SAFRANIN: الخصائص والاستخدام والتقنيات والسمية - كيمياء - 2025

و سفرانين هو صبغ meriquinoide، التي سميت باسم التركيب الكيميائي لها وجود اثنين من حلقات مركب بنزيني ومن 2 حلقات كينويد، و هذا الأخير هو تلك التي توفر لون أحمر.

ويسمى أيضًا ثنائي ميثيل سافرانين أو الأحمر الأساسي 2 في شكله المختصر ، نظرًا لأن اسمه العلمي هو 3،7-ديامينو-2،8-ثنائي ميثيل-5-فينيل-فينازينيوم كلورو ثنائي ميثيل سافرانين والصيغة الكيميائية هي C ₂₀ H ₁₉ N ₄ Cl.

التركيب الكيميائي للسافرانين يشير إلى حلقات البنزينويد والكينويد / محلول مائي من سافرانين. المصدر: NEUROtiker حرره ماجستير. مارييلسا جيل / LHcheM

يوجد متغير يسمى تريميثيل سافرانين ولكن لا يوجد فرق كبير بين المادتين.

الصفران هو صبغة أحادية اللون ، واعتمادًا على خصائص الصيغة الكيميائية ، تعتبر مادة موجبة الشحنة. لذلك ، لديها انجذاب للبنى سالبة الشحنة. ستكون هذه الهياكل ملطخة باللون الأحمر.

تمنح هذه الخاصية قابلية التطبيق في العديد من التقنيات النسيجية لتلطيخ الهياكل الخلوية المختلفة ، سواء من الكائنات حقيقية النواة أو الكائنات بدائية النواة.

يستخدم Safranin كصبغة تباين في تقنيات مهمة ومعروفة للاستخدام الروتيني في علم الجراثيم. هذه التقنيات هي: صبغة غرام هاكر ، صبغة شيفر فولتون للجراثيم أو تلطيخ الكبسولات البكتيرية ، من بين أمور أخرى.

مميزات

كان لون الزعفران (أحد التوابل المأخوذة من وصمات زهرة Crocus sativus) مصدر إلهام لتسمية هذه الصبغة. يأتي اسم الزعفران من مصطلح الزعفران. ويرجع ذلك إلى التشابه الكبير بين لون الزعفران والتلوين الذي توفره هذه الصبغة.

يتوفر Safranin على شكل بلورات أو مسحوق ، وكلاهما قابل للذوبان في الماء. صبغة الزعفران عديمة الرائحة. بقع الهياكل حمراء. تسمى الهياكل التي تجذب صبغة الزعفران باسم safranophiles.

من الناحية الهيكلية ، السافرانين معقد ، وله حلقتان بنزينويد في النهايات وفي الوسط توجد حلقتان كينويد حيث يوجد N ⁺ الكاتيون. مركز الهيكل هو النظام المسؤول عن توفير اللون. بسبب هذه الخاصية ، تم تصنيف هذا التلوين ضمن الفئة الثانية.

استعمال

يستخدم Safranin لصبغ الهياكل المختلفة. يسلط الضوء بشكل خاص على خلايا Kulchitsky الموجودة في الجهاز الهضمي ، والتي تسمى أيضًا خلايا enterochromaffin.

إنه قادر على تلطيخ الكائنات الحية الدقيقة التي تنتمي إلى عائلة الريكتسيات. وبالمثل ، يتم استخدامه في تقنيات مختلفة ، مثل طريقة كوستر ، وهي طريقة معدلة تستخدم لتلطيخ البكتيريا من جنس البروسيلا.

من ناحية أخرى ، يتم استخدام Safranin في تقنية Schaeffer Fulton spore staining وفي تلطيخ Gram-Hucker. في كلا التقنيتين ، يعمل السافرانين كصبغة متباينة.

في الأول ، تأخذ الجراثيم لون أخضر الملاكيت وبقية الهياكل حمراء بواسطة السافرانين. في الثانية ، تفقد البكتيريا سالبة الجرام لون الكريستال البنفسجي في خطوة تغيير اللون ، وبالتالي فإن السافرانين هو الذي يلوث البكتيريا سالبة الجرام باللون الأحمر.

