الحية الدقيقة في وسط استزراع.

- ضع قطرة من الثقافة في نهاية الشريحة وبجانبها ، ضع قطرة من حبر الهند الكريستالي أو النيجروزين ، واخلطها وافردها مع نهاية شريحة أخرى.

- يجف بالهواء ولا يثبت بالحرارة.

- قم بتغطيته بمحلول بلوري بنفسجي لمدة دقيقة واحدة ، اغسله بالماء المقطر ولكن برفق شديد (نفث ناعم) ، اتركه يجف في الهواء الطلق.

- مراقبة تحت المجهر بهدف الغمر. ابحث في نهايات السبريد.

ترجمة

سيظهر جسم بكتيري أرجواني وخلفية داكنة. ستظهر الكبسولة ، إن وجدت ، عديمة اللون حول البكتيريا.

المراجع

1. Covadonga A ، Silóniz M ، Serrano S. التقنيات الأساسية لعلم الأحياء الدقيقة. مراقبة البكتيريا. Reduca (علم الأحياء). سلسلة علم الأحياء الدقيقة. 2010 ؛ 3 (5): 15-38. د
2. López-Jácome L، Hernández-Durán M، Colín-Castro C، Ortega-Peña S، Cerón-González G، Franco-Cendejas R. البقع الأساسية في مختبر علم الأحياء الدقيقة. Mediagraphic.org. 2014 ؛ 3 (1): 10-18. متاح في: medigraphic.com
3. تلطيخ سلبي جيل إم: الأساس المنطقي والتقنية والمزايا والعيوب. Lifeder.com.
4. Forbes B، Sahm D، Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 إد. الأرجنتين. التحرير Panamericana SA
5. تانكشوار أ. صبغة الكبسولة: المبدأ ، الإجراء والنتائج. 2019. دليل الأحياء الدقيقة الطبية. متوفر في: microbeonline.com