بالإضافة إلى ذلك ، يستخدم السافرانين في علم الجراثيم لتحضير وسط البروسيلا أجار مع تخفيف سافران 1: 5000. تعمل هذه الوسيلة على تمييز أنواع البروسيلا السويسرية عن باقي الأنواع. تنمو البروسيلا ميليتنسيس والبروسيلا أبورتس على هذا الوسط ولكن بكتيريا البروسيلا السويسرية ممنوعة.

في مجال الصناعات الزراعية ، استخدم السفرانين بنسبة 2.25٪ وتم تخفيفه بنسبة 1:10 لتلطيخ عينات جذع نبات قصب السكر.

يتأثر هذا النبات عادة بالبكتيريا Leifsonia xyli subsp. xyli ، الذي يضر نسيج الخشب من النبات. يتم تقييم السيقان الملطخة لتحديد وظيفة أوعية النسيج الخشبي.

تقنيات في مجال علم الجراثيم

صبغة Castañeda لتلطيخ r

يتم وضع مسحة من الدم أو الأنسجة في محلول منظم (عازلة الفوسفات درجة الحموضة 7.6). اتركيه ليجف تلقائيًا ثم غطيه بأزرق الميثيلين لمدة 3 دقائق وصبغه بالسافرانين. لون الريكتسيا أزرق يتناقض مع الخلفية الحمراء.

كوستر معدلة ل

يتم عمل مسحة وإشعالها في الولاعة للتثبيت. بعد ذلك ، يتم تغطيته بخليط من جزأين من سافرانين مائي مشبع بثلاثة أجزاء من 1 مول / لتر محلول KOH ، لمدة دقيقة واحدة. يتم الغسل بماء مقطر وملطخ بنسبة 1٪ كاربوليك ميثيلين أزرق.

إذا كانت العينة تحتوي على بكتيريا من جنس البروسيلا ، فستظهر باللون البرتقالي على خلفية زرقاء.

تلطيخ كبسولة جرثومية

خليط من المعلق البكتيري مصنوع من الحبر الهندي ويضاف السفرانين. تحت المجهر ، سترى هالة حمراء حول كل كبسولة بكتيرية بخلفية سوداء.

تلطيخ بوغ

يتم انتشار مع تعليق البكتيريا. ثم يتم إصلاحه للتسخين. وهي مغطاة ب 5٪ من اخضر الملاكيت ، وتشتعل بشكل متكرر حتى انبعاث أبخرة. تتكرر العملية لمدة 6-10 دقائق. أخيرًا ، يتم غسلها بالماء وتطهيرها بـ 0.5٪ سافرين لمدة 30 ثانية. البقعة حمراء والجراثيم خضراء.

صبغة غرام هاكر

مسحة مصنوعة من تعليق بكتيري وتثبت في الحرارة. غطي الشريحة بالكريستال البنفسجي لمدة دقيقة واحدة. ثم يوضع اللوغول كحل لاذع لمدة دقيقة واحدة. بعد ذلك ، يتم تبييضه باستخدام كحول الأسيتون وأخيراً يتم مواجهته بالسافرانين لمدة 30 ثانية.

البكتيريا موجبة الجرام تلطخ البنفسجي المزرق والبكتيريا الحمراء سالبة الجرام.

توقفت بعض المعامل عن استخدام تقنية جرام-هاكر لاعتماد تقنية جرام-كوبيلوف المعدلة. في الأخير ، يتم استبدال safranin بـ fuchsin الأساسي. وذلك لأن السافرانين يلطخ بشكل ضعيف الأنواع من Legionella و Campylobacter و Brucella.

تقنيات في مجال علم الأنسجة

تلطيخ الخلية Kulchitsky (enterochromaffins)

أقسام الأنسجة من الجهاز الهضمي ملطخة بكلوريد الفضة. ثم يتم إزالة لونه باستخدام ثيوسلفات الصوديوم وأخيراً يتم مواجهته بالسافرانين.

تتميز خلايا Kulchitsky بوجود حبيبات بنية مسودة.

بقعة هشاشة العظام

نظرًا لأن السافرانين له شحنة موجبة ، فإنه يرتبط جيدًا بمجموعات الكربوكسيل والكبريتات في الجليكوزامينوجليكان. هذه جزء من البروتيوغليكان التي تشكل الغضروف المفصلي. بهذا المعنى ، عند التلوين باستخدام safranin O ، من الممكن تحديد ما إذا كان هناك فقدان للغضروف أم لا.

يمكن قياس فقدان الأنسجة الغضروفية باستخدام مقياس مانكين أو يُسمى أيضًا مقياس هشاشة العظام.

يتم شرح هذه التقنية أدناه: يتم غمر القسم النسيجي في صينية بمحلول هيماتوكسيلين الحديدي من Weigert ، ثم يمر عبر الكحول الحمضي ويغسل بالماء.

استمر في عملية التلوين بغمر الورقة في اللون الأخضر السريع ، ثم يتم غسلها بحمض الأسيتيك والآن يتم غمرها في Safranin O. ولإنهاء العملية يتم تجفيفها باستخدام الكحول بتركيزات مختلفة بترتيب تصاعدي. تتطلب الخطوة الأخيرة زيلين أو زيلين لتوضيح العينة.

يتم تكييف الشرائح بلسم كندا أو ما شابه ذلك ليتم ملاحظتها تحت المجهر.

باستخدام هذه التقنية ، تكون النوى مصبوغة باللون الأسود ، والعظام باللون الأخضر والغضاريف حيث توجد البروتيوغليكان باللون الأحمر.

وصمة عار لتحديد الطحالب الكبيرة

اقترح بيريز وآخرون في عام 2003 تقنية بسيطة وغير مكلفة لصبغ الطحالب الكبيرة. يتم تحضير العينات في أقسام نسيجية برافين. يتم إصلاح المقاطع بنسبة 1٪ جلسرين ، مما يسمح لها بالجفاف تمامًا. ثم يتم وضعه في الزيلول لإزالة البارافين.

تتم إعادة ترطيب القسم بتمريره عبر سلسلة من الصواني التي تحتوي على الإيثانول بدرجات مختلفة من التركيز (ترتيب تنازلي) ، لمدة دقيقتين في كل منها.

بعد ذلك ، يتم تلطيخها لمدة 5 دقائق بمزيج 3: 1 من 1٪ سافرانين مع 1٪ أزرق تولويدين ، وكلاهما محضر بـ 50٪ إيثانول. تضاف ثلاث قطرات من حمض البيكريك إلى الخليط ، والذي يعمل بمثابة مادة لاذعة.

ثم يتم تجفيفه بالمرور عبر صواني الكحول مرة أخرى ، ولكن هذه المرة بشكل تصاعدي. أخيرًا ، يتم شطفه بالزيلول ويتم تحضير العينة بلسم كندا ليتم ملاحظتها.

تسمم

لحسن الحظ ، السفرانين صبغة لا تشكل خطرا على من يتعامل معها. وهو ملوِّن غير ضار ، وهو غير مُسرطن وغير قابل للاشتعال.

يمكن أن يؤدي التلامس المباشر مع الجلد أو الغشاء المخاطي إلى احمرار طفيف في المنطقة ، دون حدوث مضاعفات كبيرة. لهذا ، يوصى بغسل المنطقة المصابة بالكثير من الماء.

المراجع

1. García H. Colorante safranina O. Technician in health، 2012؛ 1 (2): 83-85. متاح في: medigraphic.com
2. صبغة جيل إم غرام: الأساس والمواد والتقنية والاستخدامات. 2019 متاح على: lifeder.com
3. تلطيخ جيل إم سبور: الأساس المنطقي والتقنيات والاستخدامات. 2019 متاح على: lifeder.com
4. سافرانينا ". ويكيبيديا، الموسوعة الحرة. 7 آذار (مارس) 2017 ، الساعة 10:39 بالتوقيت العالمي المنسق. 3 أغسطس 2019، 20:49 en.wikipedia.org
5. Pérez-Cortéz S، Vera B، Sánchez C. تقنية تلطيخ مفيدة في التفسير التشريحي لـ Gracilariopsis tenuifrons و Gracilaria chilensis (Rhodophyta). عمل بوت. فنزويلا. 2003 ؛ 26 (2): 237-244. متاح على: scielo.org.
6. كنيسة أليكا ، بيرالتا إستر ليليا ، ألفاريز إلبا ، ميليان جيه ، ماتوس ماديو. علاقة وظائف أوعية نسيج الخشب ووجود Leifsonia xyli subsp. xyli. حماية القس. 2007 ؛ 22 (1): 65-65. متاح على: scielo.sld